СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГАММА- ГЛОБУЛИНА Советский патент 1966 года по МПК G01N33/48 G01N15/06 G01N31/02 

Известны способы количественного определения гамма-глобулина в растворе после осаждения посторонних белков этакридином при рН ниже 10. Указанные способы недостаточно чувствительны и не позволяют определять концентрацию гамма-глобулина в разбавленных (ниже 0,2%) его растворах.

Сущность предлагаемого способа заключается в том, что рН надосадочной жидкости, после отделения посторонних белков этакридином, доводят до 10,6 и определяют концентрацию гамма-глобулина по степени мутности. Такая методика определения позволяет определять гамма-глобулин при его концентрации в растворе от 1 мг/л и выше.

Для определения концентрации гамма-глобулина сначала осаждают посторонние белки. Осаждение производят при рН 9,9, ионной силе 0,115, концентрации этакридина 1% и температуре 20-25°С. Продолжительность осаждения 10-20 мин. Надосадочную жидкость после центрифугирования смешивают с карбонатом натрия для получения рН 10,6, оставляют на 2 час и затем турбидиметрнруют.

Оптимальные условия осаждения гаммаглобулина соответствуют ионной силе 0,253.

30,7 мл 0,4 М раствора углекислого натрия и 69,3 мл 0,4 М раствора бикарбоната натрия; раствор углекислого натрия 0,5 моль; 0,85%-ный раствор хлористого натрия; фоновый белковый раствор, содержащий 10 мг/л белка и 0,85% хлористого натрия.

Пример. В пробирку последовательно вносят 0,1 мл фонового белкового раствора, 4 мл испытуемого раствора, содержащего 10-600 мкг гамма-глобулина (более концентрированные растворы разводят 0,85%-ным хлористым натрием), 0,9 мл буферной смеси и 5 мл раствора этакридина. Через 5 мин после перемещивания выпавший осадок удаляют центрифугированием в течение 10 мин при 6000 об/мин; 9 мл надосадочной жидкостн быстро смещивают с I мл раствора углекислого натрия, переносят в кювету и оставляют на 2 час при 37°С. Во вторую кювету наливают контрольную пробу, приготовленную таким же образом, но с использованием вместо испытуемого раствора 4 мл раствора хлористого натрия. Турбидиметрию проводят на светофильтре 500-560 ммк. Расчет результатов производят по предварительно построенной калибровочной кривой. 3 посторонних белков этакридином при рМ ниже 10, отличающийся тем, что, с целью увеличения чувствительности, рП мадосадоч-1пин жидкости доводят до 10,6 и определяют концентрацию гамма-глобулина по степени мутности.