СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА Советский патент 1972 года по МПК C12P35/08 A61K31/545 

Изобретение относится к медицине, точнее к производству антибиотиков

кнгJ оси,5

fK l- -™-m™,-o-I-CH, «ООНо

В изобретении предлагается способ получения антибиотика из штамма NRRL 3584, который выраищвают в питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли в аэробных условиях при 25- 37°С в течение 36-72 час, и выделяют целевой продукт из культуральной жидкости известными приемами.

Предлагаемый антибиотик проявляет антибактериальную активность против грамм - положительных и грамм - отрицательных организмов, а также против патогенных организмов растений. Антибиотик обладает и антигельминтовой активностью.

Пример 1. Снорулированную культуру NRRL 3584 выращивают на среде, содержащей (в %): декстрина 1, хлопковой муки 1, экстракта дрожжей 0,1, агар-агара 2,6 при рН 7 в течение 7 дней при 30°С. Затем со среды снимают споры и прибавляют к ним 2 мл

стерильной бычьей сыворотки. По 0,1 мл полученной суспензии переносят в пробирки и лиофилизируют. Готовые таблетки используют для инокулирования растительной среды,

содерл ащей (в %): глюкозы 0,5, декстрина 1, лакто-триптона 0,5, экстракта дрожжей 0,5, кристаллического сульфата магния 0,2.

П р и м е р 2. В ферментер емкостью 40 л помещают 24 л среды, содержащей 0,2 г антипеиообразователя, 5 г глюкозы, 50 г декстрнна-700, 25 г соевых обрезков, 3 г паточной мелассы, 0,25 г двузамещенного фосфорнокислого калия и 2,5 г карбоната кальция. Среду стерилизуют 30 мин при 120°С, охлаждают и инокулнруют 5%-ны1М прививочным материалом, полученным, как в примере 1. Ферментацию ведут 66 час при 60°С и аэрацнн стерильным воздухом (0,35 об/мин.). Перемещиванне осуществляется механической

мещалкой. 60 л к льтуральной жидкости, полученной описанным методом, фильтруют через диатомитовую землю и пропускают через колонку с активированным углем (высота 150 CJ4, диаметр 9,6 см). Колонку промывают

переносят на колонку с анионнтом IRA-68 в формиатной форме. После промывания водой элюируют антибиотик 0,1 люль раствора формиата аммония. Активные фракции объединяют, упаривают в вакууме и лиофилизируют. Получают 25-30 г твердого препарата.

А. Высушенный препарат растворяют в минимальном количестве воды и вносят в колонку с микрокристаллической целлюлозой (7,2X60 см), суспендированной в 70%-ном водном ацетонитриле. После внесения пробы колонку промывают ацетонитрилом, а затем элюируют метанолом. Активные фракции объединяют, упаривают до 200 мл и осаждают антибиотик добавлением 2 л ацетона. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат в вакууме. Получают 9-12 г препарата.

Б. 20 г вещества, получение которого описано выше, растворяют в минимальном количестве воды и вносят в колонку с силикагелем (7,2X60 см). Силикагель предварительно промывают водой, метанолом и суспендируют в 70%-ном ацетонитриле. После внесения веП1,ества в колонку ее промывают однократным количеством ацетонитрила и элюируют антибиотик 70%-пым ацетонитрилом. Активные фракции объединяют, упаривают досуха в вакууме, растворяют остаток в метаноле и осаждают антибиотик 10 объемами ацетона. Выпавший осадок отфильтровывают, прол ывают ацетоном и сушат в вакууме. Выход 8 г препарата, из менее активных фракций дополнительно выделяют еще 6 г.

В. Для очистки моноаммониевой соли антибиотика 1 г высушенного вымораживанием препарата, получение которого описано выше, растворяют Б 4 мл воды и вносят в колонку (2x60 см) со 175 мл взвеси силикагеля-950 в 80%-ном водном ацетонитриле. Элюирование проводят смесью ацетонитрила с водой (4:1), контролируя процесс методом бумажной хроматографии. Фракции, содержащие соль антибиотика, объединяют,

упаривают досуха, растворяют в небольшом количестве диметилсульфоксида, а затем этанола и осаждают активное вещество добавлением избытка эфира. Осадок отделяют центрифугированием и сущат в вакууме. Получают

91 мг моноаммониевой соли антибиотика.

Предмет изобретения

Способ получения антибиотика, отличающийся тем, что штамм NRRL 3584 выращивают в питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли в аэробных условиях при 25-37°С в течение 36-72 час и выделяют целевой продукт из культуральной жидкости известнымн нриемами.