Способ приготовления питательной среды для выращивания продуцентов ферментов Советский патент 1974 года по МПК C12D13/10 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к способу приготовления питательной среды для выращивания продуцентов ферментов о

Известен способ приготовления питательной среды для выращивания продуцентов ферментов например AspergLllus awamorl - продуцентов пектолитических ферментов, предосматривающий получение экстракта свекловичного жома вытяжки солодовых pocTKOBj автолизата мщелияпродуцента о последущим смешиванием этих компонентов с минеральными солями.

Однако известный способ приготовления питательной среды не обес печивает достаточно высокий биосинтез ферментов и не возволяет полностью использовать отходы микробиологического производства.

Предлагаемый способ позволяет интенсифицировать процесс биосинтеза, увеличить выход ферментов,

комплексно использовать отходы производства, сократить расходы питьевой воды и уменьшить загрязнения окружающей среды отходами ьшкро-биологического производстве.

Это достигается тем, что в среду дополнительно вводят концентрат культуральной жидкости выращивавмого продуцента, полученного после выделения из него ферментов, содержащий 100-160 г/л сухих веществ«

При этом концентрат культуральной жидкости целесообразно вводить в количестве 10 от объема питатед: ной среды.

Концентрат культуральной жидкости вводят Б среду при получении экстракта свекловичного жома, при приготовлении вытяжки солодовых ростков, а также при получении автолизата мицелия.

Предлагаемый способ заключается в следующем.

Кощентрат культуральной жидкости (ККЖ) получают после отделения органического растворителя из асвдкой фазы смеси, оставшейся после вы деления пектолитических ферментов. После отделения органического растворителя на регенерационш х колоннах получают концентрированный раствор углеводов, в основном, в виде моно, ди и тригалактуроновьос кислот; аминокислот-лейцин, фенилаланин, валин, метионин, тироз1Ш, глицин, глютаминовая кислота, треонин серин, лизин и гистидин, а также небольшое количество минеральных солей, которые в процессе регенерации переходят в нерастворимые. Ддя отделения нерастворимой твердой фазы КВ1 фильтруют, затем стерилизуют на установке непрешвной стерилизации (УНС) при , устанавливают рН, равными 3, 2-3,8 с помощью ортофосфорной кислоты и вводят в состав питательной среды в количестве до 10 от объема. Срок годности ККЖ к употреблению 48 час. В сдучае более продолжительного хранения необходимо хранить кощентрат в стерильньос условиях. Концентрат культуральной жидкости используют на стадиях приготовления экстракта свеклов1гчного жома, вытяжки из солодовых ростков автолизата мицелия за счет сокращения количества воды шш вводят в состав питательной среды за счет сокращения количества экстракта свекловичного жома. Экстракт свекловичного жома получают путем температурного и ферментативного гидролиза водной суспензии свекловичного жома, используя ЮШ на стадии приготовления суспензии с последующей фильтрацией и прессованием твердой фазы. Вытяжку из солодовых ростков готовят в виде 10 суспензии путем выдерживания в течение 4 час при 370С при использовании в качестве экстрагирующего агента 1Ш}й с последующей фильтрацией и прессованием твердом фазы. Автолизат мицелия готовят в виде lOfo суспензии мщелия грибапродуцента, получе1шого от предыдущей ферментации путем выдерживания в течение 4 час при при использовании в качестве экстрагирующего агента КЮК с последущей фильтрацией и прессованием. В дальнейшем способ поясшется пршлером. ГТ Р И М Е Р. В высушенный и мелко размолотый шщелш гриоапродуцента, полученный от предыдущего культивирования в количестве 10 кг заливают 100 л KKS с РН 3.5, перемешивают, нагревают до 400С и выдерживают 4 час при посточнном перемешивании. Затем суспензию фильтруют и прессуют для отделения фазы. К полученному таким образом автолизату мицелия (4) добавляют вытяжку из солодовых ростков (10%}. кстракт свекловичного жома(85,15) с оли- сульфАт аммония (0,7), калий фосфорнокислый (0,1), магний сернокислый (0,05) перемешивают, устанавливают рН 4,0, стерилизуют на установке непрерывной стерилизации и загружают в стерильный ферментер. Посев производят спорами Aspergittus awamori. 16 В КОличестве 50 г на I м питательной среды с содержанием спор 1-2x10 на I г питательной среды, добавляют пеногаситель марки АС-50 в количестве 0,01 от объема питательной среды. Кушэтивирование проводят при в условиях аэрации при подаче I мз стерильного воздуха на I мз питательной среды в I мин., давлении 0,6 ати и скорости вращения мешалки 300 об/мин. Время культивирования 52 час. Культуральную жидкость отделяют от биомассы на автоматическом камерном фильтр-прессе. Пектолитическая активность культуральной жидкости 92 ед/мл (интерферометрический метод определения активности). ПРЩРЖТ ИЗОБРЕТШИ 1.Способ приготовления питательной среды для выращивания продуцентов ферментов, например AspergiCCus awamorL- Продуцентов пектолитических ферментов, гфедусматривающия получение экстракта свекловичного жома, вытяжки солодовых ростков, автолизата лшцелия-продуцента с последующим смешиванием этих компонентов с М1шеральныгли солями, отличающийся тем, что, с целью интенсификации процесса биосрштеза продуцируемых ферментов и использования отход,ов производства, в среду дополнительно вводят концентрат культуральной жидкости выращиваемого продуцента, полученного после выделения из него фер- ментов, содержащий 100-160 г/л сухих веществ. 2,Способ по П.1, отличающийся тем, что концентрат культуральцой жидкости вводят 5 В количестве 10% от объема питательной среды. 3.Способ по пп.1-2, отличающийся тем, что концентрат культуральной жидкости вводят в среду при получении экстракта свекловичного жома. 4.Способ по ПП.1 и 2, о т что KOHличающиися тем, центрат культуральной жидкости вводят в среду при приготовлении вытяжки солодовых ростков. 5. Способ по пп. 1и2, отличающийся -,тем, что концентрат культуральной жидкости вводят при получении автолизата мицелия.