Способ получения красителя кислотного ярко-синего Советский патент 1993 года по МПК C09B11/20 

Изобретение относится к органической химии, а именно к технологии получения красителя кислотного ярко-синего (С01. 2660), который широко применяется в микробиологии для анализа иммунных преципитатов при электрофорезе.

Для более тонкой и дифференцированной характеристики преципитата окрашивание белков должно быть контрастным, интенсивным, высокочувствительным Эффективность окрашивания зависит от качества красителя, основным показателем чистоты которого является молярный коэффициент при максимуме светопоглощения его водного раствора.

.Для высокочувствительных анализов молярный коэффициент светопоглощения при длине волны 552 нм должен быть не менее 7,0 -Ю4

Однако образцы красителя, получаемые .известными методами, содержат целый ряд примесей окрашенных и неокрашенных органических веществ неиз- (вестного строения, а также значитель- ное количество неорганических примесей.

Недостаточная чистота влияет на связывание красителя с белком и затрудняет его практическое применение Окрашивание полос должно быть интенсивным и четким Количественная ин00

со ел

N

Р ФОтл Ил данных, полученных при Ф.,шип,-;;;;:Н fejMcon, бывает зотрудно™ ц гели проситель не icworeufcii, т.е.. f продстопппет собой ипдииидуальное к

ЛМИЧеСКО-: 1)0:ЦеСТВО.

П кйтологе фирмы Serva (ФРГ) | ли аналогичного кислотному ярко-си- ему кр-чсителя Serva Blue P, указан олнрный К о.-хЬфнциент свстопоглоще- 0 ил под: его раствора i,/ 104 при дли- с полны И.2 им,

Ьыли г-ксп ериментзльно определены олярные .,Лициснть светогюглощения РИ 552.1-2 им оодного раствора образ- fg ов красителя фирмы Blo-Rad (США) , фирмы Fluka (Швейцария) - ,3-10 и фирмы Serva (ФРГ) 4,7-10 «

Краситель может быть синтезирован агревакием n-феиетидина при тегиперз- 20 уре 120-130°С с зелеными диамино- риарил-метанов ыми красителями, полу- енными конденсацией Н-зтил-N -(3 сульфофекил)метил анилима -с параза- гщенными бензальдегидами, в част- 25 ости с г,хлорбензальдегидом, п-нит- обензальдегидом или анисовым альде- ндом.

Наиболее близким к предложенному :пособу по технологии и достигаемому 30 (езультату является способ получения срасителя кислотного ярко-синего С.1с42б60) путем конденсации диами- {отриарилмгтанового красителя Кислотный зеленый 2Ж с n-фенетидином ос з присутстЕии кислых катализаторов, з качества катализатора применяют ;оляную кислоту или нитротолуолсуль- рокислоту реакцию проводят при температуре 120-130°С. Выход целевого д 1родукта s описании изобретения не указан, показатели качества отсутствуют -«, Проведенная проверка метода, описанного а прототипе, показала, что он не позволяет получить краси- 45 тель с молярным коэффициентом саето- погло екил при чм выше ,0-10 „ Выход 4ejiecoro продукта не превышает 0% от теоретического в связи с тем, что при использовании кислотных катализаторов образуется большое количество побочных продуктов, происходит осмоленис и спекание реакционной «зссы„

Цель ИЈ5обретенил является повышение чистоты красителя Кислотного ярко-синего,

Поставленная цель достигается тем, что реакцию исходных зеленых

50

55

красителей с n-фенетидином.проводят в присутствии вторичных или третичных ароматических или гетероциклических аминов (Н -диметиланилин, пири- дин„еб-пиколин, хинолин) при 80- 100°С,

В реакцию с h-фенетидином можно вводить различные зеленые диамино- триарилметановые красители (см. таблицу) . При проведении реакция с кислотным зеленым 2Ж (смесь изомеров) молярный коэффициент водного раство-, ра красителя достигает 6, длине волны нм„

При введении в реакцию зеленых диаминотриарилметановых красителей I, IIf III, содержащих сульфогруп- пы в бензильных радикалах в метапо- ложении, получены образцы с молярным коэффициентом светопоглощения (8,0- 8,5) --10 дм3- моль -см при 552+1 нм„.

Выход красителя составляет 65-70%„

Примеры 1-10. 100 г (0,1А моль) зеленого красителя, 288 г (2,10 моль) n-фенетидина и 100 см3 амина (Н -диметиланилина, N-метил- анилина,oi-пиколина, пиридина, хи- нолина) нагревают при перемешивании ч при температуре 80-100UC.

Реакционную массу выливают в раз бавленную соляную кислоту, перемеши- взют и охлажлают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают водой, сушат при температуре Ю5°С0 Высушенный краситель промывают ацетоном, а затем переводят в натриевую соль, применяя известные методы0

Выходы и молярные коэффициенты поглощения водных растворов красителя кислотного ярко-синего приведены в таблице для соответствующих аминов и заместителей у зеленого красителя.

Формула исходного соединения

P CH2-N- C N-CH2- 2

R O.S

С,Н«

СоН

2П5

SO,

Формула изобретения

Способ получения красителя кислотного ярко-синего путем взаимодействия триарилметанового красителя с n-фенетидином, отличающий- с я тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта, в качестве триприлметпнового красителя используют соединение общей формулы

P CH2-N- C N-CH2- 2

R O.S

С,Н«

СоН

2П5

SO,

Использование: способ получения красителя кислотного ярко-синего, используемого в микробиологии для анализа иммунных преципитатов при электрофорезе. Сущность изобретения: способ получения красителя кислотного ярко-синего заключается в том, что триарилметановый зеленый краситель подвергают взаимодействию с п-фенети- дином в присутствии вторичного или третичного ароматического или гетероциклического амина - М,М-диметил- анилина или пиридина, или о -пиколина, или хинолина. Выход красителя 62-70%, молярный коэффициент светопоглощения водного раствора красителя составляет (8,0-8,5) .Ш дм3-моль- .см- при 552 нм. 1 табл. Ё