СПОСОБ ОЧИСТКИ РИБОНУКЛЕАЗЫ Советский патент 1970 года по МПК C12N9/22 

Известен способ очистки рибонуклеазы диализом и кратковременным кипячением. В результате диализа теряется до 50% продукта.

Предлагаемый способ состоит в том, что рибонуклеазу, загрязненную солями, низкомолекулярными веществами и некоторыми ферментами, обрабатывают фенолом, затем осаждают спиртом, осадок экстрагируют водой, нерастворимую часть отделяют и после лиофильной сушки получают 90-98% рибонуклеазы. Чтобы получить химически чистый препарат, -полученный продукт очищают гелевой фильтрацией на сефадексе G-25 или G-50.

Пример 1. Навеоки рибонуклеазы 10,5 и 1 г растворяют в 200 мл воды. Добавив по 50 мл водного фенола, перемешивают 15 мин и центрифугируют. Верхний слой экстрагируют еще два раза 25 мл фенола. Объединенные экстракты повторно центрифугируют, верхний слой удаляют, а нижний осаждают равным объемом спирта. Осадок промывают спиртом и сушат в вакуум-эксикаторе. Выход по весу соответственно 2,93 г, 1,6 г и 0,32 г, составляющий 95% активности исходного, т. е. очистка трехкратная.

та. Выход соответственно: 3,6 г (36о/о), активность 75%; 0,6 г (6%), активность 16%; 0,3 г (3%), активность 6%; 0,2 г (2%), активность 1 %.

Пример 3. Зг осадка из примера 1 экстрагируют три раза 15 мл воды. Экстракты центрифугируют и лиофильно сушат. Выход рибонуклеазы соответственно: 2 г (66%), активность 80%; 0,5 г (18%), активность 15%; 0,1 г (3%), нерастворимая часть 0,1 г (3%), активность 1,5%. Лиофилизаты 1-го и 2-го экстрактов очень хорошо растворимы в воде без опалесценции.

Примечание. Спирт добавляют до .получения отчетливо вырал енного осадка.

Пример 4. 2 г лиофилизата (экстракт 1 примера 3) растворяют в 20 мл 0,2 М уксусной кислоты и наносят на колонку 4X110 см,

наполненную сефадексом G-25. Первые 40 мл элюата отбрасывают, следующие 100 мл содержат 1 г высокоочищенной рибонуклеазы в виде ацетата. Пример 5. 2 г лиофилизата растворяют в

0,1 М растворе пиридина или 0,05 растворе аммиака. Первые элюаты отбрасывают (400 мл), а рибонуклеаза выходит в виде свободного основания (100 мл. Препараты, получаемые в примерах 4 и 5, применяют как химически чи34

Предмет изобретения.целевого продукта, рибонуклеазу подвергают

Способ очистки рибонуклеазы, отличающий- осадок экстрагируют водой, экстракт лиося тем, что, с целью упрощения технологиче-фильно сушат и полученный продукт фильского процесса, .повышения выхода и качества 5 труют на сефадексе.

259790

обработке фенолом и спиртом, полученный