Способ получения полимиксана Советский патент 1993 года по МПК C12P19/04 

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения полисахарида пол- имиксана, находящего применение в кондитерской промышленности (при приготовлении кремов, желе), в парфюмерии (в производстве шампуней, косметических средств), в нефтехимической промышленности (для повышения нефтеотдачи пластов).

Цель изобретения - получение пол- имиксана, не содержащего спор штамма- продуцента.

Поставленная цель была достигнута в результате того, что в качестве продуцента использовали штамм Вас. polymyxa 1459-Л, а выращивание его осуществляли на среде, содержащей источник аммонийного азота, например сульфат аммония.

Исследованиями было установлено, что штамм Вас. polymyxa 1459-Л не образует спор при культивировании на питательной среде, в которой в качестве источника азота использован источник аммонийного азота. При использовании в качестве источника азота источников органического и нитратного азота культура спорулировала. Результаты проведенного исследования представлены в табл. 1.

Выращивание культуры проводили на среде, содержащей, мас.%: гидролизован- ный кукурузный крахмал 3,0; одиозамещен- ный и двухзамещенный фосфат калия по 0,05; сульфат магния 0,02; хлористый кальций 0,02. Культивирование проводили в течение 72 ч при температуре 28 ± 1°С и рН среды 7,0 на круговой качалке, делающей 220 об/мин, .

Штамм Вас. polymyxa 1459-B, применяемый в известном способе, образовывал споры при выращивании на всех исследованных средах.

По сравнению с известным способом предложенный способ обеспечивает практически одинаковый выход полисахарида при несколько, меньшей длительности процесса. Сравнение предложенного способа с известным способом по основным показателям приведено в табл. 2.

Поставленная цель - предотвращение загрязнения целевого продукта споровым материалом продуцента - достигается на.

со

с

оэ w

VI 00

4

средах различного состава, содержащих источник аммонийного азота как единственный источник азота, и подтверждается приводимыми ниже примерами. В равной мере может быть использован сульфат или хлорид аммония. При использовании нитрата аммония возможно частичное спорообра- зование.

Выделение полимиксана из культураль- ной жидкости осуществляют обычно ис- пользующимися для этого приемами.

Отличительные приемы предложенного способа - использование штамма Вас, poiymyxa 1459-Л и культивирование этого штамма на среде, содержащей источник амт монийногр азота как единственный источник азота - для получения полисахарида, не содержащего спорового материала продуцента, ранее в технологии полисахаридов не использовались. Положительный эффект достигается только при совместном исполь- зовании обоих этих приемов, но этим причинам заявитель считает, что предложенный способ соответствует критериям существенных отличий,.

Более подробно сущность предложенного способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Культурой Вас. poiymyxa 1459-Л, смытой с косяка картофельного ага- ра, засевали среду, содержащую, мас.%: гидролизованный кукурузный крахмал-1,5 по РВ; кормовые дрожжи 0,75; однозамещенный фосфат калия 0,05; двухзамещен- ный фосфат калия 0,05; сульфат магния 0,02; хлористый кальций 0,02t углекислый кальций 0,75 и вода до 100.

Предварительно среда была разлита в колбы емкостью 750 мл, в каждую колбу вносили по 200 мл питательной среды,

Культивирование осуществляли на качалке при температуре 28 ± 1°С и числе оборотов качалки 220 об/мин. Начальный рН среды составлял 7,2, выращивание продолжалось 17ч.

Полученная культуральная жидкость была использована в качестве посевного материала для последующей ферментации. Ферментацию осуществляли в колбах объе- мом 750 мл. В каждую колбу было внесено по 200 мл питательной среды, содержащей,

мас.%: гидролизованный кукурузный крахмал 3,0% по РВ; сульфат аммония 0 - 0,5, однозамещенный и двухзамещенный фосфат калия по 0,05; сульфат магния 0,02, хлористый кальций 0,02, углекислый кальций 0,75 и вода до 100. Начальный рН среды 7,1, посевного материала вносили по 5 об.% в каждую колбу. Культивирование проводили на качалке при 220 об./мин при температуре 28 ±1°С.

Через 72 ч культивирования были получены следующие результаты, представленные в табл. 3.

П р и м е р 2. Посевной материал был получен, как и в примере 1, но в аппарате объемом 1 куб. м.

Культивирование осуществляли в аппарате объемом 6,3 куб. м при использовании среды следующего состава, мас.%: гидролизованный кукурузный крахмал 3,0; сульфат аммония 0,1; однозамещенный и двухзамещенный фосфат калия по 0,05; хлористый кальций 0,02; сульфат магния 0,02 и вода до 100%. Культивирование длилось 40 ч при температуре 28 ±1°С,К моменту завершения ферментации со- держание полисахарида в культуральной жидкости равнялось 9,2 г/л, вязкость культуральной жидкости -110 сП..Споры в культуральной жидкости и в высушенном п репарате полисахарида отсутствовали. .

Таким образом, предложенный способ имеет определенные преимущества по сравнению с известным способом, который одновременно может рассматриваться и как способ-прототип и как базовый объект сравнения.

Формула изобретения

Способ получения полимиксана путем культивирования штамма-продуцента вида BacJIIus poiymyxa на питательной среде, содержащей источники углерода и азота, с последующим выделением целевого продукта, о т л и чающийся тем, что, с целью предотвращения загрязнения целевого продукта споровым материалом продуцента, в качестве продуцента используют штамм Bacillus poiymyxa ВКПМ В-4902, а культивирование осуществляют на среде, содержащей в качестве источника азота сульфат аммония.

Таблице 1

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения полисахарида пол- 5имиксана. Цель изобретения - получение препаратов полисахаридов, лишенных спорового материала штаммов-продуцентов, что важно для пищевой промышленности и медицины. Сущность изобретения заключается в использовании штамма Вас. polymyxa ВКПМ В-4902 и выращивании этого штамма на питательной среде, содержащей в качестве источника азота только источник аммонийного азота, что приводит к утрате этим штаммом способности спорообразования. Зтабл.

Таблица 2