СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТОВ Советский патент 1971 года по МПК C12N9/00 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к способам .выделения ферментов.

При известном способе выделения ферментов из фильтрата культуральной жидкости, полученной при выращивании их продуцентов, путем введения в фильтрат танина с последующим его удалением ацетоном, недостаточно полно выделяются ферменты.

С целью более полного выделения ферментов в фильтрат наряду с танином вводят органическое вещество, а именно казеиновый и мясной пептон, желатин, сухое цельное молоко, обезжиренное молоко, сыворотку, замочную кукурузную воду, причем устанавливают рН фильтрата 5,0-6,0.

Желательно вводит танин в виде раствора, содержащего 3-5 г танина, в количестве 30 мл на 1 л фильтрата; молоко или сыворотку- в количестве 50-200 мл иа I л фильтрата, замочную кукурузную воду - в количестве 10-100 мл на 1 л фильтрата, содержащую 3% суммарного азота.

Способ заключается в следующем.

Фильтрат культуральной жидкости, полученный при выращивании продуцентов ферментов, смешивают с растворимым белком, способным осаждаться танином.

ментных препаратов при почти HcnsMCHiioN выходе.

При производстве ферментов, применяющихся для фармацевтических препаратов или

для повышения качества пищевых продуктов, в качестве добавок используют казеин, молоко, сухое молоко, сыворотку, желатин, оксижелатин, пептон и растительные белки, например замочную кукурзную воду.

Для производства ферментов в техническом масштабе используют замочную кукурузную воду.

Перед введением танина устанавливают рП фильтрата культуральной жидкости 5,0-6,0

введением кислоты или щелочи.

При прибавлении танина образуется нерастворимый комплекс белка с танином, который содержит большое количество ферментов и может быть отделен от л идкой фазы известным способом после выдерживания в течение 2-24 час.

Из выделенного осадка танин извлекают при помощи многократного перемешивания с ацетоном.

Танин вводят в виде раствора, содерн аще10-100 мл на 1 л фильтрата, содержащую 3% суммарного азота.

Пример 1. 5л фильтрата культуральной жидкости, полученной нри выращивании щтамма Aspergillus ochraceus, соединяют при перемешивании со 100 мл жидкости, которая содержится в кукурузе. Полученный раствор доводят до рН 5,5 добавление IN едкого натра. Непосредственно за этим, для осаждения ферментов, медленно прибавляют при легком перемещивании раствор 20 г танина в 150 мл воды.

При этом образуется осадок, который выделяют после выдерживания в течение 2 час при комнатной температуре с помощью центрифугирования.

Полученный влажный осадок трижды перемещивают с 250 мл ацетона в течение 10 мин для удаления танина из комплекса фермента с танином.

Промытый ацетоном концентрат фермента сущат под вакуумом при комнатной температуре и получают 8,65 г сухого вещества со специфической активностью 0,81 СЕ/-мг. Это соответствует выходу 1400 СЕ на л ферментационного раствора.

Пример 2. 300 мл культурального фильтрата щтамма Aspergillus ochraceus, доведенного до рЫ 5,5 добавление IN едкого натра, смешивают с 600 мг казинового пептона, растворенного в 7,5 мл воды. Для осаждения протеазы при легком перемещивании добавляют 9 мл раствора танина, в котором содержится 1,2 г танина, в результате образуется осадок в виде хлопьев, представляющий собой комплекс танина с ферментами.

Полученный осадок отделяют от раствора центрифугированием под воздействием силы в 5000 г и непосредственно за этим четыре раза перемещивают с ацетоном для отделения танина.

Полученный продукт сущат в вакуум-эксикаторе.

По окончании сушки получают 520 мг протеазы со специфической активностью, равной 0,58 СЕ/мг.

Это соответствует выходу 1005 СЕ на л культурального фильтрата.

Предмет изобретения

I. Способ выделения ферментов из фильтрата культуральной жидкости, полученной при выращивании их продуцентов, путем введения в фильтрат танина с последующим его удалением ацетоном, отличающийся тем, что,

с целью более полного выделения ферментов, в фильтрат наряду с танином вводят органическое вещество, а именно казеиновый и мясной пептон, желатин, сухое цельное молоко, обезжиренное молоко, сыворотку, замочную

кукурузную воду, причем рН фильтрата устанавливают равным 5,0-6,0.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что танин вводят в виде раствора, содержащего 3-5 г танина, в количестве 30 мл на 1 л

фильтрата.

3.Способ по п. 1, отличающийся тем, что молоко или сыворотку вводят в количестве 50-200 мл на I л фильтрата.

4.Способ по п. 1, отличающийся тем, что замочную кукурзную воду вводят в количестве 10-100 Л1л на 1 л фильтрата, содержащую 3% суммарного азота.