СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ПРОТИВОХОЛЕРНЫХ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ Советский патент 1973 года по МПК G01N33/53 

1

Изобретение относится к медицине.

Известны серологические методы исследо кигия при диагностике холеры, т. е. обиар женне снсцнфическнх противохолерных антител в сыворотке кровн на основании реакции агглютинации.

Цель изобретения - ускореиие и улрош,енне нроцесса обнаружения противохолериых антител в сыворотке крови.

Это достигается тем, что взвесь индикаторного штамма холерного вибриона смешивают с исследуемой сывороткой и результат учитывают при помощи фазово-контрастиой микросконнн но образованию конглолгератов.

При м е р.

А. Агаровую культуру, выдержанную в течение 10-24 час, индикаторного штамма эмульгируют в 1%-ион иеито1Н10и воде или в физиологическом растворе иовареиной соли, гхстота взвеси 2-3 млрд, микробных тел в 1 мл но онтнческол:у стандарту.

Б. Готовят контрольный препарат, для чего на хороню обезжирегнгае предметное стекло большой бактериологнческой петлей наносят канлю взпеси нндикаториого штамма, накрывают нокровным стеклом и рассматривают в фазово-коитрастиом микроскопе с объективом 40х, наблюдают характерную морфологию и нодвижиость холерного вибриона.

В. На другое предметное стекло большой Гетлей ианосят каплю испытуемой сыворотки, взятую этой же нетлей каплю взвеси индикаторного И1тамма смегнивают с кан.шй сывороткн, накрывают нокровиым стекло.м и рассматривают также, как и коитрольный препарат. При наличии в испытуемой сыворотке специфических ант1ггел наблюдают склеивание и и-ммобилизацию вибрионов (время наблюдеиия каждого пренарата от нескольких до 3-о мин.

Оцеику нитенсивности реакции производят следующим образом:

четыре креста (+ + + +) - к началу иросмотра препарата почти все вибриоиы склеены в ко:миактиые конгломераты. В течение несколькнх секунд можно наблюдать беснорядочные колебательные или вращательные дви ження отдельных конгломератов, а затем иолную неподвижность их;

три креста (+Ч-+) - коигломераты образуются с некоторой задержкой (1-2 мин), но такие же компактные, как и в случае четырехкрестовой оценкн;

два креста (-f-f) - образованне рыхлых и меньн1их по размеру коигломсратов на протяжении 2-4 .UH после соединения сыворотки с культурой, конгломераты и отдельные особи микробов .могут оставаться подвижиыми в

течение 3-4 мин.

один крест ( + ) - медленное (4--5 мин) образование небольших рыхлых подвижных конгломератов; часть образовавшихся конгломератов распадается на изолированные внбрионы, другие вибрионы снова склеиваются в небольшие рыхлые конгломераты; имеется .много подвижных микробов.

Г. Неразведенные сыворотки, давшие положительную реакцию (образование конгломератов) следует раститровать так, чтобы получить разведение 1;10, 1:20, 1:40, 1:8 г;Для этого готовят дополнительно для каждой «положптельной сывороткн ряд из 4 пробирок; в первую пробирку ряда вносят 0,9 мл 1%-пой пептонной воды или физиологического раствора, в остальные по 0,5 мл; в пробирку добавляют 0,1 мл соответствуюш,ей сыворотки и затем переносят последовательно из одиой пробирки в другую но 0,5 мл. С каждым нз полученных разведений сывороткн ноступают так же, как указано в пункте В.

Д. Как «полоясительную реакцию в том нли ииом разведении учитывают лишь реакции, оцениваемые не ниже, чем на два креста

(++).

Е. Определение титра специфических антител в сыворотке производится по паибольшему разведению сыворотки, вызвавшему феномен склеивания вибрионов, оцениваемому пе ниже че.м на 2 креста. При этом следует иметь в виду, что разведение сыворотки в ряду пробирок

соответствует удвоенное окончательное разведение сыворотки на стекле (петля разведения сыворотки плюс петля взвеси вибриона). ТаКИМ образом, реакцию на стекле с неразведенной сывороткой оценивают как реакцию в разведении 1:2, с сывороткой 1:10 - как реакцию в разведении 1:20 и т. д.;

Ж. Диагностическое значение имеет резкоположительная реакция (на 3-4 креста) и разведении 1:2. (одно-двухкрестовая реакция в этом разведении может носить песпецифнческий характер). Более активные сывороткн (с

высокими титрами специфических антител) дают положительные реакции (не ниже, чем на два креста) в разведениях 1:20-1:320. Такие реакции, как правило, совпадают с высокими титрами агглютининов или вибрацноцидпых

антител.

Предмет изобретения

Способ обнаружения противохолерных аитител в сыворотке крови, основанный на взанмодействии антигена с антителом, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упроидения процесса, взвесь индикаторного штамма холерного вибриона смешивают с исследуемой сывороткой и результат учитывают при помоши фазово-контрастной микроскопии но образованию конгломератов.