СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ КАТАЛАЗЫ И ГЛЮКОЗООКСИДАЗЫ Советский патент 1967 года по МПК C12N9/04 C12N9/08 

Известен способ получения ферментных Препаратов катализы и глюкозооксидазы из культуральной жидкости плесневого гриба Реnicillium vitale Pidopl. et Bilai, являющегося продуцентом этих ферментов.

Согласно этому способу, из культуральной жидкости адсорбируют катал азу, отделяют адсорбент с каталазой, например, фильтрацией, выделяют каталазу, например, элюцией и осаждеиием спиртом.

Затем из культуральной жидкости (фильтрата), оставшейся после отделения адсорбента с каталазой, адсорбируют глюкозооксидазу, после чего выделяют ее элюцией, осаждают спиртом, растворяют осадок глюкозооксидазы в воде и затем осаждают ацетоном.

Предлагаемый способ проще и дешевле за счет того, что адсорбцию катал азы и глюкозооксидазы проводят на каолине, который задают в культуральную жидкость в два приема при естественных значениях ее рН 3,4-3,6.

В первый прием для адсорбции каталазы следует задавать 0,5J/o каолина, а во второй прием для адсорбции глюкозооксидазы - 2% каолина к объему культуральной жидкости.

Способ получения ферментных препаратов каталазы и глюкозооксидазы из культуральиой жидкости плесневого гриба Penicillium vitale Pidopl. et Bilai, являюихегося прОхТ,уцентом этих фермеитов, заключается в следующем.

К культуральиой жидкости естественного рН (3,4-3,6) прибавляют каолин в количестве 0,(1 к объему жидкости и проводят адсорбцию каталазы в стационарных условиях в течение 15 мин. При содержании в I мл культуральиой жидкости 300 единиц каталазы адсорбируется 95-lOQo/o ее. Каолин с адсорбированной на нем каталазой отделяют центрифугироваиием в течеиие 15 мин. При этом глюкозооксидаза остается в цеитрифуге.

Каталазу, адсорбированную на каолине, элюируют 0,1 моль фосфатного буфера с рН

7,2, добавляя 4 объема элюента по отношению к весу взятого каолина, после чего рН раствора становится равным 6,8-6,9. Элюцию проводят при интенсивном неремешиваиии на протяжении 1 час. Элюат отделяют полуторным объемом изопропилового спирта или ацетона, а затем высуш1 вают.

В центрифугат, получеииый после отделення адсорбента с каталазой, добавляют каолин в количестве 2% к объему жидкости и

адсорбируют глюкозооксидазу в стационарных условиях при перемешивании в течеиие 15 мин.

Каолин с адсорбироваииой глюкозооксидазой отделяют центрифугированием. Адсорбидержании ее в культуралыюй жидкости до 50 ед/мл и при рН культуралыюй жидкости 3,4-3,6. Глюкозооксидазу-элюируют 0,2 моль фосфатного буфера с рН 6,8, прибавляя элюент в количестве 4 объемов по отиошеяию к весу адсорбеита. После прибавления элюента рН составляет 6,1-6,2. Элюцию глюкозооксидазы проводят при энергичном перемешивании в течение 1 час. Элюат отделяют 15-минутным центрифугированием. Он содержит 75-ЭОэ/о адсорбированной глюкозооксидазы.

Вторую злюцию проводят 0,1 моль фосфатного буфера с рН 6,2, прибавляя два объема элюента по отношению к весу каолина. Длительность второй элюции при перемешивании 30 мин. Адсорбируют и элюируют глюкозооксидазу и каталазу при комнатной температуре.

Весь полученный элюат объединяют и осаждают при 0°С двойным объемом этилового спирта (температура спирта -10-12°С). Осадок отделяют центрифугированием в течение 20 мин, затем растворяют его в воде, 1 - 2 раза переосаждают ацетоном при 0°С, снова растворяют в воде н водный раствор высушивают методом лиофильной сушки.

Полученные препараты по своей активности, специфичности и другим качествам не уступают препаратам, получеииым из культуральнои жидкости при исиользовании в качестве адсорбента окиси алюмииия.

Предмет изобретения

1.Способ получения ферментных препаратов каталазы и глюкозооксидазы из культуральной жидкости плесневого гриба PenicilliLini vitale Pidopl. et Bilai, являюш,егося продуцентом этих ферментов, путем адсорбции каталазы из культуральной жидкости, отделения адсорбента с каталазой, например, цеитрифугироваиием, выделения каталазы, например, элюцней и осаждением сииртом, адсорбции глюкозооксидазы из культуральной жидкости (центрифугата), оставшейся после отделения адсорбента с каталазой, и последующего выделения глюкозооксидазы элюцией, осаждением спиртом, растворением осадка в воде и осаждением ацетоном, отличающийся тем, что, с целью упрощения и удешевления процесса, адсорбцию каталазы и глюкозооксидазы проводят на каолине, который задают в культуральную жидкость в два приема при естественных значениях ее рН (3,4-3,6).

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что Б первый прием для адсорбции каталазы задают 0,5% каолина, а во второй прием для адсорбции глюкозооксидазы - 2о/о каолина F объему культура./1ьной жидкости,