ПРОДУЦЕНТ / БЧБ ^•''О--^ ^ ' "" ПЕКТОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ"^^ <^-^-^^ и ; !'Д Советский патент 1972 года по МПК C12N1/14 C12N9/14 

Изобретение относится к области микробиологической промышленности, в частности к нолучению штамма Botrytis cinerea № 70 - продуцента пектолитических ферментов, используемого в винодельческой промышленности.

Известны штамм Botrytis cinerea № 20 и штамм Botrytis cinerea № 30, отселекционированные в условиях Крыма.

Предлагаемый штамм обладает рядом отличительных признаков: конидии крупные по всем четырем формам - овальпые, яйцевидные, эллипсоидальные, шаровидные. Обшая пектолитическая активность равна 7000 ед/г, кроме того, полученный препарат обладает полигалактуроназной активностью, равной 16100 , содержит пектинэстеразу (540 мг-экв/мг-мин), кислую протелиазу, равную 21200 ед/г (по методике СЭВ) и гемицеллюлазу (420 ед/г).

Штамм Botrytis cinerea № 70 имеет следующую характеристику. Штамм выделен из ягод сорта Чайнак.

Сусло-агаровая среда. Колония гриба темно-серого цвета с оливковым оттенком. Воздушный мицелий развит хорошо, колонии пушистые, плодоношение обильное. Гифы бесцветные, с возрастом приобретают оливковый оттенок. Толщина гиф 3-10 мк. Конидиеносцы отличаются от гиф вегетативного мицелия более темной окраской - буроватые с толстой оболочкой, прямостоящие, высотой 0,6-2,5 мл, толщиной 6-18 Я1к, на вершине вильчато-разветвленные, с зернистым содержи.мым.

Ветви конидиеносцев почти бесцветные. Конечные ответвления конидненосца короткие, оканчивающиеся сучковидными выступами, несущие мелкие зубчики, на которых сидят многочисленные конидии, образующие вместе с ветвями головку. В последней содержится до 300 конидий.

Конидии одноклеточные, яйцевидные с заостренными концами, овальные или эллиптические (почти шаровидные) размером 9-15Х Хб,5-13 мк со слегка буроватой оболочкой, в массе дымчатые, большей частью тесно скученные в плотные, быстро опадающие грозди.

Штамм обладает способностью при голодании формировать микроспороношение типа пенициллоидных кисточек, которые отчленяют мелкие шаровидные микросноры.

Среда Чапека. Воздушный мицелий

развит слабо. Колонии светлосеро-оливковые.

Штамм образует многочнсленные крупные

На сусло-агаре штамм дает очень хорошо развитый воздушный мицелий, темноокрашенный. Плодоношение обильное.

На мясо-пентонном агаре вегетативный мицелий развит слабо. Плодоношение обильное.

На голодном агаре колонии слаборазвитые, паутинистые.

Онтимальная температура 25°С.

Питательная среда следуюш,его состава; свекловичный жом - 2%; пептон-1% (NH4) 2504-0,6%; КНгРОа -0,2%; кукурузный экстракт - 0,5%, обеспечиваюш,ий синтез пектолитических ферментов до 70 ед/мл.

Пример. Двухсуточную культуру, выращенную в колбах на качалке в количестве 1%, вносят в ферментеры на питательную среду того же состава, где процесс вырашивания продолжается еш,е 3 суток, при тех же условиях, но с дополнительной подачей воздуха, при избыточном давлении 0,3-0,4 атм.

Мицелий от культуральной жидкости отделяют на нутчфильтре, культуральную жидкость охлаждают до +5°С, затем смешивают с охлажденным до 5-10°С с этиловым спиртом в пропорции 1:4.

Выпавший осадок фермента отделяют от жидкости центрифугированием, промывают спиртом и сушат при комнатной температуре. Высушенный ферментный препарат размалывают, после чего он может быть использован в виноделии. Пектолитическая активность препарата 6000-7000 ед/г.

Предмет изобретения

Штамм Botrytis cinerea № 70 -продуцент пектолитических ферментов.

Сусло-агаровая среда. Колонии грпба темно-серого цвета с оливковым оттенком. Воздушный мицелий развнт хорошо, колонии пушистые, плодоношение обильное. Гифы бесцветные, с возрастом приобретают оливковый оттенок. Толш,ина гиф 3-10 мк. Конидиеносцы отличаются от гиф вегетативиого мицелия более темной окраской - буроватые с толстой оболочкой, прямостояш,ие, высотой 0,6-2,5 мм, толш,иной 6--18 мк, на вершине вильчато-разветвленные, с зернистым содержимым.

Ветви конидиеносцев почти бесцветные. Конечные ответвления конидиеносцев короткие, оканчиваюш,иеся сучковидными выступами, несуш,ие мелкие зубчики, на которых сидят многочисленные конидии, образующие вместе с ветвями головку. В последней содерл ится до 300 конидий.

Конидии одноклеточные, яйцевидные с заостренными концами, овальные или эллиптические (почти шаровидные), размером 6,5- 13 мк со слегка буроватой оболочкой, в массе дымчатые, большей частью жестко скученные, нлотные, быстро опадающие гроздья.

Штамм способен при голодании формировать микроспороношение типа пенициллоидных кисточек, которые отчленяют мелкие шаровидные микроспоры.

Среда Чапека. Воздушный .мицелий развит слабо. Колонии светлосеро-оливковые. Штамм образует многочисленные крупные серовато-белые, с возрастом черные склероции длиною 2-7 мм с бугорчатой поверхностью. Склероции расположены более или менее равномерно по всей новерхности колонии.

С у с л о - а г а р. Хорошо развит воздушный мицелий - темноокрашенный. Плодоношение обильное

М я со - п е п то н н ы и агар. Вегетативный мицелий развит слабо. Плодоношение обильное.

На голодном агаре. Колонии слаборазвитые, паутинистые. Температура развития 8-27°С, оптимальная - 25°С.