Способ экспрессной диагностики холерных вибрионов Советский патент 1981 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицине Известен способ экспрессной диагн стики путем нанесения материала, содержащего микроорганизмы, на предмет ное стекло, добавления эритроцитов, сенсибилизированных специфическим гамма-глобулином, и визуального учета реакции. Однако обнаружить холерные вибрионы указанным способом можно только в чистой культуре, при наличии посторонней подвижной микрофлоры диагностика невозможна. Целью изобретения является разработка способа, позволяющего идентифицировать холерные вибрионы в присутствии посторонней микрофлоры без выделения чистой культуры. Достигается это тем, что учет результатов реакции проводят под фазово-контрастным микроскопом по наличию специфической реакции антигенантитело, морфологии и подвижности вибрионов. Пример. Готовят препарат лиофилизированных форадализированных эр троцитов барана, не сенсибилизирован ных (контрольных) и сенсибилизированных гамма-глобулином, выделенным из холерной О-сыворотки (спытньис) . На предметное стекло наиосян петлей диаметром 4 мм каплю 0,5%-ной взвеси в физиологическом растворе эритроцитов, сенсибилизированных спещ1фическим гамма-глобулином. В кашпо эритроцитов вносят петлю исследуемого материала (нативные испражнения, вода,пленка с первого пептона), перемешивают и покрывают стеклом. На этом же стекле ставят контроль, который представляет собой раздавленную каплю из смеси контрольных эритроцитов и исследуемого материала. Подготовленный препарат помещают во влажную камеру при на 10 мин, а затем просматривают под МИКРОСКОПОМ, используя фазово-контрастное устройство. Находящиеся в исследуемом материале холерные вибрионы при своем движении сталкиваются с эритроцитами, сенсибилизированными специфическим гамма-глобулином, и прикрепляются к ним. Адсорбировавимеся вибрионы, пытаясь оторваться от эритроцита, совершают при этом резкие, типичные для вибрионов, движения и увлекают за собой эритроциты.

При обнаружении 2-3 подвижных эритроцитов с адсорбировавшимися на них вибрионами дгиот заключение о наличии в исследуемом материале холерных вибрионов.

Заключение основывгиот на совокупности трех признаков: наличие специфической реакции антиген-антитело/ морфология вибриона, подвижность вибриона.

В контрольном препарате обнаружиBcUOT эритроциты, спокойно плывущие во взвешенном состоянии или неподвижные. Холерные вибрионы или посто.ронние бактерии, сталкиваясь с несенсибилизированными эритроцитами, не адсорбируются на них.

Чувствительность предлагаемого способа при исследовании нативных нефильтрованных испражнений, зараженных холерными вибрионами, 1 млн. микробных клеток в 1 мл. Результаты анализа с помощью предлагаемого способа получгиот через 10-15 мин от начала исс дедования подозрительного материала.

С первой пептонной воды холерные вибрионы обнаруживают предлагаемым

способом через 6 ч при наличии в посевной дозе испражнений 1000 микробных клеток. В воде холерные вибрионы обнаруживают при концентрации 100.тысяч микробных клеток в 1 мл.

При подращивании чувствитель-ность повыиается.

Препарат лиофилизированных эритроцитов, сенсибилизированных гаммаглобулином, может храниться в течение полутора лет при 4 С без снижения активности.

Формула изобретения

Способ экспрессной диагностики холерных вибрионов путем добавления к гсследуемому материалу эритроцитов, сенсибилизированных специфическим гамма-глобулиноVr о т л и ч а20 ю щ и и с я тем, что, с целью идентификации холерных вибрионов в присутствии посторонней микрофлоры, учет результатов реакции проводят под фазовоконтраст олм микроскопом

25.ПС наличию специфической реакции антиген-антитело, морфологии и подвижностй вибрионов.