СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПРОТЕИНАЗ Советский патент 1973 года по МПК C12N9/50 C12Q1/38 C11D3/386 G01N21/25 

I

Изобретение относится к способу определения активности протеиназ в составе синтетических моющих средств (CMC) и может применяться для контроля качества последних.

Известен способ определения активности протеиназ по степени гидролиза белкового субстрата, устанавливаемой колориметрически по интенсивности окрашивания образовавшегося в гидролизате тирозина с реактивом Фолина. Гидролиз белка проводят при рН 7,5-7,6 и температуре 30°С, а интенсивность окрашивания тирозина опре/деляют в интервале оптической плотности 0,2-0,8. Однако этот способ не может быть применен для определения активности протеиназ в CMC, поскольку он не учитывает специфического влияния компонентов моющих средств на свойства протеиназ.

Предлагаемый способ определения JIKTHBности протеиназ состоит в том, что гидролиз белкового субстрата проводят при рН 8,5 и температуре 40°С, а оптическую плотность измеряют в интервале 0,15-0,35, в котором влияние компонентов моющих средств на активность протеиназ не проявляется. Величину оптической плотности измеряют на фотоэлектроколориметре тина ФЭК-56, ФЭК-57 или ФЭК-60 с красным светофильтром (656- 677. ммк). Протеолитическую активность

в ед/г вычисляют по формуле: 4,7/ + 0.1.oQQ т

где/) - оптическая плотность раствора; т - количество протеиназы в 2 мл

реакционной среды, мг; 1000 - переводной коэффициент; 4,7 и 0,1-постоянные коэффициенты для бактериальных протеиназ, входящих в состав CMC. Пример 1. Определение активности алкалазы в составе CMC «Астра.

2,5 г CMC «Астра, содержащего в 1 вес. % алкалазы, растворяют в 100 мл лсесткой воды (10-15° немецкой жесткости) и готовят разведение 10 мл/100 мл. К 5 мл 1%-ного раствора казеина в 0,3 М трис-буфере (рН 8,5) добавляют 2,5 мл раствора разведенного фермента. Навеска алкалазы в пробе 1 мг.

Полученную смесь сразу же гидролизуют в ультратермостате (40°С, 60 мин), после гидролиза осаждают негидролизованный белок, добавляя 5 мл 0,3 М раствора трихлоруксусной кислоты, фильтруют, отбирают пробы по 2 мл, к которым добавляют по 5 мл 0,5 М раствора углекислого натрия и по 1 мл реагента Фолнна (1:3). Смесь выдерживают 30 мин Б термостате при 40°С, фотоколориметрируют с красным светофильтром (656-

677 ммк). Оптическая плотность 0,210, вычисленная по формуле активность алкалазы 108700 ед/г ферментного препарата. Активность этого же препарата, определенная для фермента без CMC, составляет 105628 ед/г.

Пример 2. Определение активности протосубтилина ГЗХ-1 в составе CMC .

2,5 г CMC «Астра, содержащего 2 вес. % препарата протосубтилин ЁЗХ-1, растворяют в 100 мл жесткой воды, готовят разведение 25 мл/100 мл и поступают, как в примере 1. Навеска фермента в пробе 2,5 мг, оптическая плотность 0,240, активность 24550 ед/г ферментного препарата. Активность этого же

препарата, определенная для фермента без CMC, составляет 24120 ед/г. Точность определения ±5%.

Предмет изобретения

Способ определения активности протеиназ в составе синтетических моющих средств, отличающийся тем, что гидролиз бе.1кового субстрата ироводят при рН 8,5 и температуре 40°С, а образовавщийся в гидролизате тирозин определяют колориметрически с реактивом Фолина, измеряя оптическую плотиость в интервале 0,15-0,35.