СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОНУКЛЕОТИДОВ ИЗ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ Советский патент 1967 года по МПК C12P19/32 

MsBecfeH способ получения мононук.леотидов из нуклеиновых кислот путем ферментативного гидролиза последних, проводимого обычно различными ферментами, например фосфодиэстеразой змеиного яда, и выделения полученных моноиуклеотидов одним из известных способов, например хроматографией на ионообменных колонках.

Для удешевления и упрощения проиесса получения мононуклеотидов (фосфодиэстераза змеиного яда - дорогостоящий фермент) предложено ферментативный гидролиз проводить с помощью фосфодиэстераз, выделяемых актиномицетами в культуральную жидкость в ходе ферментации.

Способ заключается в следующем.

На нуклеиновую кислоту, например рибонуклеиновую, действуют культуральной жидкостью актиномицетов фосфодиэстеразных щтаммов, которую вносят либо непосредственно после выращивания, либо после некоторой обработки. В результате этого полинуклеотиды переходят в соответствующие мононуклеотиды, которые далее отделяют обычными способами, например хроматографией, на колонке. Количество побочных продуктов не нуклеотидной природы, получающихся на этом невелико.

змеиного яда, т. е. фермент, дающий при ГИД ролизе нуклеиновых кислот 5-мононуклеотиды, берут от зрелой (например девяти-десятидневной) культуры. Жидкость освоболедают от

мицелия, например, с помощью сепаратора и подкисляют соляной кислотой до рН около 3. После выдерживания на холоду при таком рН в течение трех суток отстой сливают, декантацией, а осадок, .содержащий активный фер

мент, растворяют в небольшом количестве воды при перемешивании и подщелачивании до рП около 9. К раствору добавляют хлористый магний до конечной концентрации 0,001 М и рибонуклеиновую кислоту в виде аммониевой

или натриевой соли. После часовой инкубации при 37°С и перемешивании реакция раствора доводится до нейтральной, и раствор для инактивации всех фермеитов прогревают 10- 15 мин ири 60-70°С. Затем 5-мононуклеотиды

выделяют на ионообменниках типа дауэкс-1 или дауэкс-2 в ацетатной форме в растянутом градиенте уксусной кислоты (0,0-3 М). На колонке не задерживаются побочные продукты реакции - нуклеотиды и основания. Суммаркое количество таких побочных продуктов составляло в разных опытах от 6 до 10%. Остальной материал выходит при элюции в градиенте СНдСООН в виде нескольких пиков, каждый из которых соответствует оиредеSПредмет изобрете-ния Способ получения мононуклеотидов из нуклеиновых кислот путем ферментативного гидролиза последних и выделения полученных мо- 5 нонуклеотидов одним из известных способов, 4 например хроматографией на ионообменные колонках, отличающийся тем, что, с целью упрощения и удешевления процесса, ферментативный гидролиз проводят с помощью фосфодиэстераз, выделяемых актиномицетами в культуральную жидкость в ходе ферментации.