Вакцина для профилактики некробактериоза крупного рогатого скота Советский патент 1993 года по МПК A61K39/02 A61K37/02 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности, к способу изготовления вакцины для специфической профилактики некробактериоза крупного рогатого скота.

Профилактика некробактериоза направлена на соблюдение ветеринарно-санитар- ных мероприятий, которые не являются эффективными. Специфическая профилактика данного заболевания крупного рогатого скота в нашей стране не разработана. В связи с этим становится очевидным актуальность специфических мер профилактики и борьбы с некробактериозом крупного рогатого скота.

Цель работы - получение вакцины, обеспечивающей повышение напряженности иммунитета против возбудителей некробактериоза и расширения спектра профилактического действия.

Для этого в качестве антигенов в состав вакцины дополнительно вводят инактИвиро- ванные формалином антигены Staphllococcus aureus и Clostridium perfringens типа А при

лЭ

следующем соотношении компонентов (в мл):

инактивированный

формалином атиген

Fusobakterlum

necrophorum,

содержащий 1...2х10а

микробных тел в мл 40,0...50,0

инактивированный

формалином антиген

Corunebacterlum puogenes,

содержащий 109 микробных тел в мл20,0...30,0

инактивированный

формалином антиген

Staphllococcus aureus,

содержащий 2 х 109 микробных тел в мл40,0...50,0

инактивированный

формалином антиген

Cldstrldlum perfringens.

тип А, содержащий 2x109

микробных тел в мл 60,0...70,0

содержащий 2x109 ми&

Ё

00

со ел ьо о ел

кробных тел в мл60,0...70,0

гидроокись алюминия 5,0...6,0

ГМДП (М-ацетилглюкозаминил (/ 1-4J-Nацетилмурамил-ала-

нин-Д-изоглутамин

-100% р-р60,0...240,0

анатоксин Staphylococcus

aureus типа А активностью 15...20 единиц

связывания в мл с 0,2%

формалинадо 1000,0

Способ осуществляется следующим образом:

После выращивания вакцины на пита- тельных средах (по общепринятым методикам) проводят инактивацию возбудителей Clostrldium perfrlngens тип Д Staphylococcus aureus, Corynebacterlum pyogenes, Fucobacterlum necroforum.

В табл.1 приведены данные по выбору режима инактивации возбудителей формалином. Как видно из табл.1, полная инактивация микобактерий . Cl.perfrlngens, F.necrophorum достигается при высевах на МПБ, МПА, МППБ и тиогликолевую среду С добавлением 0,2% формалина при в течение 42-48 часов; St. aureus - при добавлении 0,2 % при 26-27°С в течение 20-24 часов.

После инактивации возбудителей проводят центрифугирование при 3 тыс. об/мин в течение 30 мин с целью получения антигенов. Надосадочную жидкость оставляют только у Cl.perfrlngens тип А для пол- учения анатоксина, у всех остальных возбудителей удаляли.

Оптимальные соотношения концентрированных инактивированных антигенов определяют по титру антител (РА) в сыворотке крови, полученной на 21 день после вакцинации кроликов (табл.2).

Из данных табл.2 следует, что при изготовлении вакцины концентрированные ан- тигены Fusobacterium necroforum, Corynobacterium pyogenes, St. aureus, Clostridlum prfrlngens Тип А берут в соотношении 0,8...1,0; 0.8... 1.0: 2,0...2,5; 2,0...2,5.

Антигены разводят в анатоксине CI, perfringens, содержащем 0,2% формалина, добавляют адьювант - гидроокись алюминия в 0,5-0,6%, ГМДП в бт-24% к общему объему.

Полученную вакцину после проверки на стерильность, безвредность в лабораторных условиях проверяют на активность на крупном рогатом скоте.

Эффективность способа оценивали по снижению количества вновь заболевших

животных, показателям иммунологических и серологических исследований.

Предложенная вакцина апробирована на 1695 коровах и нетелях с положительными результатами в 1988-1989 гг.

Конкретные примеры отражены в табл.3, 4.

Анализируя данные таблицы 3 видно, что вакцина ВИЭВ профилактирует это заболевание у животных. Во 2-ой группе заболело одно животное, в 3-ей (где вводили вакцину в ГМДП) - вновь заболевших не было тогда, как в 1-ой (вакцина Памавак - прототип) заболело 3 животных, а в контроле - 8.

Показатели клеточного иммунитета (табл.4) коррелируют с данными клинического исследования животных, которые показывают, что применение вакцины ВИЭВ против некробактериоза в сочетании с ГМДП активизирует систему фазоцитоза, которая является центральным звеном в развертывании иммунологических реакций. Так в группах 2, 3 после вакцинации фагоцитарная активность были в среднем в 1,5-2 раза выше, чем в группах 1-4.

Активизация макрофагов оказывает стимулирующее воздействие на субпопуля- ции лимфоцитов. Содержание Т-лимфоци- тов в группах 2-3 в среднем в 1,5 раза выше, чем в 1-4 группах,. В связи с этим закономерно повышение уровня иммуноглобулинов М и С в сыворотке крови животных.

Предложенный способ изготовления вакцины из возбудителей нгекробактериоза, циркулирующих на территории страны, расширяет ее спектр действия, введение препарата ГМДП совместно с вакциной повышает ее иммуногенность, резко сократит число заболевших хоров с тяжелой и средне степенью поражения конечностей.

Вакцина, полученная из возбудителей некробактериоза, циркулирующих на территории СССР и способ ее использования совместно с иммуностимулятором ГМДП (или препаратом) при профилактике некррбакте- риоэа крупного рогатого скота найдет применение в животноводческих хозяйствах по выращиванию рогатого скота.

Формула изобретения

Вакцина для профилактики некробактериоза крупного рогатого скота, включающая инактивированные формалином антигены Fusobacterium necrophorum и Corynebacterium pygenes, отличающаяся тем. что, с целью повышения напряженности иммунитета против возбудителей некробактериоза и расширения спектра профилактического

действия, э качестве антигенов в состав вакцины дополнительно вводят инактивирован- ные формалином антигены Staphylococcus aureus и Clostrldium perflngens типа А, гидроокись алюминия, анатоксин Clostridlum perfingens типа А и М-ацетилглюкозоминил (($ 1-4)-М-ацетилмурамил-аланин-О-изрглута- мин, 100-ный раствор при следующем соотношении компонентов, мл:

инактивированный формалином антиген Fusobacterium necroptiorum, содержащий 1...2 х 10 микробных тел в 1 мл инактивированный ф ормалином антиген Corynebacterium pyogenes, содержащи

V3

10 микробных тел в 1 мл

инактивированный

формалином антиген

Staphylococcus

aureus, содержащий 2x109 микробных тел

в 1 мл- 40,0-50,0;

инактивированный

формалином антиген Clostrldium

0 perflngens типа А, содержащий 2х109 микробных

тел в 1 мл- 60,0-70.0;

гидроокись алюминия - 5,0-6,0;

Н;ацетилглюкозоминил 5 (01-4)-М-ацетилмурамилаланин-О-изоглутамин,

100%-ный раствор - 60-240;

анатоксин Clostridlum

perflngens типа А активностью 15-20 единиц

связывания а 1 мл с

0,2% формалина-до 1000,0.

Использование; ветеринарная микробиология, профилактика и лечение некробак- териоза крупного рогатого скота. Сущность изобретения: вакцина включает инактивиро- ванные формалином возбудители Ctostrldlum perflngens типа A, Staphyfococcus aureus, Corynebacterium pyogenes, Fusobacterlum necrophorum в определенных соотношениях, ,c добавлением адъюванта - гидроокиси алюминия и анатоксина Clostrldlum perflngens типа А, табл.4.

Режим инактивации возбудителей формалином

Таблица 2 Определение оптимального соотношения инактивированных антигенов в вакцине

Таблица 1

Сравнительная профилактическая эффективность вакцины ВИЭВ при некробактериозе крупного рогатого скота

Примечание: - тяжелая степень заболевания; V средняя степень заоолевания.

. .- ..Таблица 4

Уромнь фагоцитарной «томности, содержание Т-. лимфоцит « ироаи и иммуноглобулине Си М еиюротке «рови опытник животных

Таблица 3