"Штамм бактерий СIтRовастеR FReUNDII - продуцент антигена "фракция 1" чумного микроба" Советский патент 1993 года по МПК C12N1/20 

ел

с

Использование: медицинская микробиология, продуцент антигена фракция I чумного микроба. Сущность изобретения: штамм получен в результате передачи бактериями штамма citrobacter freuridii 19/,3808 fra-генов возбудителя чумы в составе рекомбинантной плазмиды pLS759. Штамм депонирован в государственном научно-исследовательском противочумном институте Микроб. Штамм citrobacter freundii KMI рекомендуется-использоватьЪ качестве стабильного продуцента антигена фракция I чумного микроба на искусственных питательных средах.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к продуцентам антигена чумного микроба, и представляет собой штамм Citrobacter freundii, способный к продукции внеклеточного белка чумного микроба.

Цель изобретения - новый штамм Citrobacter freundii KMI, способный продуцировать капсульный антиген (фракция I) чумного микроба с повышенной иммунохимической и протективной активностью, авирулентный для лабораторных животных.

Штамм-продуцент был получен в результате передачи fra-генов чумного микроба в составе рекомбингантной плазмиды pLS 759 в штамм Citrobacter freundii 19/3808.

Культурально-морфологические и биохимические признаки. Клетки штамма-продуцента грамотрицательные, подвижные

палочки с перитрихиальными жгутиками, некапсулированные. На поверхности агара LB или Хоттингера (рН 7,2) формируют колонии в R-форме, а в бульоне дают равномерное помутнение среды. Глюкозу и другие углеводы сбраживают с образованием кислоты и газа. Лактозу сбраживают с задержкой. Не лизируются чумным диагностическим Л-413 и псевдотуберкулезным фагами. Не агглютинируются чумной диагностической сывороткой производства Иркутского противочумного института в реакции агглютинации 1:10. Оптимум температуры культивирования 37°С. Непатогенны для белых мышей при подкожном и внутрибрюшинном заражении в дозе 108 м кл., что сообщает ему большие преимущества перед штаммом чумного микроба в режимном отношении (отпадает необходимость в процедуре обезвреживания культуСлЭ

00

4 О СО

ральных жидкостей и последующей довольно длительной проверке на стерильность, позволяет работать с большими объемами жидкой культуры, пользоваться проточными растворами при центрифугировании).

Штамм содержит ДНК рекомбинантной плазмиды pLS 759 с fra-генами чумного микроба. Уровень продукции капсульного антигена фракция I у Cltrobacter freundii KMI такой же, как и у родительского штамма Y.pestls EV 76 при выращивании на плотных питательных средах. (LB, ЛХАТ) при 37°С. Капсульный антиген, полученный по методу Baker te al. и изоэлектрической приципита- цией, имеет сходные с препаратом из чум ного микроба физико-химические свойства (подвижность при электрофорезе по Лзмм- ли, изоэлектрическую точку), аналогичную серологическую специфичность в реакциях диффузионной преципитации, но повышенную на два порядка иммунохимическую активность в реакциях РПГА с поли- и моновалентным диагностикумом (производства Среднеазиатского противочумного института) и иммуноферментную активность с моноклональными антителами к

I-

препарату F|. В количественном отношении выход капсульного антигена при выделении методом изоэлектрического осаждения Citrobacter freundii KMI составил 1,2% по

5 сравнению с 0,5% FI из Yersinia pestis TS.

Сконструированный штамм Citrobacter freundii 19/3808-2 К депониропан в коллекции государственного научно-исследовательского противочумного института

Ю Микроб МЩ СССР под номером KMI и может использоваться: для получения антигена фракция I в больших количествах и безопасным способом; длл получения вакцинных препаратов FI с целью создания 15 специфической резистентности у макроорганизма; для выяснения роли хромосомы чумного микроба в биосинтезе FI; для изучения механизмов регуляции Гга-генов, структуры и функции антигена FI и характера его

20 взаимодействия с другими биологически активными компонентами клетки.

Формула изобретения Штамм бактерий Citrobacter freundii 25 KMI - продуцент антигена фракция I чумного микроба.