СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИГЛИЦЕРИДОВ Советский патент 1973 года по МПК G01N33/48 

1

Изобретение относится к области медицинской биохимии, а именно к способам количественного определения триглицеридов.

Известен способ определения триглицеридов в сыворотке крови путем расщепления жиров гидролизом, определения жирных кислот, общего холестерола и фосфолипидов.

Однако такой способ не позволяет получить достаточно точные и надежные результаты определения триглицеридов в жидкостях организма, например, в сыворотке крови.

Целью изобретения является уточнение и упрощение методики определения триглицеридов.

Достигается это тем, что липопротеиды и не содержащие протеинов нейтральные жиры расщепляют посредством нолученной из Rhizopus arrhlzLis липазы и полученный в качестве продукта расщепления глицерин определяют известным способом.

Пример 1. 10 л сыворотки человеческой крови смешивают по очереди со следующими реактивами:

1,5 мл буферного раствора триэтаполамина (0,1 М с величиной рН 7,6, содержащего НАДХ (0,12 ммоль и сульфата магния (0,74 ммоль);

0,1 мл соли фосфоэнолпировиноградной натрий-кислоты (4,8 ммоль) и аденозинтрифосфата (1,3 ммоль), растворенного в буферном

растворе триэтаноламина (0,1 М) с рН 7,6;

0,2 мл липазы из Rhizopus arrhisus (4 мг/мл) (3,500 еа./лг 14.000 ед./мл);

0,005 мл лактатдегидрогеназы (900 ед./мл) (пируваткиназы 150 ед./мл).

Полученный таким путем раствор через 5 мин подают в кювету и определяют экстинкцию при 366 нм (). Благодаря добавке 0,005 мл глицерокиназы (85 ед./мл) происходит ферментная реакция, которая ведет через соль пировиноградной кислоты с уменьщением НАДХ к НАД (никотинамид-аденин-динуклеотид). Через 10 мин. считывают второй коэффициент экстинкции (2)- Из разности экстинкций получают содержание триглицерида по следующей формуле А Х4224 л4г % триглицеридов

Пример 2. 2,5 мл водного буферного раствора следующего состава (мг): триэтаноламингидрохлорид 65, тригидроксиметиламинометан 25, динатриевая соль аденозитрифосфата 1,25, сульфат магния (MgS04X7H2O) 1,25,-смещивают с таблеткой, содержащей (мг): НАДХ 4,5, фосфоэнолпировиноградная натрий-кислота 6,0, глицин 58,8, хлорид калия 14,8, полиБОск 6000 4,4. После растворения таблетки подготовленный таким образом рабочий раствор вводят в кювету и смещивают с 20 мл сыворотки и 30 мл ферментной смеси.

состоящей из лактатдегидрогеназы, пируваткиназы и глицерокиназы.

По окончании предварительной реакции определяют экстинкцию, смесь смешивают с 20 мл липазы из Rhizopus arrhizus и вычисляют из второго коэффициента экстинкции триглицерида, как описано в примере 1.

Предмет изобретения

Способ количественного определения триглицеридов, связанных с липопротеинами, и

не содержащих протеинов нейтральнь х жиров в растворах, например, в жидкостях организма, путем ферментативного расщепления жиров, отличающийся тем, что, с целью уточнения и упрощения методики, липопротеиды и не содержащие протеинов нейтральные жиры расщепляют посредством полученной из Rhizopus arrhizus липазы и полученный в качестве продукта расщепления глицерин определяют известным способом.