СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ЭНТОБАКТЕРИНА-. Советский патент 1973 года по МПК A01N63/00 

1

Изобретение относится к защите растений, а именно к способам получения препаратов, используемых для борьбы с насекомыми-вредителями.

Известен способ получения препарата энтобактерина путем выращивания культуры Вас. thuringiensis (cereus) var. galleriae в ферментерах на среде, содержащей кукурузный экстракт, глюкозу, каустическую соду « воду. Микробную массу высущивают и добавляют наполнитель.

Однако при этом способе не учитывается способность некоторых штаммов выделять в культуральную среду в процессе форментации термостабильный экзотоксин в растворенном виде. Этим и объясняется, что культуральная жидкость с содержащимся в ней термостабильным экзотоксином не утилизируется, а идет в отход.

Цель изобретения - получить термостабильный экзотоксин.

Это достигается тем, что высущивание массы проводят вместе с культуральной жидкостью при 115-118°С.

Для выращивания используют щтаммы, заведомо продуцирующие термостабильный экзотоксин.

Выращивание посевного материала производят в биологических матрицах на плотной питательной среде, содержащей, % :

Кукурузный экстракт2

Глюкоза техническая1

рН раствора6,8-7,2

Для засева матрацев используют суспензию заспорованной культуры, полученную смывом ее с косяка исходной пробирки.

Культуру на матрице выращивают в термостате при 30°С в течение 8-10 час до стадии молодых вегетативных клеток.

Культуру, полученную в биологическом матраце, смывают с твердой, питательной среды раствором кукурузпо-глюкозовой среды. Полученной суспензией в количестве 500 мл с титром 1X10 клеток/лгл (0,005%) при отсутствии в ней посторонней микрофлоры и фага засевают ферментеры с объемом питательной среды 10 м, содержащие среду следующего

состава, %:

Кукурузный экстракт2

Глюкоза техническая1

Жир кащалотовый0,05-0,1

рН6,8-7,2

Культуру в ферментерах выращивают при 29-31°С в течение 30-35 час при аэрации 0,1-0,2 л воздуха на 1 л среды в минуту при непрерывной работе мещалки.

Процесс куотьтивирования прекращают при наличии в кулЬтуральной жидкости до 5% свободных спор и кристаллов от общего количества включеиий; при отсутствии посторонней микрофлоры, при титре культуры не менее 1 млрд. сиор/мл.

Нативная

Насекомые культуральная жидкость

CSQ 0,125 игл/.ил

(0,098-0.132) Cji 0.0112 мл/г среды (0,0085-0,0148)

Cj, 0.007 мл/сл

(0,00925-0,0053) Сд, 0,216 ..1л1мл

(0,164-0.285) Сзо 0,13 МЛ/Л1Л

(0,099-0,172) CSD 0,0545 мл/лм

(0,0415-0.072) Cji 0.121 мл/мл

(0,0912-0,159)

Сзо 0,0282 мл/мл

(0,0214-0,0372) мл/мл

(0,845-1,47) Cso 2,25 мл/мл

(1,71-2,97) ,16 мл/мл

(1,64-2,85)

Примечания:

- миллиметров нативной культуральной жидкое гм на миллиметр раствора

- миллиметров нативной культуральной жидкости на грамм питательной среды

- миллиметров нативной культуральной жидкос1м на 1 см обрабатываемой поверхности.

Из ферментеров культуральную жидкость передают в сборники, здесь культуру тщательно перемещивают и передают на сушку.

Сущку культуралЬной л идкости вместе с кристаллическими включения.ми и спорами производят в потоке горячего воздуха на распылительно-сушильной установке типа Т-100 при температуре воздуха 115-118°С.

Полученный сухой продукт проверяют на биологическую активность на тест-насекомых: большая вощинная моль, 7-й возраст и 64-68часовые личинки комнатной мухи.

Затем доводят высушенный продукт до стандартной биологической активности путем добавления наполнителя и тщательно перемешивают полученный состав в смесителе.

Полученный препарат обладает широким избирательным действием.

Препарат эффективен против таких представителей чешуекрылых, как совки и яблонная плодожорка, двукрылых (мухи, комары), прямокрылых (вредная черепашка) и может быть использован в течение всего вегетационного периода на многих сельскохозяйственных культурах, а также в других областях народного хозяйства.

П .р е д м е т изобретения

1.Способ получения препарата энтобактерина путем выращивания штаммов Bacillus

thuringiensis (cereus) var. galleriae на питательной среде, содержащей кукурузный экстракт, глюкозу, каустическую соду и воду, включающий высущивание микробной массы и добавление наполнителя, отличающийся тем,

что, с целью получения термостабильного экзотоксина, высушивание микробной массы проводят вместе с культуральной жидкостью при М5-118°С.

2.Способ по п. 1, отличаюш ийся тем, что для выращивания используют штаммы, продуцирующие термостабильный экзотоксин.