Способ выявления холерных вибрионов Советский патент 1976 года по МПК C22C29/16 C04B35/583 

1

Изобретение относится к медицине и предназначено для ферментной диагностики микробов.

Известен способ выявления холерных вибрионов, заключающийся в посеве исследуемого образца на жидкие среды с последующим пересевом всех культур на плотную среду и дальнейшим изучением свойств вьщепенных культур.

Однако данный способ не обеспечивает малого объема выполняемых работ и быстроты получения ответа.

С цепью сокрашения объема выполняемых работ и ускорения ответа в предлагаемом способе пересеву на твердую ереду и дальнейшему исследованию подвергают лишь образцы, давшие положительную реакцию на оке ид азу в жидкой среде.

Способ выявления холерных вибрионов осушествляют следующим образом.

Во вторую пептонную воду после инкубации в течение 6-9 час при 37 С добавляют 2-4 капли на 1 мл среды 0,04-0,05%-ного свежеприготовленного водного раствора диметилпарафенилендиамина

(дйгидрохлорида) с рН-3,0 через 1--10мин появляется четкое розэво-малиновое кольцо.

После пересева из первой среды накопления (засеянной исследуемым материалом на холеру) во вторую среду накопления (1%-ная вторая пентонная вода), последнюю инкубир5гют при 37 С в течение 6-9 час. Затем во вторую среду накопления добавляют из расчета 2-4 капли на 1 среды 0,04-0,05%-ного свежеприготовленного водного раствора диметилпарафенилендиа- мина (дигидрохлорида) с рН-3,0. При наличии вибрионов на поверхности второй среды накопления через 1-10 мин после добавления реактива появляется четкое розово-малиновое кольцо (положительная проба на оксйдазу). Для дальнейшего бактериологического исследования на холеру берут только пробы с положительным резултатом на оксйдазу.

Пример. Указанным способом определен фермент оксидазы у 223 штаммов холерных вибрионов (10 классического и 213 Эль-Тор биотипа)68 штаммов неаг- гпютинирующихся Вибрионов и 199 штаммов бактерий кишечной группы (возбудителя дизентерии, брюшного тифа, паратифа А,В, салмонеллеза, псевдотуберкулеза и кишечная палочка), засеянных в 1%-ную пептонную воду (рН-7,8) через 6-9 и 24 час инкубирования в термостате при 37 С. Во всех сроках наблюдения положительную реакцию на оксидазу дают все штаммы холерных, не агглютинирующихся вибрионов, а бактерии кишечной группы дают отрицательный результат. На выявление фермента оксидазы не влияет бактерий рода Echeh(chia,5a8moneE a, Citroboctef(в дозах ) при их совместном вырашивании с холерными и неагглютинирующимися вибрионами (в дозах 10 -10). В первую 1%-ную пептонную воду (1 ср да накопленияj засеяны испражнения, EXoE-i и штамм вибриона в дозах, соответстаенно микробных клеток. В этой серии опытов использованы 6 штаммов холерного вибриона обеих биотипов и 2 штам ма неагглютинирующихся О холерной сывороткой вибрионов (НАГ). Через 6 час сделан пересев во вторую среду накопления и через 7 час отмечали положительную реакцию на оксидазу во всех пробирках за исключением пробирок, где засеяны лишь Е. СоВ испражнения. Положительная реакция на оксидазу отмечена (в посевах на 1%-ную пептонную воду) у различных штаммов вибрионов в зависимости от посевной дозы в сроки 6-9 час. Четкая положительная реакция на оксидазу отмечалась при концентрации вибрионов в 1 мл 10 клеток. Контакт в течение 9-24 час диметилпарафенилендиамина в 1%-ной пептонной воде со штаммами холерных и НАР-вибрионов не приводил к изменению высеваемости, морфологии, подвижности, агглютинабильности. биохимических и серологических свойств у вибрионов. Формула изобретения Способ выявления холерных вибрионов в исследуемом материале путем посева на жидкие среды с последующим пересевом на плотную среду и дальнейшим изучением ч а ю свойств вьщеленных культур, о т л и щ и и с я тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, пересеву на твердую среду и дальнейшему исследованию подвергают лишь образцы, давшие положительную реакцию на оксидазу в жидкой среде.