СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ПРОДУЦЕНТОВ ПЕКТОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ Советский патент 1972 года по МПК C12N1/14 

Изобретенне относится к области микробиологического синтеза ферментов и касается снособа приготовления питательной среды для глубинного культивирования микроорганизмов - продуцентов пектолитических ферментов и может быть использовано для глубинного культивирования плесневых грибов, нанрнмер Asp. niger, Asp. awamori, Asp. foetidus.

Известен способ приготовления питательной среды для глубинного культивнрования нродуцентов нектнназы нутем смешивания нектинсодержащего сырья, например свекловичного жома, с водой, нагревания полученной смеси, выдерживания и охлаждения ее, отделения водного экстракта от твердой фазы и введения в экстракт минеральных солей - источника фосфорного и азотного питания.

Для обеснечения интенсификации нроцесса культивироваиия продуцентов и повышения активности продуцируемых ферментов по предлагаемому способу экстракт перед смешиванием с солями подвергают гидролизу нектолитическими ферментами, нанример пектиназой. При этом нагреванне пектинсодержащего сырья осуществляют до 125-130°С, а продолжительность выдерживания равна 2 час. Количество вводимых пектолитических ферментов равно 0,2-5,0 ед/мл экстракта. Охлаждение смеси пектинсодержашего сырья

с водой осуществляют до 40-55°С, а значенне рН устанавливают 3,25-4,75.

Предлагаемый способ приготовления питательной среды для глубинного культивирования продуцентов нектиназы, например плесневого гриба Asp. awamori 16, заключается в следующем.

Берут 3%-ную суснензню свекловичного жома и гидролизуют при 125-130°С при ностоянном перемешивании в течение 1-2 час. В полученном экстракте определяют кислотность и в случае необходимости корегируют ортофосфорной кислотой до рН 3,25-4,75 и охлаждают до 40-55 С н добавляют водный раствор фермента нектиназы нз расчета от 0,2 до 5,0 сд/мл экстракта. Ферментатнвный гидролиз нроводят в течение 60-120 мин при постоянном неремешиванни и поддержании темнературы в интервале от 40 до 55°С.

К подготовленному таким образом экстракту свекловичного жома добавляют вытяжку из еолодовых ростков, автолизат мицелия и необходимые солн. Приготовленную питательную среду хорошо перемешивают н регулируют величину активной кислотности от 3,25 до 5,5-в зависимости от того, какой состав ферментного комплекса необходимо получить. Питательную среду с установленным рН стерилизуют в установке непрерывной стерилизации и направляют в стерильный ферментатор.

Культивирование продуцентов пектиназы на полученной питательной среде ведут известным способом.

Пример. Свекловичный жом в количестве 3 кг заливают 100 л водопроводной воды и нагревают в течение 2 час при температуре 125-130°С и постоянном перемешивании мешалкой. Затем суспензию охлаждают до 45°С и экстракт отделяют от твердой фазы. Добавлением ортофосфорной кислоты доводят рН до 4,0 и добавляют ферментный раствор пектиназы в количестве по 5 ед/мл экстракта. Ферментативный гидролиз проводят в течение 2 час при температуре 45°С и рН субстрата 4,0. По истечении вышеуказанного времени к экстракту добавляют вытяжку из солодовых ростков 10%, автолизат мицелия (40) и минеральные соли.

Приготовленную питательную среду стерилизуют на установке непрерывного действия и подают в стерильный ферментатор. На этой среде культивируют продуцент пектиназы. Для этого производят посев водной суспензии спор плесневого гриба Asp. awamori 16, вырашенны.ч известным способом в количестве 50 г на 1 м питательной среды, с содержапием спор 1-2X10° на 1 г питательпой среды. Добавляют пеногаситель марки А-50 в количестве 0,1% от объема питательной среды. Культивирование проводят в условия.х аэрации при подаче 1 м стерильного воздуха на 1 м питательной среды в 1 мин давлении 0,6 ати и скорости вращения мешалки 300 об/мин. Время культивирования 52 час.

Культуральную жидкость отделяют от биомассы на барабанном вакуум-фильтре. Пектолитическая активность полученной культуральной жидкости составляет 282 ед/мл.

Предмет изобретения

1.Способ приготовления питательной среды для продуцентов пектолитических ферментов

путем получения водного экстракта смешиванием пектиисодержашего сырья, например свекловичного жома, с водой, нагревания полученной смеси, выдерживания и охлаждения

ее, удаления твердой фазы из экстракта с последуюш,им смешиванием его с минеральными солями, отличающийся тем, что, с целью интенсификации процесса культивирования продуцентов и повышения активности продуцируемых ферментов, экстракт перед смешиванием с солями подвергают гидролизу пектолитическими ферментами, например пектиназой.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что пектолитические ферменты для гидролиза вводят в количестве, равном 0,2-5,0 вд/мл экстракта.

3.Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что нагревапие пектиисодержашего сырья

осуществляют до 125-130°С, а выдерживапие - в течение 2 час.

4.Способ по пп. 1-3, отличающийся тем, что oxлaждe иe смеси пектинсодержап1,его сырья с водой осуществляют до 45-55°С.

5. Способ по пп. 1-4, отличающийся тем, что рН экстракта устанавливают 3,25-4,75.