Способ получения протеолитических ферментов Советский патент 1991 года по МПК C12N9/54 A01N63/00 

Изобретение относится к микробиологической промьшленности, в частности к получению биологически активных веществ - протеолитических ферментов и инсектицидного комплекса.

Цель изобретения - одновременное получение инсектицида на одной питательной среде.

Пример. Для одновременного получения на одной питательной среде протеолитических ферментов и инсектицида используют следующие штаммы.

Штамм 69-6 Вас. thuringiensis V. galleriae - промышленный продуцент инсектицидного препарата - энтобак- терина. Штамм GFP-51 Вас. thuringien- 818 V. gallferiae - продуцент протеолитических ферментов депонирован в ЦМГГМ ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ .

Именно эти штаммы из большого количества изученньк микробных ассоци - аций не проявляют антагонистических свойств и представляют собой перспекг тивную микробную ассоциацию.

Для получения посевного материала используют культуры микроорганизмовJ выращенные до спорового состояния на СПА. Перед засевом в МПВ с целью получения посевного материала споры прогревают при 75 С 15 мин. Затем. культуры подращивают в МПВ при 220 об/мин, 30 с, в колбах емкостью 750 ш. Полученные посевные вегетативные культуры используют для засе-

штаммов

активность биомассы LKjp (сп./мл)

Культивирование проводят при , . 220 об/мин, в качалочных колбах емкостью 750 мл. Длительность ферментации (до 95% высыпания спор) составляет 44-48 ч. По окончании ферментации биомассу отделяют от культу- ральной жидкости центрифугированием Из культуральной жидкости одним из промьш1ленных методов - методом осаждения белков ацетоном получают ацева ферментацирнной среды. Состав ферментационной среды и условия ферментации при совместном раздельном выращивании штаммов, %: ,05 .

MnSO . CaCl, KjHPO , CuSO

0,04

0,23

0,08

1,13

0,001

0,01

0,02

Na-цитрат

(NH)S04

Кормовые сухие,

, дрожжи2

Кукурузный экстракт0,5

Сревая мука 0,5 рН среды до 7,2-7,3 доводят до 40% NaOH.

В ферментационную среду вносят вначале посевной материал штамма GFP-51 Вас. thuringiensis v. galleriae и при выходе культуры на стади экспоненциальной фазы роста вносят посевной материал штамма 69-6 Вас, thuri giensis v. galleriae в соотношении .9:1. При других пропорциях псевных доз поставленная цель не до- стигается.

В таблице показано влияние соотн рения посевных доз штаммов GFP-51 и 69-6 Вас. thuringiensis v. galleriae на синтез биологически активны веществ (БАВ).

25-50

30-80 70-140

(1-3)-1ов (4-9)-10 (3-7).10

тоновый ,порошок - ферментный препарат. Протеологическая активность ацетонового порошка определяется модифицированным методом Ансона. Биомасса используется в качестве биологического инсектицида. Инсектицидная активность (LKjj) штаммов определяется по ГОСТ 21108-75,нтoбaктepин сухой.

Таким образом, при использовании предлагаемого способа повышается коэффициент использования оборудования в результате того, что за одну ферментацию из одного ферментера можно получи Ь два продукта - ферментный препарат и биологический инсектициду вследствие комплексного использования продуктов культивирования расход питательной среды сокращается вдвое; продукты культивирования используются полиостью, что предполагает возможность организации малоотходного производства.

Форму л а и 3 о б ре тения

Способ получения протеолитических ферментов путем приготовления посевного материала штамма бактерий Bacillus thuringienaie var. galleriae

GFP-51, засев и .культивирование в жидкой питательной среде, содержащей источники азота, углерода и стимуляторы роста, с последующим отделением биомассы и выделением из культураль- ной жидкости протеолитических ферментов, о т л и ч а и и с я тем, что, с целью одновременного получения инсектицида, на стадии экспоненциального роста в питательную среду допол-. нительно вносят посевной материал штамма бактерий Bacillus thuringi- ensis var. galleriae 69-6, при этом посевной материал каждого из

штамм ов берут в соотношении,

соответственно равном 9:1, а отделенная от культуральной жидкости биомасса является инсектицидом .

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в ч аст- НОСТ.И, к получение биологически активных веществ протеолитических ферментов И инсектицидного комплекса. Целью изобретения является одновременное получение, инсектицида и про- теолитических ферментов на одной питательной среде. Для одновременного .получения на одной питательной среде протеолитических ферментов и инсектицида используют штаммы бактерий Bacillus thuringiensis v. galleria 69-6 - промьшленный продуцент инсектицидного препарата-энтобактерина и Bacillus thuringiensis v. galleriae GFP-51 - продуцент протеолитических ферментов. Посевные вегетативные культуры используют для засева чфер- ментациойной среды, содержащей источники азота, углерода и стимуляторы роста. В ферментационную среду вносят вначале посевной материал штамма Вас. thuringiensis v. galleriae GFP-51. При выходе культуры на стадию экспоненциальной фазы роста вносят посевной материал штамма Вас. thuringiensis V. galliae 69-6 при Соотношении посевных доз 9:1. Культивирование проводят при , 220об/мин, в качапочных колбах. Длительность ферментации (до 95% высыпания спор). составляет 44-48 ч. По окончании ферментации биомассу отделяют, от культу- ральной жидкости центрифугированием. Из культуральной жидкости одним из промьгашенньп методов получают ферментный препарат. Биомасса используется в качестве биологического инсектицида, t табл. с (Л с 1чЭ ОЭ 0