Способ определения качественного состава Микроорганизмов в пищевых продуктах, например тесте, общеизвестен.
Согласно этому способу определение ведут путем идентификации микроорганизмов, заключающейся в высеве закваски или теста па элективные питательные среды, выделении чистых культур и изучении их культуральнофизиологических свойств.
Для ускорения процесса определения качественного состава микроорганизмов в пищевых продуктах и повышения его точности согласно предлагаемому способу идентификацию микроорганизмов проводят путем люминесцирования смеси суспензии различных видов микроорганизмов, содержащихся в продукте, с высоленными из сыворотки крови животных антителами, выработанными при иммунизации животных предполагаемым видом микроорганизмов (антигеном), которую проводят одним из известных способов.
При этом высаливание антител из сыворотки крови следует вести сульфатом натрия, а антитела перед люминесценцией окрашивать изотиоцианатом флуоресцеина.
Предлагаемый способ заключается в следующем.
ращивают иа сусло-агаре в течение 48 час при 30°С.
Выращенную культуру смывают физиологическим раствором и центрифугируют.
В случае получения люминесцирующих антител против дрожжей осадок высушивают в стерильных условиях при 37°С в течение 5 дней, а затем разводят в физиологическом растворе.
При получении люминесцирующих антител против молочнокислых бактерий осадок разводят физиологическим растг ором концентрации до 1 млрд. по бактериальному стандарту мутности и прогревают полученную суспензию в течение 30 мин при 56°С.
Полученные таким образом суспензии служат антигеном для иммунизации кроликов. Способ иммунизации последних зависит от вида микроорганизмов, идентификацию которых будут проводить.
Так, если предстоит идентифицировать дрожжи, то в краевую вену уха кролика вводят ежедневно в течение 10 дней по 1 млн.
клеток в виде приготовленной суспензии, а если предстоит идентифицировать молочнокислые бактерии, то приготовленную бактериальную суспензию разводят физиологическим раствором до концентрации от 50- Ю до
иммунизацию, уве.тичивая ежедневную дозу на 50 млн/мл.
Спустя три дня носле проведення носледней инъекцни (как нри работе по первому способу, так и по второму), животных обескровливают, из сыворотки крови выделяют антитела путем высаливания их 20о/о-ным раствором сульфата натрия при 37°С в течение 3 час, центрифугируют в течение 20 мин и подвергают диализу. Диализ ведут до исчезновения следов SOj.
Для окраски антител применяют изотиоцианат флуоресцеина. К 4%-му раствору приготовленных антител добавляют равный объем 0,01 М фосфатного буфера е рН, равным 8,6, из раечета 5 мг на I мл к отстаивают.
Затем добавляют краситель из расчета 2 мг красителя на 100 мл раствора. Полученную смесь оставляют на 6 час при плюс 2- 4°С при перемешивании. Не вступивший в соединения с антителами краситель удаляют на ионообменной колонке.
Полученную сыворотку, содержащую окрашенные антитела, консервируют мертиолятом и лиофилизируют в ампулах, в которых сыворотка может храниться около года.
При идентификации дрожл ей или молочнокислых бактерий, взятых, например, из бродящего теста, на предметное стекло наносят каплю исследуемой взвеси, высушивают на воздухе, фиксируют 5 мл этилового спирта, наносят 1 каплю люминесцирующей сыворотки и прокрашивают 20 мин во влажной камере, промывают физиологическим раствором, высушивают и микроскопируют.
При этом происходит связывание антитела с антигеном. Внешним проявлением этого служит образование вокруг клеток зеленого ободка, видимого под микроскопом. Так, люминесцирующая сыворотка, полученная против определенного вида микроорганизмов, например Lactobacterium plantarum, избирательно связывается только с бактериальными клетками данного вида с образованием
яркого, желто-зеленого ободка и не реагирует с гетероферментативными молочнокислыми бактериями (Betabacterium), бактериями Дельбрюка и другими видами молочнокислых бактерий.
Предмет изобретения
1. Способ определения качественного состава микроорганизмов в пищевых продуктах, например тесте, путем идентификации микроорганизмов, отличающийся тем, что, с целью ускорения процееса определения и повышения его точности, идентификацию проводят путем люминесцирования смеси суспензии видов микроорганизмов, содержащихся в продукте,
с высоленными из сыворотки крови животных антителами, выработанными при иммунизации животных предполагаемым видом микроорганизмов (антигеном), причем иммунизацию проводят одним из известных способов.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что высаливание антител из сыворотки крови проводят сульфатом натрия.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что антитела перед люминесценцией окрашивают
изотиоцианатом флуоресцеина.
