СПОСОБ ОЧИСТКИ ПРОТЕАЗНОГО ИНГИБИТОРА Советский патент 1971 года по МПК A61K38/57 A61K35/42 A61K47/00 

Изобретение относится к области медицины, в частности касается способа очистки растворов протеазного ингибитора, получаемого из легких крупного рогатого скота.

Известен способ получения чистых растворов протеазного ингибитора путем осаждения балластных белков с помощью сульфосалициловой кислоты с последующим удалением избытка ее.

Недостатком данного и других известных методов является то, что осаждающий агент должен быть количественно удален из раствора, что связано со значительными трудностями, особенно при работе с анионными обменниками.

Указанные недостатки устранены в предложенном способе.

Предложенный способ отличается тем, что сопутствующие белки адсорбируют окисью магния. Это упрощает процесс и уменьшает потери активного вещества.

Полученный из легких крупного рогатого скота неочищенный и содержащий ингибитор водный раствор с активностью от 800 до 1000 антитрипсин - единиц (ATE) на 1 мл, с рН 8,5-9,5 смешивают с 3-10% (преимущественно 5%) окиси магния и механически перемешивают от 1 до 16 час (преимущественно 3 час) при температуре 10-50°С (преимущественно 25°С). Затем окись магния, содержащую протеины и красители, отделяют путем фильтрования. Окись магния кроме балластных веществ при адсорбции удерживает примерно 10% введенного биологически активного вещества. После отделения окиси магния к полученному фильтрату добавляют от 2 до 6 (преимущественно 4) объемов низких алифатических спиртов (преимущественно этанола) или ацетона. При этом осаждающее

вещество целесообразно предварительно охладить до -5°С и смесь для наиболее полного выпадения биологически активного вещества следует в течение ночи выдержать в холоде. Образуется мелкий чистый белый

осадок, который отделяют центрифугированием. Осадок промывают этанолом или ацетоном или растворяют в апирогенной воде или физиологическом растворе. Активность раствора ингибитора 2500 АТгЕ

на 1 мл, рН 2,5-3,5. Раствор ингибитора стерильно фильтруют, и он может применяться в медицине.

Пример. К 650 мл раствора ингибитора с активностью 918 АТгЕ на 1 мл при рН 8,5 добавляют 32,5 г окиси магния и механически перемешивают в течение 3 час при температуре 25°С. При последующем отделении с помощью нутча получают 580 мл раствора ингибитора с активностью 774 АТгЕ и рН

10,0. Фильтрат обрабатывают при перемешивании 60 мл катиониого обменника Wofatit KPS (товарный знак), отжимают на нутче и добавляют 4 объема концентрированного этанола при температуре -5°С. Для более полного осаждения смесь выдерживают на холоде в течение ночи. Осадок отделяют центрифугированием и растворяют в 225 мл апирогенного физиологического раствора.

Полученный концентрат ингибитора имеет активность 2502 АТгЕ на 1 мл. Степень чистоты увеличивается со 124,2 до 695 ATfE на 1 мл. Выход составляет 94,2%.

Предмет изобретения

Способ очистки протеазного ингибитора путем осаждения балластных белкбв с последующим отделением осаждающего агента, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и уменьшения потерь активного вещества, сопутствующие протеины адсорбируют окисью магния.