Способ получения рибонуклеозид-5-трифосфатов Советский патент 1979 года по МПК C07H19/10 A61K31/7105 

1

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения рибонуклеозид-5-трифосфатов, которые широко используются в биохимических исследованиях, а также в медицине,.

Известен способ получения рибонуклеозид-5-трифосфатов путем ферментативного синтеза на основе соответствующих рибонуклеозия-5-монофосфатов, трис-нсС буфера, рН 7,5 в присутствии ионов Mg, креатинфосфата, аденозинтрифосфата, очищенной креатинкийазы, выделенной из мьаиц кролика, очищенных нуклеотидкиназ, ввделенных из Escbenctiio edit В E-coeiB). Процесс провод при в течение 20 мин, прдукт выделяют хг оматографнчески, .выход продукта 85% в расчёте н исходный реагент ii .

Недостатками известного способа являются:

использование в качестве исходных субстратов для синтеза рибонуклеозид-5-трифосфатов соответствующих рибонуклеозид-5-монофосфатов, которые получают ферментативным гидролизом рибонуклеиновой кислоты с использованием очищенной 5-эндонуклеазы и очищенной фосфодиэстеразы из змеиного яда. Продукт гидролиза, представляюгадй собой смесь рибонуклеозид-5-монофосфатов, разделяют ионообменной хроматографией на ДАУЭКС 1x2 и выделяют индивидуальные рибрнуклеозид-5;-монофосфаты. Выход рибонуклеозид-5-монофосфатов на стадии гидролиза рибонуклеиновой

0 кислоты составляет 45-50%, относительно невысокий Выход целевого продукта, так как вторая стадия процесса - фосфорилирование - протекает с выходом 85%, а выход целевого про5дукта за две стадии составляет 3843%;

использование в синтезе очищенных нуклеозидкиназ из E.coCi и очищенной креатинкиназы из мшлц кролика;

0 использование в качестве донора фосфорильных групп креатинфосфата,

Целью изобретения является упрощение способа получения и .повышение выхода рибонуклеозид-5-трифосфатов,

5 Поставленная цель достигается использованием в качестве исходного с.убстрата рибонуклеиновой кислоты в качестве ферментного препарата - цельного нефракционированного экстракта

0 из t , В fB качестве макрозргкчес