Известны способы производства химичёских риккетсиозиых вакцин путем выделения растворенного риккетсиозного антигена.
По предлагаемому способу культуру риккетси11 суспендируют в растворителе, нанример в физнологическом растворе, центрифугируют и в дальнейшем исиользуют надосадочиую жидкость или корпускулы обрабатывают эфиром, экстрагируя из них затем антиген трнхлоруксусной кислотой. Очистку производят, наиример, путем осаждения органическими растворителями или кислотами, фракционирования нейтральными еолями или на ионообменных колонках.
Это позволяет уменьшить реактогенность и аллергеиность вакцин, обеспечить стандартность антигена, повысить его чистоту и концентрацию, а также дает возможность включать вакцину в ассоциированные препараты.
Пример 1. Приготовление нативных препаратов растворимого антигена риккетсий Провачека.
Накопление риккетсий осуществляется либо на куриных эмбрионах, либо путем инфицирования вшей. Подготовленный материал гомогенизируют и суспендируют в 0,05«/о-,ном растворе хлористого йатрия, содержащего 0,29/0 формалина так, чтобы получить Юэ/оную суспензию. Суспензию выдерживают 20-24 час при 4-6°С, центрифугируют
60 MiiH при 5000 об/мин и декантируют надосадочную Лчидкость. Полученные препараты контролнруют путем высева на питательные среды. Стандартизацию пренаратов осуществляют разведением стерильным 0,85и/о-ным раствором новаренной соли, контролируя содержание антигена но РСК.
II р и м е р 2. Приготовление препаратов растворимого антигена риккетсий Барнета.
Дл5-: накопления возбудителя в желточные мешки куриных эмбрионов вводят инфицирующий материал риккетский Барнета, находяии1хся в 1 фазовом состоянии, по 0,25-0,3 .ил и инкубируют 8-9 дней при 37-38°С. Эмбрионы, павшие до истечения 5 суток, уничтожают, а оставшиеся в живых и павшие более, чем через 5 суток сохраняют при 4°С, вскрывают, извлекают желточные мешки и гомогенизируют. Из гомогената готовят 20а/о-ную суспензию в 0,85о/о-ном растворе поваренной соли с добавлеш{ем БО/О-НОГО фосфатного буферного раствора и 0,50/0 формалина. Суспензию иосле выдерживания в течение 10 суток прн 4°С встряхивают с 0,2 объема наркозного эфира и отделяют нижний слой. Обработку эфиром повторяют несколько раз, пока эфирный слой не будет оставаться бесцветным после отстаиваиия в течение ночи. К среднему слою добавляют 0.5 объема физиологического раствора или воды и вновь обрабатывают эфиром, сливая .нижний слой. Водные фракции после дополнительной обработки соединяют и дополнительно обрабатывают эфиром. Полученные обогащенные риккетсиями фракции центрифугируют 5-Q час при 5000 об/лшн, растирают осадок в ступке с небольшим количеством физиологического раствора или воды и добавляют равный объем 12о/о-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Смесь выдерживают 6 час при О-1°С нри частом неремешивании, центрифугируют 30-40 мин при 3-4 тыс. об/мин, суспендируют осадок в небольшом количестве воды или физиологического раствора .и вновь обрабатывают трихлоруксусной кислотой. Надосадочная жидкость после центрифугирования содержит растворимый антиген риккетсий Барнета. Полученные препараты подвергают диализу сначала против водопроводной воды (34 ч), а затем против дистиллированной (24 ч) при 4-6°С. Диализаты после стандартизации и контроля-используют в качестве при ив-очных препаратов. Для получения . коиы ентрфованных препаратов с высокой степенью очистки полученные диа510 15 20 25 лизаты смешивают с 3 объемами этилового спирта, оставляют на 24-48 ч при 4-6°С, отделяют выпавший осадок центрифугированием и суспендируют в необходимом количестве физиологического раствора. Предмет изобретения Снособ производства химических риккетсиозпых вакцин путем выделения растворимого риккетсиоЗНого антигена, отличающийся тем, что, с целью уменьшения реактогенности и аллергенности вакцин, стандартизации антигена, повышения его чистоты и концентрации, а также возможности включения в ассоциироваиные препараты, культуру риккетсий суспендируют в растворителе, например в физиологическом растворе, центрифугируют, в дальнейшем используют надосадочную жидкость или корпускулы обрабатывают эфиром, экстрагируя из них затем антиген трихлоруксусной кислотой, и очиш,ают, например, путем осаждения органическими растворителями или кислотами, фракционирования нейтральными солями или на ионообменных колонках.
