СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЭТАЛОНА СЫЧУЖНОГОФЕРМЕНТАВСЕСОЮЗНАЯ Советский патент 1972 года по МПК C12N9/64 C12Q1/38 

Известен снособ нриготовлепия эталона сычужного фермента путем экстракции сычугов телят (ягнят) молочного возраста раствором поваренной соли, подкислеиия полученного экстракта соляной кислотой с носледующи.м высаливанием поваренной солью, высушиванием высола и измельчением.

Однако но такому способу невозможно приготовить достаточно точный эталон.

Цель изобретения - устранить указанный недостаток.

Для этого сухой высол дополнительно высушивают до постоянного веса, смешивают с обезвоженной вакуумной поваренной солью до получения активности в 1 г препарата 100000 усл. ед. Активность эталона проверяют путем сравпения его действия с действием 8 мг чистого пепсина на казеин забуфереппого до рН 5-5,4 молока.

Пример. Высушенные lia воздухе сычуги телят (ягнят) молочного возраста мелко режут н на каждый килограмм их приливают 20 л 10%-ного раствора поваренной соли при температуре 4-6°С.

Экстракцию ведут при периодическом перемешиваиии в течение суток. Затем экстракт сливают и доливают до нрежиего объема еще раз 10%-ный раствор поваренной соли па 1 сутки. Оба экстракта сливают вместе, подкисляют до рП 2 соляной кислотой ;и высалпвают фермент добавлением поваренной соли до 25%.

Вснлывший на новерхность сосуда высол собирают и подвергают лиофнльной сушке.

В этом сухом высоле онределяют актпвность химозпна по скоростн створаживания забуференного до рН 5-5,4 молока.

Затем сухой высол сычужного фер.мента досушивают при 60°С до постоянного веса п смешивают с предельно сухой вакуумной солью в смеснтеле до активности 100000 усл. ед. в 1 г. Затем смесь хорошо перемешивают в cMecirreле, просеивают через сито и с большой точностью определяют актпвность.

Этот эталон сычужного ПОрОН1Ка с ИЗВССТПО

сычужной активностью храпят в герметично закрытой таре.

Пз полученного сычужного порон1ка делают навески (с точностью до 1 мг) таким образом, чтобы каждая навеска содержала 100000 усл. ед. фермента, равных по активпостп па забуференном молоке 8 мг чистого непсппа. Каждая навеска помещается в стекляпную тару I герметично укупоривается.

Например, если активность 1 г сухого сычужного порошка равна 90000 усл. ед.. то навеска должна весить 1110 .i.s, так как в ней будет содержаться 100000 усл. ол. химозина.

Для использования такой иавески в качестве эталона сычужиого фермеита ее растворяют (количествеиио) в 100 мл 0,01 и. соляиой кислоты или 0,5 моль ацетатном буфере или в дистиллированной воде. В этом же растворителе растворяют испытуемый препарат сычужного норошка. Субстратом можег служить как забуференное 1молоко, так и натуральное молоко с кислотностью 19-21°Т.

Этот эталон может также служить эталоном при онределении активности нренаратов ненеина нри условии, что субстратом будет служить забуференное до рН 5,0-5,4 молоко.

Этот же эталон необходим для определения ненеина и сычужного фермента в смешанных нренаратах этих двух ферментов.

Предмет ii з о б р е т е н и я Сноеоб нриготовления эталона сычужного фермента путем экетракции сычугов телят (ягнят) молочного возраста раетвором новаренной соли, нодкисления полученного экстракта соляной кислотой с последующим высаливанием иоварепной солью, высушиванием высола и измельчеиием нолученпого препарата, отличающийся тем, что, с целью нриготовления более точного эталона, полученный препарат донолнительно выеушивают до ностоянного веса, смешивают с обезвоженной вакуумной поваренной солью до получения активности в 1 г препарата (эталона) 100000 усл. ед. и активность эталона нроверяют путем сравнения его действия с действием 8 мг чистого пепсина на казеин забуференного до рН 5,0- 5,4 молока.