ВСЕСОЮЗНА И ГНП-ТР^ЙйУГ'-БИБЛМО^'Г^^А Советский патент 1971 года по МПК C12P19/34 

Изобретение относится к области биохимии и касается способов получения двуспиральаой рибонуклеиновой ки1слоты.

Известны способы получения двуспиральной рибонуклеиновой кислоты из клеток Escherichia coli путем заражения .мутангом ба ктериофага 1C последующим .выделением продукта с помощью фенола.

Указанные способы не обеспечивают удовлетворительного выхода целевого продукта.

Целью настоящего изобретения является увеличение выхода двуспиральной рибонуклеиновой кислоты. Для достижения этой цели в культуру через 45-120 ман после заражения (ВНОСЯТ антибиотик IB количестве 5- 200 MKZJMA. Далее процесс выделения рибонуклеиновой кислоты ведут известным путем.

При получении двуспиральной рибонуклеиновой кислоты по предлагаемому способу выращивания клеток Е. соИ .может производиться на любой из известных литательных сред, например, на среде с триптоло.м или среде с жидкостью, в которой было намочено зерно. После достижения концентрации клеток 5-10-5-108 и более в 1 мл среды производят заражение мутаятом бактериофага, например MV-9, так, чтобы на одну бактерию приходилось бы от трех до тридцати клеток вируса. Через 45-120 мин после заражения в

культуру вносят антиоиотик, .ируюц.ип1 протеиновый синтез, например, стрептомицин, окситетрациклин, хлорамфеникол в количестве 5-200 мкг на 1 мл культуры.

Пример 1. Культуру Е. coli выращивают на среде, содержащей в 1 л воды 10 г триптона; 1,0 г дрожжевого экстракта; 1,0 г декстрозы; 8,0 г хлористого натрия; 0,22 г хлористого кальция и 15,0 г агара. Прививочные клетки

получают выращиванием в течение 16 час при 37°С на той же среде, но без агара. Выращивание ведут при 37°С при аэрации и встряхивании. После достижения концентрации клеток 5-108 на 1 мл среды добавляют вирус

MV-9 так, чтобы на одну бактерию приходилось бы шесть 1нфицирующих вирусных частиц. Через 60 мин после зараження добавляют хлорамфеникол в количестве 50 и продолжают ку тьтивирование еще 240 мин.

Выход рибонуклеиновой кислоты при этом увел.ичивается на 54% по сравнению с контролем, в который антибиотик не добавлялся. Пример 2. Ведут синтез в условиях, описанных в примере 1, но нрименяют окситстрациклин в количестве 50 мкг/мл. Выход двуспиральной рибонуклеиновой кислоты, )io сравнению :С контролем, цовыщается на 48%. Пример 3. Ведут синтез в условиях, описанных в примере 1, но применяют стрептомидин в количестве 50 мкг/мл. Выход двуспиральиой рибонуклеиновой кислоты, по сравиеШ-1Ю с контролем, повышается на 45%.

Пример 4. Для выращивания применяют жидкость, в которой было намочено зерно. Эту жидкость .разбавляют равным .объемом воды, добавлением едкого натра доводят рН до 7,0; нагревают 1 час пр.и 100°С, охлаждают, отделяют примеси .центрифугированием, разба-вляют в 10 раз .водой, .нагревают до кипения, охлаждают и вновь центрифугируют.

Когда концентрация клеток достигает 1,28 мг/мл (по .сухому весу), добавляют бактерио.фаг MV-9 и далее ведут процесс, как это описало 3 примере 3, вводя стрептомицин через 90 мин после зараже)п-1я в количестве 100 мкг/мл. Выход двуспиральной рибонуклеиновой кислоты по сравнению с контролем ноБышается на 113%.

Предмет изобрет.ения

Способ получения двуспиральной рибонуклеиновой кислоты из клеток Escherichia coli, зараженных мутантом бактериофага, отличающийся тем, что, с .целью увеличения выхода продукта, в культуру через 45-120 мин носле заражения вносят антибиотик в количестве 5-200 мкг/мл. Далее процесс выделения рибонуклеинов.ой кислоты ведут известным путем.