СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АКТИВНОЙ ФРАКЦИИ АНТИРАБИ- ЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ Советский патент 1964 года по МПК A61K39/205 

Известен способ получения активной фракции антирабической сыворотки путем осаждения спиртом и ферментации пепсином.

Предлагаемый способ упрощает производство и позволяет получать активную фракцию антирабической сыворотки с большим выходом и со сниженными анафилактогенными свойствами. Это достигается применением при осаждении большой ионной силы и ферментировапием готового продукта (гаммаили гамма-, бета-глобулинов).

Для осуществления способа иммунную сыворотку животного разводят ледяной дистиллированной водой 1 : 1 и ацетатным буфером с рП 4,0, доводят рН всей среды до 6,4 и при энергичном перемешиванин (избегая вспенивания) добавляют 900 мл 53/о-ного этилового спирта на 1 л смеси. Осалсцение начинают при 0°С и заканчивают при -7°С. После прибавления спирта смесь перемешивают 1 час и цеитрифугируют при -7°С. В надосадочной жидкости получают альфа-, бета-глобулины и альбумин, а в осадке белки, обладающие наибольшей активностью. Полученный осадок суспендируют в растворе хлористого ратрия в отношении 1 : 7,5 с таким расчетом, чтобы вся суспензия имела довольно высокую концентрацию хлористого натрия, например 0,2 моль. Для этого в 6-7 л днстиллированнс. воды растворяют 99,45 г хлористого натрия и в

этом растворе суспендируют 1 кг осадка. Замеряют полученный объем суспензии, доводят весь объем водой до 8,5 л. После тщательного размешивания при 0°С рП суспензии поиижают ацетатным буфером до 5,0+0,05, 1 час перемешивают при 0°С и при постоянном неремешивапии добавляют 110 мл 53о/о-ного спирта на 1 л суспензии. Осаждение заканчивают при -4°С. После добавления спирта смесь

тщательно перемешивают 1 час, после чего центрифугируют при -5°С. Выпавший осадок не используют, а надосадочную жадкость фильтруют через бумажное тесто при --5°С и прозрачный фильтрат замеряют. Для ссаждеПИЯ белков с подвижностью гамма-глобулинов рП фильтрата повышают 1 моль бикарбонатом натрия до 7,0+0,1; если же надо осадить белки с подвижностью гамма- и бета-глобулинов, то рН фильтрата доводят до 5,0±0,05. В том

и другом случае добавляют равный объем 530/о-ного спирта при энергичном перемешивании. Осаждеиие иачинают при 0°С и аканчпвают при -7°. Выпавший осадок отделяют на центрифуге при -7°С. Электрофоретическая

картина осадков, выделенных из фильтрата при рП 7,0, обнаруживает наличие гамма-глобулинов, а при рН 5, 0-гамма и бета-глопулинов. Полученный осадок растворяют при в 0,15 моль растворе NaCl до показателей пре1,3600. Полученный раствор прозрачен, усюйчив и содержит антитела, но обладает высокой анафилактогенностью. Для ослабления анафилактогенности проводят ферментацию. Для этого полученный раствор разводят двумя объемами дистиллированной воды, понижают рН соляной кислотой до 3,0 ± 0,05, нагревают на водяной бане до 37°С и добавляют при энергичном номещении 0,5о/о медицинского пепсина для производства сывороток. Смесь тщательно перемешивают при 37С в течение 1 час с момента добавления пепсина. За 5-10 мин до истечения этого срока берут небольшую пробу раствора и титруют едким натром 1 моль до рН 4,2±0,05 и при этом рН всю смесь греют еще 1 час. Необходимое количество шелочи на весь раствор определяют путем расчета. По истечении 2 час с момента добавления пепсина рН всей смеси повышают 1 моль щелочью до 7,1+0,1 и быстро охлаждают до . Затем при постоянном перемешивании добавляют равный объем 530/о-ного спирта. Процесс закапчивают при -7°С. После прибавления спирта смесь 1 час перемешивают и центрифугируют при -7°С. Полученный осадок растворяют в щелочном растворе 0,15 моль хлористого натрия до коэффициента преломления 1,3600. Щелочной раствор хлористого натрия готовят добавлением на 1000 мл 0,15 моль раствора хлористого натрия 1 моль бикарбоната натрия. Копечиый рН белкового раствора должен быть 7,2-7,4. Полученный белковый раствор имеет цвет янтаря, прозрачен и обладает хорошей устойчивостью. Предмет изобретения Способ получения активной фракции из антирабической сыворотки путем осаждеиия спиртом и ферментации пепсииом, отличающийся тем, что, с целью уменьшения анафилактогенности препарата и упрощения производства, берут при осаждении ионную силу 0,2 и ферментируют гамма- или гамма-{-бета-глобулины.