СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 6-АМИНОПЕНИЦИЛЛАНОВОЙ Советский патент 1973 года по МПК C12P37/06 

I

РЬобретение огноснтся к области медицины, в частиости к производству антибиотиков.

Известен способ нолучения 6-аминопенициллановой кислоты, заключающийся в том, что раствор пенициллина, например ненициллнна V, инкубируют с культурой Streptomyces cavendulae при температуре 25-60°С и рН 6,0-11,0 в течение 2-24 час с последующим выделением целевого продукта.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта и сокращение длительности процесса его получения.

Достигается это тем, что ферментативное расщепление пенициллина осуществляют в присутствии гидразида, например бензгидразида, взятого в количестве 0,5-2,0 моля на 1 моль субстрата.

Пример 1. Приготовление клеток Streptornyces cavendulae для гидролиза амидазы.

Культуру Streptomyces cavendulae У.Т.С.С. 21138 засевают в сосуд с питательной средой, содержащей (%): сахарозы 2,5, фармамедиа 1,5, кукурузной муки 1,0, сульфата аммония 0,3, карбоната кальция 0,2. Культуру выращиiiaiOT в течение 24-48 час. З.атем 1 л выра1ЦС1П10Й культуры Str. cavendulae засевают в 9-10 л среды, содержащей (%): нутрисой 3,0, фарлгамедна 0,5, хлористого натрия 0,5, карбоната кальция 0,3, церелозы 5,0, сахарозы 2,0. Культуру выращивают в течение 4-5 дней.

мицелий собирают фильтроваиием или центрифугированием, промывают и затем используют для энзиматнческого гидролиза пенициллина.

Пример 2. Получение 6-аминопенициллановой кислоты из 2%-ного пепицнллина V.

Промытый мицелги, отфильтрованный из 600 мл культуральной жидкости, полученной по примеру 1, суспендируют в 1 л дистиллированной воды, рН доводят до 7 и добавляют 20 г пенициллина калия и 10 г 1%-ного бензгидразида. Температуру суспензии поддерживают на уровне 35°С. Добавлением гидроокиси натрия сохраняют первоначальное значение рН (7). Пробы берут нериодически и определяют хроматографическим способом. Максимальный выход 6 - АПК получают между 2- 4 час; он составляет 90% и более.

Пример 3. Получение б-аминопенициллаповой кислоты из пенициллина G.

Промытый мицелий, нолучсиный из 500 мл культураль 1ой жидкости iro способу, описанному в примере I, сусггепдируют в 1 л дистиллированной воды, рП доводят до 7, добавляют 20 г пенициллина и 20 г 2%-пого бензидразида. Выход 6-АПК составляет около 32%, полученных примерно за 2-6 час.

Тот же самый опыт, проведенный без бензгидразида, дает 10% выхода 6-АПК. Пример 4. Получение 6-аминоненициллановой кислоты из пенициллина G при использовании Esclierichia coli и 1%-ного бензгпдразида. Берут 500 мл густой суспензии клеток Е. соИ АТСС 11105 в фосфатном буферном растворе, рН 7,5 доводят до 8,5 раствором карбоната натрия. Добавляют 1 мг% лизозима, 0,5% дезоксихолата натрия, 0,01 моля этилен.-диаминтетраацетата натрия и 0,4% толуола. Далее суспензию выдерживают ири температуре 37°С в течение 2 час, чтобы вызвать лизис бактериальных клеток, после чего рН доводят-опять до 7,5 при помощи НС1. Остаточные клетки, не охваченные действием лизиса, и другие нерастворимые остат1си отделяют центрифугировапием. ЛОадкий экстракт разбавляют дистиллированной водой до 1 л, добавляют 20 г пенициллина G калия и Ю г 1%-ного бензгидразида. Температуру поддерживают около 37°С. Максимальный выход 6-АПК - 90% и более, полученный за I-2 час. Феноксиацетилбензгидразид был выделен и опознан. Пример 5. Получение 6-аминопенициллановой кислоты яз 8%-ного пенициллина V. Промытый мицелий, полученный из 500 .%.. культуральной жидкости по способу, описанному в примере 1, суспендируют в 1 л дистиллированной воды, рН доводят до 8,2. Затем добавляют 80 г пенициллина V калия и 30 г 3%-ного бензгидразида. Температуру поддерживают на уровне 40°С при перемешивании. Пробы периодически отбирают и анализируют хроматографическим способом. Максимальный выход 6-АПК получают в течение 4 - б час, он составляет 75%. Пример 6. Получение 6-аминопенициллановой кислоты из пенициллина V и 2%-ного 4-метил бензгидразида. Опыт проводят как в примере 5, с той разницей, что 30 г бензгидразида заменяют 20 г 4-метилбен.згидразида. Выход 6-АПК - 51%. Затем вместо 80 г пенициллина V и 30 г бензгидразида (см. пример 5) используют 120 г пенициллина V и 20 г 4-метилбонзгидразида. Выход 6-АПК 35%. Пример 7. Получение 6-аминопенициллановой кислоты из пенициллина V и 2%-ного салицилгидразида. Опыт проводят как в примере 5 с тем исключением, что 80 г пенициллина V и 30 г бензгидразида, использованных в этом примере, заменяют 120 г пенициллина V и 20 г 2%-ного салицилгидразида. Получают 51% 6-АПК. Предмет изобретения Способ получения 6-аминопенициллановой кислоты путем ферментативного расщепления пенициллина в водной среде при комнатной температуре или при нагревании при рН 6,0-11,0 в течение 2-24 час с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повыщения выхода целевого продукта и сокращения длительности процесса, расщепление осуществляют в присутствии гидразида, например бензгидразида, взятого в количестве 0,5-2,0 моля на 1 моль субстрата.