Настоящее изобретение касается способа получения новых глюкозидов общей структуры I
ОСИ,
RI
- водород,
е
R2алкил-, алкенил-, циклоалкил-, незамещенный или замещенный аралкил- или аралкенил-, или замещенный арильный остаток, или
R и Кг - алкильные группы или образуют алкеновую цепь.
Новые соединения общей структуры I могут применяться для борьбы с паталогическими процессами, сопровождающимися ненормальным размножением клеток, например при злокачественных неоплазмах.
Согласно изобретению способ получения новых глюкозидов основан на взаимодействии 4-деметилэпиподофиллотоксин-р-В - глюкозида с карбонильными соединениями общей формулы
RI R,
.
где RI и R2 имеют указанное выше значе ие; или с соответствующими низшими ацеталями или кеталями в присутствии кислого, обладающего водосвязывающими свойствами катализатора.
В качестве катализатора при.меняют, например, кислоты Льюиса, как безводный хлористый цинк, сульфокислоты, например п-толуолсульфокислоты или сухие катиониты с
сульфокислотными группами в Н+-форме.
Конденсацию проводят при комнатной температуре в среде сухого инертного органического растворителя, например в нитрометане, предпочтительно без влаги в атмосфере азота.
С целью повышения выхода при конденсации применяют азеотропную отгонку реакционной воды или образующегося спирта в вакууме ири температурах от 20 до 30° С. Выделение и очистку продукта проводят изСлужащие исходными средствами для изготовления новых соединений общей структуры I 4-деметилэниподофиллотоксин-р-В - глюкозиды получают, подвергая реакции обмена 4деметилэпиподофиллотоксин в безводном инертном нри реакционных условиях органическом растворителе при температурах от -20 до -5° С в присутствии связывающего кислоту средства со сложным хлормуравьинобензиловым эфиром в 4-карбобензокси-4-деметилэпннодофиллотокснн, конденсируя затем 4-карбобензокси - 4 - деметилэпнподофиллотоксии с 2, 3, 4, 6-тетра-О-ацетил-|3-0-глюкозой в присутствии этилэфирата трехфтористого бора в инертном при реакционных условиях органическом растворителе нри температуре 0° и( или) оти1,епляя сначала гидрогенолпзом из полученного тетра-О-ацетил-4-карбобеизокси-4 - деметилэпиподофиллотоксин-рD-глюкозида карбобензокснгрунну и подвергая алкоголизу полученный тетра-О-ацетил-4- дед1етнлэпиподофиллотоксин-р - D - глюкознд в присутствии безводного ацетата цинка. При этом образуется 4-деметилэнинодофиллотоксин-р-О-глюкозид.
Пример 1. 4-деметилэпиподофиллотоксип-р-О-этилиденглюкозид.
1,5 г сухого 4-деметилэпиподофиллотоксин-p-D-глюкозида суспендируют в 30 мл иитрометана и прибавляют 6 мл ацетальдегиддиметилацеталя и 150 мг п-толуолсульфокислоты. Размешивают исходную смесв 1 час нри комиатной температуре в среде азота и без доступа влажности. Спустя это время первоначальная суснензня нревраи,ается в прозрачный раствор, и в тонкослойной хроматограмме (плитки из снликагеля, промывное средство: хлороформ 6% метанола) не может быть доказан исходный материал. Затем раствор разбавляют 400 .мл хлороформа и взбалтывают с водой три раза ио 25 мл воды. ПолученНЕЛЙ после выпаривания высушеииой органической фазы сырой продукт хроматографируют
затем иа 100 г силикагеля «Мерк (крупность зерна 0,05-0,2 л-ш), причем хлороформ -f 6% метанола служат элюеитами. Получают единообразный при тонкослойной хроматографии 4-деметилэпиподофиллотоксии - р - D - этилиденглюкозид. После перекристаллизации из метанола получают бесцветные кристаллы с т. пл. 236-25Г С, 110.5° (с 0,588
в хлороформе).
Пример 2. 4-Деметилэпиподофиллотоксин-р-О-пронилиденглюкозид.
1,5 г еухого 4-деметилэпиподофиллотоксииp-D-глюкозида суспендируют в 25 мл нитрометана, затем прибавляют 1 мл пропионового альдегида и 125 мг п-толуолсульфокислоты. Исходную смесь перемешивают 2 час нри комнатной температуре в среде азота и без доступа влажности. Через это время первоначальная суспензия почти прозрачна и в тонкослойной хроматограмме (плитки из силикагеля, промывное средство: хлороформ +15% метанола) почти не может быть доказан исходный материал.
Раствор затем разбавляют 500 мл хлороформа и взбалтывают четыре раза 25 мл воды. Нейтральную органическую фазу сушат над сульфатом натрия и выпаривают в вакууме. Сырой продукт хроматографируют затем 100 г
силикагеля «Мерк (крупность зерна 0,05- 0,2 ям,}, причем хлороформ +2% метаиола служат элюентами. Единообразные в тонкослойной хроматограмме фракции нерекристаллизовывают из 10 мл горячего метанола и получают 4-деметилэпиподофиллотоксин-р-Впропилиденглюкозид как бесцветный, кристаллический препарат с т. пл. 178-182°С; - 107,2° (с 0,558 в хлороформе).
В табл. 1 дан ряд других, не известных до сих пор соединений, синтезированных аналогично примеру 2, их свойствам с примененными в данном случае исходными соединениями.
Таблица I Пример 3. 4-Деметилэпиподофиллотоксин- -D- (2-бутенилиден) -глюкозид. 1 г сухого 4-деметилэпиподофнллотоксин-рD-глюкозида суспендируют в 20 мл нитрометана и прибавляют 20 лгл кретонового альдегида (свежеперегнанного) и 2 г ионообменника Dowex (тип сухой). Реакцию проводит как в примере 2 - в среде азота и без доступа влажности при комнатной температуре. Через 1 час можно узнавать только главное пятно в тонкослойной хроматограмме (промывное средство: хлороформ -i-6% метанола). Реакционную смесь отфильтровывают от ионообменника и затем хорошо промывают хлороформом. Разбавляют фильтрат 500 мл хлороформа и взбалтывают четыре раза по 25 мл воды. Органическую фазу фильтруют через сульфат натрия и выпаривают в вакууме. Получают желтое масло, которое очищают 110 г силикагеля «Мерк. Элюентами служат хлороформ -i-6% метанола. Хроматография на колонне дает 4-деметилэпиподофиллотоксин-p-D- (2-бутинилиден) -глюкозид, почти чистый по данным тонкослойной хроматограммы (плитки из силикагеля, промывное средство: хлороформ +6% метанола). Вещество иерекристаллизовывают два раза из 6 мл горячего этанола и получают бесцветный кристаллизат; точка ил. 195-199° С; -99,2° (с 0,813 в хлороформе). Пример 4. 4-Деметилэпиподофиллотоксин- -В-гексагидробеизилиденглюкозид. В растворе 2,0 мл гексагидробензальдегида в 30 мл иитрометана суспендируют 2,0 г 4-деметилэпиподофиллотоксин-р - L) - глюкозида. После прибавления 100 жг л-толуолсульфокислоты размешивают 1 час при без доступа влажности, прибавляют затем еще раз 50 г п-толуолсульфокислоты и перемешивают еще 5 час. Затем разбавляют 50 мл хлороформа, отфильтровывают нерастворенный материал и фазу хлороформа промывают водой до нейтральной реакции. После сушки раствора над сульфатом натрия и выпаривания в вакууме хроматографируют остаток силикагелем. Хлороформ -f 2% метанола элюируют сперва побочные продукты и затем чистый 4-деметилзпиподофиллотоксин-p-D - гексагидробензилиденглюкозид. Из этанола получают соединение в кристаллах с т. пл. 228-231° С; ,0° (с 1,020 в хлороформе). Пример 5. 4-Деметилэпиподофиллотоксин-р-В-фенилэтилиденглюкозид. К суспензии 1,5 г сухого 4-деметилэниподофиллотоксин-р-О-глюкозида в 60 мл нитрометана прибавляют 6 г ионообменной смолы Dowex (тип 50WX2, сухая) и 1,5 жл фенилацетальдегиддиметилацеталя. Исходную смесь размешивают при комнатной температуре в среде азота и без доступа влажности. Примерно через 90 мин получается прозрачный раствор в тонкослойной хроматограмме (проможно доказать только следы исходного материала. Отфильтровывают катализатор и разбавляют светло-желтый фильтрат 0,76 нл пиридина (повышение величины рН от 3-4 до 6) и 400 мл хлороформа. Затем взбалтывают три раза по 25 мл воды. Органическую фазу фильтруют через сульфат натрия и выиаривают в вакууме. Сырой продукт хроматографируют 80 г силикагеля «Мерк, причем с помош,ью хлороформа -1-1,5% метанола можно элюировать почти чистый продукт (тонкослойная хроматография на плитках силикагеля, промывное средство: хлороформ +6% метанола; хлороформ +30% ацетона). После перекристаллизации из хлороформа - метанола получают бесцветный 4-деметилэпиподофиллотоксин-р-О-фенплэтилидеигликозид с т. пл. 165-170° С, -.-82,0 (с 0,971 в ацетоне). Пример 6. 4-Деметилэпиподофиллотоксин- 5-В-гидроциннамилиденглюкозид. 1,5 г сухого 4-деметилэпиподофиллотоксин-р-В-глюкозида суспендируют в 30 мл нитрометана и затем прибавляют 1,5 мл гидрокоричного альдегида (свеженерегнанного) и 300 мл я-толуолсульфокислоты. Исходную смесь размешивают при комнатной температуре в среде азота и без доступа влажности до получения прозрачного раствора (через 30 мин). Затем разбавляют реакционный раствор 500 мл хлороформа и взбалтывают четыре раза по 25 мл воды. Нейтральную органическую фазу сушат над сульфатом натрия .и выпаривают в вакууме. Остаток хроматографируют 100 г силикагеля «Мерк. Путем элюирования хлороформом молшо отделить непревращенный гидрокоричный альдегид. Последующие фракции (хлороформ -f2% метаиола) дают производное гидроциннамилидена, которое после иерекристаллизации из 5 мл горячего этанола превращается в чистый 4-деметилэпиподофиллотоксин - p-D-гидроциннамнлиденглюкозид как бесцветные кристаллы с т. пл. 193-199° С; а -103, (с 0,605 в хлор,оформе). Пример 7. 4-ДеметилэпиподофиллотокCHH- -D- (о-нитроциннамилиден) -глюкозид. К. суспензии 1,5 г сухого 4-деметилэпиподофиллотоксин-(3-О-глюкозида в 75 мл нитрометана прибавляют 6,0 г о-нитрокоричного альдегида и 6,0 г ионообменной смолы Dowex (тип 50WX2, сухая), и размешивают в среде азота без доступа влаги. Примерно через 2 час получается прозрачный раствор, в тонкослойной хроматограмме (плитки силикагеля, промывное средство: хлороформ +6% метанола) можно обнаружить только незначительные количества исходного материала. Затем отфильтровывают катализатор и промывают хлороформом. Соединенные фильтры разбавляют 400 мл хлороформа и взбалтывают три раза по 25 мл воды. Органическую фают. Полученный сырой продукт хроматографируют 100 г силикагеля «Мерк, причем элюентами служат сначала хлороформ, затем хлороформ +2% метанола. Соедин5пот чистые по данным тонкослойной хроматографии фракции (проверенные хлороформом -ffci% метанола как промывными средства.ми на плитках пз силикагеля) и перекристаллнзовывают из 50 мл горячего метанола. 4-Деметилэпиподофиллотоксин-р - D-(o - нитроцнннамилидеп)глюкозид получается в форме бесцветных кристаллов с т. нл. 244-254 С; aj -76,9° (с 0,639 в ацетоне).
П р и .м ер 8. 4-Деметилэпиподофиллстоксин- -и-циннамнлидепглюкознд.
К 1,5 г сухого 4-деметилэпиподофнллотокCHH-p-D-глюкозида прибавляют ,30 мл свежедистиллированиого коричного альдегида и 3,0 г понообмеппого порошка Dowex (тип 50 Wx2, сухой). Исходную смесь размешивают при комнатной температуре в среде азота п без доступа влагн. Через 15 час почти нельзя обнаружить нсхОлЧный материал в тонкослойной хроматограм.че (система: плитки еиликагеля и хлороформ-4-15% метапола как промывные средства). После отфильтровывания катализатора и добавочного промывания хлороформом очишают выпареппый фильтрат хроматографией на колонне па 100 г силикагеля «Мерк. Элюируют непревращенный коричный альдегид хлороформом и оставшееся вещество хлороформом -f 2% метанола. В тонкослойной хроматограмме получают индивидуальный продукт. Перекристаллизация из 20 мл этанола дает 4-де.л1етилэпинодофиллотоксип-|3-0-циипамилидепглюкозид с т. пл.
20
239-246°С;
-86,1° (с 0,564 в ацетоне).
Пример 9. 4-Де.метилэпиподофиллотокCHH-p-D- («-фторбепзилиден) -глюкозид.
Раствор 0,5 г сухого 4-де.лтетилэпиподофиллотоксин-р-В-глюкозида в 10 мл л-фторбеизальдегида взбалтывают 3-4 час после добавления 0,26 3 безводного хлористого цинка в среде азота без доступа влаги и при комнатной температуре. Примерно через 3 час можно обнаружить только еледы непреврангенного глюкозида в тонкослойной хроматограммме (плитки силикагеля, про.мывное средство: хлороформ Н-6% метанола). Затем разбавляют реакционный раствор 30 мл хлороформа и взбалтывают три раза, употребляя по 10 мл воды. Сушат фазу хлорофор.ма сульфатом натрия и выпаривают в вакууме. Получаемый при этом маслянистый остаток прибавляют но каплям и при перемешивании в 150 мл пентан.а, причем образуется хлопьевидный осадок. Если сырой продукт выделяется маслообразно, то растворяют небольшим количеством ацетоиа и повторяют осаждение нрибавлепием но канлям в 150 мл свежего пентана. Сырой продукт очищают нутем хроматографии 100 г силикагеля «Мерк (крупность
зерна 0,05-0,2 мм. Пз элюированных хлороформом -f2% метапола главных фракций получают чистый 4-деметнлэпиподофиллотоксии-,6-0-(га - фторбензилидеп)-глюкозид. Пз абсолютного спирта нолучают бесцветные кристаллы с т. пл. 265-270 С; - 105° (с 0,509 в хлороформе).
Пример 10. 4-Деметилэпинодофнллотоксин-р-В-салицнлиденглюкозид.
1,5 г сухого 4-деметилэнинодофиллотоксинp-D-глюкозида прибавляют к 30 мл сухого салицилового альдегида и 3,0 г ионообменного норощка Dowex (типа 50WX2), сушенного
3 час нри 120° С в высоком вакууме. Воздух в колбе вытесняют азотом и размешивают реакционную смесь без достуна влаги при комнатной температуре. Паблюдают за ходом конденеации нрп помощи тонкослойной хроматографии на плитках силикагеля с хлороформом -г 15% метанола как нромывным средствами.
Через 5 час отфильтровывают катализатор и промывают еще раз хлорофор.мом. Вынаренный фильтрат очищают 100 г силикагеля (крунпость зерна 0,05-0,2 мм. После отделепня салицилового альдегида (экстракт хлороформа) элюируют вещество хлороформом + 5% .метапола. Получают индивидуальный
при тонкослойной хроматографии продукт.
Для анализа растворяют вещество в 5 мл ацетона н этот раствор прибавляют но каплям при перемешивании к 100 мл находящегося в приемнике пентана. 4-Деметилэпинодофиллотоксин-р-О-салицилиденглюкозид нолучается как бесцветный аморфный порошок с т. нл. 182-188°С; ocfo -103,7° (с 0,633 в хлороформе) .
В табл. 2 дан ряд других, ие известных до сих нор соединений, синтезированных аналогично примеру И, с их свойствами и примененнымн в данном случае исходными соединениями.
Пример 11. 4-ДеметилэпиподофиллотокcHH-p-D-(о-метоксибензилиден)-глюкозид.
9 г о-метоксибензальдегида растворяют в 60 лгл нитрометана, нрибавляют 1,5 г сухого
4-деметилэпиподофилотокеии-р - D - глюкознда и 150 ,«г л-толуолсульфокислоты. Серо-желтую суспепзию размешивают в среде азота без доступа влаги ирн комнатной температуре. За ходо.м реакции конденсации цаблюдают нри
номощи тонкослойной хроматографии (система: хлороформ + 6% метанола; хлороформ - метанол - вода (70:25:5). Через 5 час имеется только не.мпого исходиого материала кроме продукта и возникающего немного медленнее
нобочного вещества. Затем разбавляют реакционную смесь 500 мл хлороформа и взбалтывают четыре раза ио 25 мл воды. Органическую фазу фильтруют через сульфат натрия и выпаривают в вакууме. Получают маслящают 120 г силикагеля «Мерк. После отделения альдегида (экстракт хлороформа) элюируют оставшееся вещество хлороформом + 2% метанола. Эта хроматография дает производное о-метоксибензилидена, чистое по данным тонкослойной хроматограммы. Перекристаллизация из 13 мл горячего спирта дает бесцветные кристаллы с т. пл. 243- 250° С; 74,4° (с 0,884 в ацетоне). Пример 12. 4-Деметилэпиподофиллотоксин-p-D- (га-гидроксибензилиден) -глюкозид. К 2 г сухого 4-деметилэниподофиллотоксин-р-О-глюкозида придают 12 г п-гидроксибензальдегида, 4 г ионообменной смолы Dowex (тиц 50 WX2, сухой) и 100 мл нитрометана. Реакционную смесь размешивают без влаги в среде азота при комнатной температуре и контролируют ход конденсации при помощи тонкослойной хроматографии (плитки силикагеля, хлороформ -t-15% метанола как промывные средства). Примерно через 3 час реакция вполне кончена. Суспензию фильтруют, промывают остаток на фильтре 3 раза хлороформом. Затем разбавляют соединенные фильтраты 300 мл хлороформа и взбалтывают три раза по 25 мл воды. Из органической фазы получают после сущки над сульфатом натрия и после выпаривания светло-желтоокрашенный остаток, который хроматографируют для очистки 80 г силикагеля. Путем элюирования хлороформом 4-2,5% метанола можно сначала удалить избыточный альдегид. Дальнейшие элюенты, полученные хлороформом +4% метанола, содержат индивидуальный при тонкослойной хроматографии конденсационный продукт. Сырой препарат растворяют в 4 мл пентана. 4-Деметилэпиподофиллотоксин - |3-В-(л-гидроксибензилиден)глюкозид выделяется при этом как бесцветный аморфный порошок с точкой плавления 196-201° С; -96,2° (с 0,981 в метаноле). Пример 13. 4-Деметилэпинодофиллотоксин-p-D- (о-метилбензилиден) -глюкозид. метана и затем прибавляют 9 мл о-толуплоого альдегида и 150 мл «,-толуолсульфокисоты. Мсходпую смесь размешивают при комнатной температуре также без воздуха и влаги. Через 2 час возникает прозрачный раствор и в тонкослойной хроматограмме (промывное средство: хлороформ -f 15% метанола) исходный материал почти исчез. Реакционный раствор разбавляют 500 мл хлороформа и затем взбалтывают четыре раза по 25 мл воды. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и вьшаривают. Остаток поглощают на заполненной 70 г силикагеля «Мерк колонне. Путем элюирования .хлороформом можно отделить непревращенный еще о-толуловый альдегид. Последующие фракции (с хлороформом 4-2% метанола) дают чистое при тонкослойной хроматографии производное о-метилбензилидена. Для анализа растворяют вещестзо в 3 мл ацетона и этот раствор прибавляют по каплям и при перемещивании к 300 мл находящегося в приемнике иентана. 4-Деметилэпиподофиллотоксин-р - D - (о-метилбензилиден)-глюкозид получается как бесцветный аморфный порошок с т. нл. 174- 180°С; H-J -94,7° {с 0,730 в хлороформе). П р и м е 5 14. 4-Ометилэп пюдофиллотокcn-p-D- (.u-гидроксибензилиден) -глюкозид. К раствору 9 г .«.-гидроксибензальдегида в 75 мл нитрометана прибавляют 1,5 г сухого 4-деметилэпиподофиллотоксин - 3 - D-глюкозида и затем 150 мл п-толуолсульфокислоты. Желтоватую суспензию рамешивают 5 час в азотной среде без доступа воды, при этом образуется прозрачный раствор. Затем разбавляют реакционный раствор 500 мл хлороформа и промывают пять раз по 25 мл воды. Органическую фазу фильтруют через сульфат натрия и выпаривают в вакууме. Получают светло-желтое порошкообразное вещество, которое хроматографируют 110 г силикагеля «Мерк. После отделения альдегида хлороформом -|-3% метанола элюируют оставшееся вещество хлороформом + 6% метанола. Индивидуальные при тонкослойной хроматографии фракции растворяют в ацетоне, затем концентрируют их в вакууме примерно до 7 мм и нрибавляют 20 мл простого эфира. 4-деметилэпиподофиллотоксин-p-D- (и-гидроксибензилиден) -глюкозид получается в форме бесцветного, аморфного порошка с т. нл. 189-194°С; И, -99,9° (с 0,766 в метаноле).
Пример 15. 4-ДеметцлэниподофиллотокCHH-P-D- (ж-нитробензилиден) -глюкозид.
30 г лг-нитробензальдегида растворяют в 45 мл нптрометана и затем прибавляют 1,5 г сухого 4-де.метилэпиподофиллотоксин-р-0глюкозида и 6 г ионообменной смолы Dowex (тин 50 WX2, сухая). Исходную смесь размешивают в среде азота без доступа влаги и при комнатной температуре. Через час имеется только небольшое количество исходного материала в тонкослойной хроматограмме (промывное средство; хлороформ 4-6% метанола). Катализатор отфильтровывают и промывают хлороформом. Темноокрашенный фильтрат разбавляют 400 мл хлороформа и затем взбалтывают три раза но 25 мл воды. Фазу хлороформа сушат над сульфатом натрия и вынаривают. Получают жидкость, которая постепенно кристаллизуется. Сырой продукт растворяют в 30 мл хлороформа и хроматографируют 120 г силикагеля «Мерк. После отделения альдегида (экстракт хлороформа) элюируют оставшееся вещество хлороформом +2% метанола. Эта хроматографическая очистка дает в тонкослойной хроматограмме индивидуальный продукт. Для анализа растворяют вещество в 20 мл ацетона и раствор нрибавляют но канлям к 100 мг находящегося в приемнике пентана. Получают светло-желтый аморфный порошок с т. пл. 178--185°С; а 77,5° (с 0,831 в ацетоне).
Пример 16. 4-ДеметилэнинодофиллотокCHH-p-D- (г-метилбензилиден) -глюкозид.
1,5 г 4-деметилэпиподофиллотоксин-р-Оглюкозида суспендируют в 30 мл нитрометана, прибавляют 9 мл ж-толуилового альдегида в 75 мг «-толуолсульфокислоты и перемешивают исходную смесь при комнатной темнературе без доступа кислорода и влаги. Примерно через 45 мин разбавляют реакционную смесь 450 мл хлороформа и взбалтывают три раза но 25 мл воды. Органическую фазу сушат над .сульфатом натрия и испаряют растворители в вакууме. Получаемое при этом желтое масло хроматографируют для очистки 80 г силикагеля «Мерк. За отделением избыточного альдегида хлороформом как элюентом следует при помощи хлороформа -f-1,5% метанола индивидуальная по тонкослойной хроматографии фракция продукта (проверенного на плитках из силикагеля с хлороформом -f 6% метанола как промывными средствами). Перекристаллизацией продукта из хлороформа-метанола (1:1) и из чистого метанола получается чистый 4-деметилэпиподофиллотоксин-р - 0-(/г-р.етилбензилиден)-глюкозид с т. пл. 248-265°С; d, -.-166,8° (с 0,791 в пиридине).
Пример 17. 4-Деметилэпиподофи,1Лотоксин-p-D - (4-гидрокси-З - метоксибензилиден)глюкозид.
К суспензии 1,5 г сухого 4-деметилэпиподофиллотокспн-р-О-глюкозида в 30 м.л нитрометана ппибавляют 30 г ванилина и 6 г ионообменной смолы Dowex (тип 50 WX2, cvxan) и взбалтывают реакционную смесь в среде азота без доступа влаги. Примерно через 90 M.UH отфильтровывают катализатоп, разбавляют фильтрат 500 мл хлороформа и
взбалтывают три раза по 25 мл воды. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и затем выпаривают растворитель в вакууме. Для чистки хооматографируют остаток 100 г снликагеля «Мерк, причем элюентами служат хлороформ -f-6% метанола. Соединяют инднвидуа.чьные по тонкослойной хроматографии фракции (плитки силикагеля, промывное средство; хлороформ 4-15% метанола и перекристаллизовывают из 15 мг горячего метанола. Получают 4-деметилэпиподофиллотоксин-р-О-(4 - гидрокси-3 - метоксибензилиден)-глюкозид как бесцветные кристаллы с т. пл. 243-250°С; а -169,9° (с 0,637 в
пиридине).
Пример 18. 4-Деметилэпиподофиллотоксин - P-D-(2,3-диметоксибепзилиден) - глюкозид. К суспензии 1,5-4-деметилэпиподофиллотоксин-р-В-глюкозида в 30 мл нитрометана прибавляют 15,0 г 2,3-диметоксибензальдегида и 6,0 г сушенной ионообменной смолы (Dov/ex тип 50 WX2, сухая). После взбалтывания реакционной смеси в течение 1 час в среде
азота и без доступа влаги в тонкослойной хроматографии можно установить превращение почти на 85% (контроль в тонкослойной хроматограмме; плитки силикагеля и хлороформ- метанол - вода 70 ; 25 ; 5 как промывные средства). Катализатор отфильтровывают и промывают остаток на фильтре хлороформом. Разбавляют соединенные фильтраты 400 мл хлороформа и взбалтывают три раза по 25 мл воды. Органическую фазу выпарлзают после сушки над су.тьфатом натрия. Остаток хроматографируют 100 г силикагеля «Мерк, причем элюентами служат хлороформ +2% метанола. Растворяют соединенные фракции индивидуальный по токкослойной хроматографии материал - в 10 :,;л ацетона и этот раствор прибавляют по каплям к 100 мл находящегося в приемнике пентана, причем осаждается аморфный 4-деметилэпиподофиллотоксин - j3-D-(2,3 - диметохсибензилиден)-глюкозид, т. нл. 174-177° С; а -86,1° (с 0,803 в хлороформе).
Пример 19. 4-Деметилэпиподофиллотоксип-B-D- (2-этокси-З - метоксибензилидеи) -глюкозид.
К суспензии 1,5 г 4-деметилэпиподофиллотоксин-р-О-глюкозида в 30 мл 2-этокси-З-метоксибензальдегида прибавляют 0,760 г сухого хлористого цинка и размешивают исходную смесь в среде азота и без доступа влаги. Примерно через 2,5 час в тонкослойной хроматограмме (плитки из силикагеля, промывное средство: хлороформ+6% метанола) можно обнарулсить только небольшое количество непревращенного глюкозида. К суспензии прибавляют 100 пл хлороформа и 100 мл воды и хорошо взбалтывают. Затем экстрагируют водную фазу еще два раза по 30 мл хлороформа. Соединяют все фазы хлороформа, фильтруют над сульфатом натрия и затем выпаривают. Остаток желто-оранжевый раствор хроматографируют 75 г силикагеля «Мерк. После элюирования избыточного альдегида хлороформом можно при помощи хлороформа+2% метанола извлекать продукт. Соединяют индивидуальные при тонкослойной хроматографии фракции, растворяют в 25 мл метанола и размешивают 10 .мин при комнатной температуре с небольшим количеством активированного угля. После фильтрации до осветления над тальком выпаривают светложелтый раствор. Получаемую желтоватую пену растворяют в 5 лгл ацетона и при перемешивании прибавляют по каплям этот раствор к 100 мл находящегося в приемнике пентана, причем выпадает хлопьевидный осадок. Фильтрование и сушка дают 4-деметилэпиподофиллотоксин -p-D-(2-этокси-З-метоксибензилиден)-глюкозид как бесцветный порошок с т. пл. 166-17Б°С; -83,2° (с 0,863 в хлороформе).
Пример 20. 4-Деметилэпиподофиллотоксин-р-В-анисилиденглюкозид.
К 0,5 г сухого 4-деметилэпиподофиллотоксин-р-В-глюкозида прибавляют 10 мл анисового альдегида и 0,25 г безводного хлористого цинка и взбалтывают реакционную смесь в среде азота при комнатной температуре. Спустя 6 час в тонкослойной хроматограмме можно обнаружить только следы исходного материала (плитки силикагеля, промывное средство: хлороформ+6% метанола). Реакционный раствор разбавляют 30 мл хлороформа и промывают несколько раз водой. Выпариванием сушенной над сульфатом натрия фазы хлороформа получают маслянистый остаток. Масло поглощают 5 мл ацетона и этот раствор прибавляют по каплям при перемешивании к 200 мл пентана, причем выделяется сырой кристаллизационный продукт в виде хлопьев. Для очистки хроматографируют на 100 г силикагеля (крупность зерна 0,05-0,2 мм . Соединяют элюированные хлороформом4-2% метанола главные фракции и перекристаллизовывают из абсолютного спирта. 4-Деметилэпиподофиллотоксин-р-Ванисилиденглюкозид получают как бесцветные кристаллы с т. пл. 248-250°С; --92,5° (с 0.503 в хлороформе).
К смеси 1,5 г сухого 4-деметилэпиподофиллотоксин-р-О-глюкозида в 75 мл ацетона прибавляют 3,0 г безводного хлористого цинка и размешивают в среде азота при 20° С без доступа влаги. За ходом конденсации наблюдает при помощи тонкослойной хроматографии (плитки силикагеля, промывное средство: хлороформ - метанол--вода 70:25:5 и (или) хлороформ+6% метанола). После перемешивания в течение 90 мин прибавляют по каплям прозрачный реакцпонный раствор к 500 мл холодного хлороформа и отфильтровывают образующийся осадок. Фильтрат промывают водой до нейтральной реакции, сушат над сульфатом натрия и выпаривают. Остаток хроматографируют 100 г силикагеля («Мерк, крупность зерна 0,05-0,2 мм}, причем элюентами служат хлороформ-{-5% метанола. Соединяют индивидуальные главные фракции, поглощают 10 мл ацетона и этот раствор прибавляют по каплям при перемешивании к 100 мл /г-пентана, причем осал дается 4-деметилэпиподофиллотоксин-р - D - изопропилиденглюкозид в форме бесцветных хлопьев. После отфильтровывапия и сушки получают аморфный бесцветный порошок с т. пл. 173-- 176°С; а - 106,3° (с 0,938 в хлороформе) .
Пример 22. 4-Деметилэпиподофиллотоксин-р-О-циклопентилиденглюкозид.
К смеси 2 г сухого 4-деметилэпииодофиллотоксин-р-В-глюкозида в 40 мл циклопентанона прибавляют 4 г ионообменного порошка (Dowex WX2 сухого) и размешивают исходную смесь при комнатной температуре без доступа влаги в среде азота. За ходом конденсации наблюдают при помощи тонкослойной хроматографии (плитки из силикагеля, промывное средство: хлороформ-1-15% метанола). Примерно через 2 час фильтруют от катализатора. Фильтрат разбавляют 500 мл хлороформа и затем промывают несколько раз водой. Органическую фазу сушат над сзльфатом натрия и выпаривают. Получаемый остаток хроматографнруют 120 г силнкагеля («Мерк, крупность зерна 0,05-0,2 мм}, причем элюентами служат хлороформ +4% метанола. Получают главные фракции, которые, однако слабо очищены. Для получения чистого препарата хроматографируют вновь при помощи 80 г силикагеля причем теперь применяют хлороформ+30% ацетона для элюировання. Соединяют индивидуальные при тонкослойной хроматографии фракции и перекристаллизоБывают из этанола - простого эфира. Получают чистый 4-деметилэпиподофиллотоксин-р - D - циклопентилиденглюкозид с т. пл. 176-182° С; - 105,8° (с 0,834 в хлороформе).
Пример 23. 4-Деметилэпиподофиллотоксин-р-В-циклогексилиденглюкозид.
гексанона и 0,5 г безводного хлористого цинка и взбалтывают смесь без доступа влаги в среде азота и при комнатной температуре. За ходом конденсации наблюдают с помощью тонкослойной хроматографии (плитки силикагеля, промывное средство: хлороформ+6% метанола). Через 2,5 час разбавляют прозрачный раствор 60 мл хлороформа и взбалтывают несколько раз водой. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и выпаривают в вакууме. Получаемый остаток хроматографируют на 100 г силикагеля («Мерк, крунность зерна 0,05-0,2 лиг), причем элюентами служат хлороформ+2% метанола. Соединяют индивидуальные главные фракции и перекристаллизовывают из абсолютного спирта. 4деметилэпиподофиллотоксип - В - D-циклогексилиденглюкозид получают в форме бесцветных кристаллов с т. цл. 188-190°С; - 103,0° (с 0,515 в хлороформе).
Пример 24. 4-Деметил9пннодофиллотоксин-(3- (О-изопропилбеизилидеп) -глюкозид.
К раствору 1,5 г сухого 4-деметилэпиподофиллотоксин-р-О-глюкозида в 30 мл куминового альдегида прибавляют, 0,750 г сухого хлористого цинка и затем размешивают в среде азота и без доступа влаги. Примерно через 2,5 час можно обнарул нть только немного свободного глюкозида в тонкослойной хроматограмме (плитки силикагеля, промывное средство: хлороформ4-6% метанола). Желтоватую суспензию поглощают 200 мл хлороформа, прибавляют 150 мл воды и хорошо промывают. Разделяют водную фазу и экстрагируют еще два раза, употребляя по 40 мл хлороформа. Все фазы хлороформа соединяют, иромывают три раза по 30 мл воды, сушат над сульфатом натрия и затем выпаривают. Остаток - оранжево-красное масло хроматографируют 75 г силикагеля «Мерк. элюнровання хлороформом можно здалить избыточный альдегид. Хлороформом-|-2% метанола извлекают конденсационный продукт из колонны. Индивидуальные при тонкослойной хроматографии фракции растворяют в 25 мл метанола и размешивают 10 мин при комнатной температуре с 700 мг активированного угля. Фильтрованный через тальк раствор выпаривают в вакууме и поглощают остаток 5 мл ацетона. Прибавлением но каплям этого раствора в 75 мл находящегося в приемнике пентана осаждают 4-деметилэпиподофилдотоксин-р - 0-(/г-изопропилбензилиден)глюхознд, слегка розовый порошок; т. пл. 172-179°С; ,3° (с 0,958 в хлороформе).
4-Деметнлэпиподофиллотоксин - |3 - D-глюкозид, служащий исходным материалом для изготовления новых соединений общей структуры I, изготовляют ио описываемым ни/ке методам.
ацетона и 15 мл воды и после прибавления 5 мл концентрированной соляной кислоты разогревают 2 час с обратным холодильником. Затем нейтрализуют кислоту твердым карбонатом бария, отгоняют в вакууме нри 40° С ацетон. Осажденный материал поглощают в хлороформе+5% ацетона, сушат раствор над сульфатом натрия и выпаривают в вакууме. Остающийся остаток хроматографируют на
силикагеле хлороформом- -1 % метанола, причем получают сначала загрязненный, затем чистый 4-деметилэпиподофиллотоксин и непревращенный исходный материал. Кристаллизация чистых фракций 4-деметилэниподофиллотоксипа проводится из хлороформа и метанола, т. ил. 228-230° С; а о 69,8° (с 0,630 в хлороформе).
Б. Карбобеизокси-4-деметилэпиподофиллотоксин. 60 г пульверизованного как пыль 4деметилэпиподофиллотоксина сусиендируют в 1000 мл безводного этиленхлорида и иосле прибавления 19 мл абсолютного пиридина охлаждают до -10° С. При перемешивании без доступа влажности ирибавляют по каплям
при -10° С в течение 2,5 час раствор 34 г бензилового эфира хлормуравьиной кислоты в 100 мл этиленхлорида и затем дают реагировать еще 30 мин. Затем промывают реакционный раствор, сушат органическ ю фазу над
сульфатом натрия, вынаривают в вакууме и сушат остаток в высоком вакууме нри 70- 80° С. Кристаллизация сырого продукта из ацетона - простого эфира и затем двукратная кристаллизация из метанола дает 4-карбобензокси-4-деметилэиииодофиллотоксинс
двойной т. пл. 117-119° С. Путем сушки в высоком вакууме сначала при 95-110°С и затем при 130° С или путем кристаллизации из ацетоиа - иростого эфира иолучают свободиую от растворителя фор.му с т. пл. 201- 2б4°С; ,9° (с 0,535 в CHCU).
В. Тетра-о-ацетил-4-карбобензокси-4-деметилэпииодофиллотоксин-р-13-глюкозид. 26,8 г
4 - карбобензокси-4 - деметилэпиподофиллотоксина растворяют при подогреваиии в 70 мл этиленхлорида. Раствор охлаждают до +15° С и к нему прибавляют при перемешиваиии 26,0 г 2,3,4,б-тетра-о-апетил-р-О-глюкозы. Как
только растворилась преобладающая часть тетраацетил-|3-О-глюкозы, охлаждают быстро до температуры от -II до -12° С без влаги. Несмотря па пебольшие количества перастворенных исходных соединений ирибавляют затем по каплям при внутренней температуре от -10 до -12° С 17,5 мл нредвар1ггельно охлажденного до -10° С этилэфира трехфтористого бора (48% ВРз) в течение 10 мин и затем размешивают еще 40 мин нри -10° С.
Затем прибавляют по каплям ири перемешивании и охлаждении смесь 17,5 мл абсолютного пиридина и 35 мл этиленхлорида и носле прибавления еще 200 лгл этиленхлорида взбалтывают четыре раза по 100 мл воды. После
