Способ получения твердофазного реагента Советский патент 1993 года по МПК C08F12/14 C08F8/10 C07K1/04 

Изобретение относится к способам получения твёрдофазного реагента, который содержит аллиловые боковые цепи, предназначенного для синтеза пептидов, глико- пептидов или протеинов.

Целью предлагаемого изобретения является получение твёрдофазного реагента для синтеза в твердой фазе пептидов и гли- копептидов, при котором пептиды и глико- пептиды могут быть отщеплены от полимерного носителя селективно и в таких мягких условиях, при которых никакого расщепления гликозидных связей или аноме- ризаций не происходит,

Поставленная цель достигается предлагаемым способом получения твёрдофазного реагента, заключающимся в том, что органический полимер, содержащий амипометиль- ные группы, обрабатывают соединением формулы: В - CR2 CRi - СН2Х, где В - органический радикал с концевой карбоксильной группой, RI и RZ имеют одинаковые или различные значения и означают водород, алкил, а X - гидроксил или галоге.

В результате синтезируют полимер, содержащий боковые аллиловые группы, формулы

Р + R3 - CR2 CRi - СН2Х/П, (I)

где Ra - спейсер, RI, RZ и X имеют указанные выше значения.

С использованием синтезированного реагента осуществляют синтез незащищенных или частично защищенных пептидов, гликопептидов, нуклеотидов, гидроксикар- боновох кислот, бикарбоновых кислот или трикарбоновых кислот.

Вследствие исключительно мягких условий отщепления по изобретению возможно селективно отщеплять пептиды, нуклеотиды и другие остатки, без разрыва гликозидных связей или аномеризиции, или изомеризации.

Твердофазный реагент по изобретению можно использовать также в качестве твердой фазы в других технологиях в твердой фазе, например, для синтеза олигонуклео- тидов, которые при необходимости могут .быть дополнительно нарощены энзимным путем, например, до определенных последовательной ДНК, для последовательного анализа, а также при реакциях, при которых энзимы, каталитически действующие кислоты Льюиса, редоксинные системы и тому подо00Сл 00 00

к о

OJ

бное за счет иммобилизации в результате адсорбции, полимеризации, пробкообразо- вания и т.п. приводятся к твердому виду, что облегчает дозировку; дальнейшую обработку и отделение продуктов реакции.

Синтез полимерных носителей с алли- ловыми анкерными группами.

Для синтеза полимеров общей формулы I с боковыми цепочками, которые несут ал- лиловые группы, можно использовать например, хлорметилированный полистирол, который с помощью фталимид-калия через производные фталоиламида переводят в аминометилполистирол. .

Аминометилированный полистирол превращают в соединение общей формулы I, при реакции с соединениями ацила и ал- кила, которые имеют терминальную группу аллил-галогенида, сложного эфира или спирта, например, с 4-бромкротоновой кислотой, в присутствии дициклогексилкарбо- диимида (DCC) и 4-диметиламинопиридина (DMAP).

-dH2NH BrdHrdH dH2

-воиг Цо

-NHCoCH dH-dH2Br

Вместо бромкротоновой кислоты можно использовать более длинноцепочечные замещенные аллилом алкенкарбоновые кислоты, например, с формулой Х-СНа-СН СН-(СН2)к-СООН, где X - является бромом, а к - например, равен 0 или 7.

Для иллюстрации изобретения приведены следующие примеры.

П р и м е р 1.2 г аминометилированного полистирола (0,8 мэквив. NH2/r смолы) Б 40 мл абсолютного метиленхлорида перемешивают при комнатной температуре в течение около 16 часов с N-Br-9-ундеценовой кислотой (6 ммоль) в присутствии дицикло- гексилкарбомида (DCC) (7,5 ммоль) и (4-ди- метиламинопиридана (DMAP) (1,65 ммоль). При этом согласно приведенному ниже уравнению реакций получают твердую фазу с аллильной боковой цепью. После отфиль- тровывания продукта реакции последний промывают метиленхлоридом, метанолом, диметилформамидом и еще раз метиленхлоридом, после чего проводят сушку в высоком вакууме при температуре 30°С.

сн -ЧоУ CHЈN v3rdH2- c H dHdH2

Нсн2ГеоонМ&

107

СН2Вг

-Сн2-мн(3о |анг|-сн е н

15

П р и м е р 2. Способ осуществляют в соответствии с примером 1, но только с тем отличием, что вместо М бром-9-ундецено- вой кислоты применяют 4-хлоркротоновую

20 кислоту.

О -dHENH2 - dtdH2-d

30-C0OH ffdHW ciH,o-dH

35

f

NHCO

П р и м е р 3. Способ осуществляют в соответствии с примером 1, но с тем отличием, что вместо N-бром-Э-ундеценовой кислоты применяют 4-гидроксикротоновую кислоту, 4-гидроксикротоновую кислоту в форме третичного бутилового эфира, который получают из 4-бромкротоновой кислоты

при помощи трет.бутилата калия.

o/-dH2NH2+(CH3)3codHrdH

СН2

н-Соои вЦо -dH2NHCQ-dH dH-tiH2od(CHj)r

П р и м е р 4. Синтез активированного или способного к активации полимерного носителя с аллиловыми анкерными группами,

М-{4-бромкротоноил}-аминометил полистирол 5

2 г аминометилполистирола (0,8 моля эквив. NHa) г смолы размешивают в 40 мл абсолютного дихлорметана с 1,02 г (6,2 ми- лимоля) 4-бромкротоновой кислоты, 0,2 г (1,65 миллимоля) 4-диметиламинпиридина и 1,53 г (7,5 ммоля) N.N-дициклогексилкарбо- диимида в течение 12 часов при комнатной температуре,- Затем полимер отфильтровывают, промывают дихлорметаном, метанолом, диметилформамидом и снова дихлорметаном и сушат под высоким вакуумом приЗО°С.

Формула изобретения

Способ получения твердофаэного реагента взаимодействием органического пол- имера, содержащего радикалы с концевыми аминометильными группами, с органическим соединением, взаимодействующим с указанными группами, отличающийся тем, что, с целью улучшения технологии син- теза пептидов с использованием реагента, в качестве органического соединения используют соединение общей формулы

В - CR2 CRi - CH2X,

где В - органический радикал с концевой карбоксильной группой;

RI и Ra - одинаковые или различные значения и означают водород, а л кил;

X - гидроксмл или галоген.

Использование: синтез реагента для синтеза в твердой фазе пептидов, гликопеп- тидов и протеинов. Сущность изобретения: взаимодействие органического полимера, содержащего радикалы с концевыми амино- метильными группами с соединением формулы BCR2-CR1-CH2-CH2X, где В2 - органический радикал с концевой карбоксильной группой, RI и R2 имеют одинаковые или различные значения и означают водород, алкил; X - гидроксил или галоген.