СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ КАТАЛАЗЫ Советский патент 1969 года по МПК C12N9/04 C12N9/08 C12P7/58 

Известен способ получения ферментны.х препаратов каталазы и глюкозооксидазы из культуральной жидкости плесневого гриба Penieillium viiale Pidopl. el Bilai, являющегося продуценто.м этих ферментов, путем адсорбции на каолине каталаз) из культуральной жидкости, отделения адсорбента с катачазо иснтрифурирован1 ем, выделения каталазы элюциеГ и осаждением спиртом, адсорбции также на каолине глюкозооксидазы из оставшегося iicHTpnфугата с последуюиип выделением ее одним из известны. сгюсобо:в, напри.мер элюиие и осаждением ацетоном.

Для одновременного получепия наряд с фермента.лп каталазо и глюкозооксидазоГ глюконовой кислот 1, накапливающейся к культуральпой жидкости в процессе культивировання продуцента этих ферментов в виде се кальциевой соли, а также уменьщения производственных потерь центрцфугат, полученный после отделения глюкозооксидазы с адсорбентом, обрабатывают известковым молоком для нейтрализации глюконовой кислоты с образованием при этом ее кальциевой соли. Избыток известкового молока отделяют от осадка, а последний промывают водой. Иолученны(| фильтрат вместе с промывными водами упаривают под вакуумом с последующим выделеннем из него глюконата кальция одни.м из изиестных способов, например, кристаллизацией.

Способ получения ферментных препаратов каталазы и гл1окозооксидаз1 1 заключается в следующем.

Виачале получают засевную культуру. Для этого плесневый гриб Penicilliinn vitale Pidopl. el BilaJ при температуре 2G°C в течение 36- 42 час, культивируют иа питательной среде, содержащей 0,5-0,7,, кукурузного экстракта из су.хих веществ, 2,, сахарозы и 0,2% ККО.

Иолученную таким образом культуру засевают в фер.меитационную среду Biiai (плотность засева ,). Процесс ферментации осуществляют при дифференцпрованном аэрирозаиии среды и температуре 26-ЗОС в течение 72-97 час.

По окончании фермситации кулыуральная жидкость содержит ио 80-100 ед/мл глюкозооксидазы и каталазы, 2,5-3.0% фруктозы, 1,8-2,3% глюконовой кислоты, рцбофлав1т,

ам1И10кислоты и пр.

В культуральную жидкость вносят 0,, каолина н сорбируют каталаз} при перемеишвании в течение 15 мин. Сорбент с адсорбнрованным ферментом отделяют иентрнфугироваинем.

К, отделеннОМу каолину с адсорбированной катачазо добаг.ляют 0,2Л1 фосфатн1)1Й буфер до рП 7 и осущестрЛяют элюц.ию каталазы. Полученную смесь г;еитрифугируют для отдеЦентрифугат, полученный после сорбцип каталазы, подкисляют до рН 3,4, вносят в него 2% каолина и сорбируют глюкозооксидазу в стандартных условиях. Каолин с адсорбированной глюкозооксидаЗОЙ отделяют от жидкости центрифугированием. Полученный при этом центрифугат, содержащий 22% глюкоиовой кислоты, 2,6% фруктозы, 0,02% аминокислоты, используется для выделения глюконата кальция. Глюкозооксидазу злюируют с сорбента 0,2 М фосфатным буфером (рН смеси 6,3), из элюата отделяют каолин центрифугированием, а глюкозооксидазу осаждают на холоду этиловым спиртом. Центрифугат (рН 3,4-3,6), полученный после выделения ферментов, обрабатывают известковым молоком для нейтрализации глюконовой кислоты, при этом образуется кальциевая соль глюконовой кислоты. Целесообразно на 1 л фугата вносить 0,3 л известкового молока до рН 6,8-7,0. Избыток мела отфильтровывают, осадок на фильтре промывают водой температуры 70- 80°С до тех пор, пока в промывных водах не будут содержаться ионы кальция. Фильтрат и промьвные воды смешивают и упаривают под вакуумом при температуре 60-62°С до содержания 55-60% сухих веществ. Затем из упаренной жидкости выделяют глюконат кальция одним из известных способов, например кристаллизацией. П р е д -м е т изобретен и я Способ получения ферментных препаратов каталазы и глюкозооксидазы из культуральной жидкости плесневого гриба Peiiicillium vilale Pidopl. et Bilai, являющегося продуцентом этих ферментов, лутем адсорбции на каолине каталазы из культуральной жидкости, отделения адсорбента с каталазой центрифугированием, выделения каталазы элюцией и осаждением спиртом, адсорбции также на каолине глюкозооксидазы из оставшегося центрифугата с последующим выделением ее одним из известных способов, например элюцией и осаждением ацетоном, отличающийся, тем, что, с целью одновременного получения наряду с каталазой и глюкозооксидазой глюконовой кислоты, накапливающейся .в культуральной Лчидкости в процессе культивирования продуцента этих ферментов в виде ее кальциевой соли, а также уменьшения производственных потерь, центрифугат, полученный после отделения глюкозооксидазы с адсорбентом, обрабатывают известковым молоком для нейтрализации глюконовой кислоты с образованием при этом ее кальциевой соли; избыток известкового молока отделяют от осадка, последит промывают водой, полученный фильтрат вместе с промывными водами упаривают под вакуумом с последующим выделением из него глюконата кальи.ия одни.м из известных способов, например кристаллизацией.