СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА Советский патент 1973 года по МПК C12Q1/38 

Известен способ определения количества сычужного фермента и пепсина в смешанном препарате путем нахожд.еиия суммарного количества двух ферментов (сычужного и иепсина) по скорости свертываиия молочио-ацетатпой смеси при рН 5,0 с последующим количественным ОПределепием каждого из ферментов. Цель изобретения - Повышение точности определения. Это достигается тем, что определение количества пепсина осуществляют параллельно с определением суммы двух фермептов путем разведения смешанного препарата, ианример, :водой до общей концеитрации фермеитов по молочио-апетатной смеси 10-12 мкг/мл и определения белокпереваривающей силы полученного раствора при рН 1,45-1,5. Пример. Производят анализ препарата «сычужного порошка, активность которого по натуральному молоку составляет 100000 условных ед1г. Этот препарат в количестве 1 г растворяют в дистиллированной воде и определяют .активность по молочно-ацетатиой смеси при рН 5,0 и температуре 25°С за 90 сек. Эталонный раствор пепсина, содержащий 0,08 мг чистого свиного пепсина в 1 мл, створаживает 5 мл молочно-апстатпой смеси за 75 сек. Следовательно, в 1 мл испытуемого раствора содержится 0,066 мг чистого фермента .- 0,066. а в 1 г этого препарата - 6,6 мг. Разводят испытуемый раствор дистиллированной водой в 6 раз (1:5), т. е. до коппептрации молочно-апетатной смеси 11 мкг/мл. Берут получеиный после разведения раствор в количестве 0,2 мл и добавляют к 1.5 мл 2лного р.аствора гемоглобина (рН 1,45-1.50). прн Зо,5С г, Р1нкубация смеси проводптся течение 10 мин. Реакция останавливается путел добавления 2 мл 0,3 М трпхлоруксусиой кпслоты. Через 5-10 мин смесь фильтруют через бумажный фильтр и оптическую плотность фильтрата определяют на спектрофотометре при 280 ммк (0,330). Параллельно с опытом ставится контроль. при котором раствор фермента добавляют к субстрату после предварптельного добавления к нему трихлоруксусной кислоты (0,250).

Величину коэффициента поглощения контроля вычитают из величины коэффициента поглощения опыта (0,330-0,250), и полученный результат (0,080) позволяет иайти концентрацию пепсина в иеиытуемом препарате по калибровочной кривой, построенной по эталонным растворам (от 2 до 20 мкг чистого пепсина в 1 мл).

Коэффициент оптического поглощения 0,080 соответствует содержаиию пепсина в испытуемом растворе 0,008 мг/мл, а в неразведенном - 0,048 мг/мл.

Таким образом, испытуемый п-реиа.рат является смешанным с содержанием непсина 4,8 мг, а сычужного фермента 1,8./иг в 1 г препарата.

Предмет изобретения

Способ оп.ределения количества сычужного фермента и пепсина в смешанном препарате путем нахождения сумлш рного количества двух ферментов (сычужного и пепсина) по скорости свертывания молочно-ацетатной смеси при рН 5,0 с последующим количественным определением каждого из ферментов, огличающийся тем, что, с целью повыщения точности определения, определение количества пепсина осуществляют па раллельно с определением суммы двух ферментов путем разведения смешанного препарата, например, водои до общей концентрации ферметав по молочно-ацетатной смеси 10-12 мкг/мл и определения белокпереваривающей силы полученного раствора при рН 1,45-1,5.