Способ получения пептона Советский патент 1991 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения пептона с помощью протеиназ микробного происхождения.

Цель изобретения - ускорение, удешевление процесса и повышение выхода целевого продукта.

Способ осуществляют следующим образом.

Для приготовления пептона жмых мышечной ткани после эксракции аденозинт- рифосфорной кислоты (АТФ) высушивают и измельчают до порошкообразного состояния, суспендируют в воде, доводя) рН до оптимального значения.

В качестве протеолитического фермента предлагается нейтральная протеиназа Bacllus subtllls (протосубтилин). Фермент характеризуется высокой скоростью гидролиза трудноперевариваемых белков (эластина и коллагена) рН-оптимум действия 7,0.

Для создания оптимальных значений рН в реакционной смеси используют 25%-нь | 1 раствор аммиака, что исключает в дальн.. процесс нейтрализации гидролиза и не оказывает влияния на содержание зопы о готовом препарате

Подбор фермент-субс гоэтных соотношений и условий гидролиза проводят следующим образом.

Для ускорения пронесся гидролиза проводят проверку влияния температурь, на бремя достижения требуемого состава гидролиза. Повышение температуры инкубационной смеси до РЮ°С не приводит к повышению скорости гидропизэ, а, наоборот, приводит к быстрой термоинактивации ферментов и некоторому замедлению процесса Поэтому оптимальной температурой гидролиза считают 37±3°С. Проведение

гидролиза при температуре ниже оптимальной нецелесообразно, т.е. приводит к значительному снижению скорости реакции.

Для определения оптимального фермент-субстратного соотношения проводят гидролиз суспензии измельченного жмыха в концентрации 2-20% при количестве фермента 10-40 ПЕ/100 г субстрата. Продолжительность гидролиза составляет во всех случаях 24 ч. Полученные данные представлены в табл. 1.

В табл. 2 представлены качественные характеристики целевого продукта.

Для получения пептона из жмыха мышечной ткани с помощью бактериальных протеиназ целесообразно использовать концентрацию фермента 20-40 ПЕ/100 г суспензии субстрата.

Наилучшее качество гидролизата достигается при концентрации субстрата 8- 12%. Именно эти концентрации и используют для определенного времени гидролиза жмыха бактериальными протеи- назами.

Определение аминного азота и свободных аминокислот гидролизатов показало, что после 12-16-часового гидролиза накопление аминного азота происходит преимущественно за счет свободных аминокислот, что ухудшает качество пептона, поэтому продолжительность гидролиза не должна превышать 8-10 ч.

Пример 1. Жмых мышечной ткани после извлечения АТФ высушивают и измельчают до порошкообразного состояния, 50 г сухого жмыха суспендируют в 450 мл воды, доводят рН раствора до 7,0 с помощью раствора аммиака, вносят нейтральную протеиназу В. subtllis в количестве 100 ед. (20 ПЕ на 100 мл 10%-ной суспензии) протеолитической активности. Гидролиз проводят 8 ч на качалке (150 об/мин) при 37°С, После окончания гидролиза фермент инактивируют прогреванием при 100°С в течение 30 мин. Смесь охлаждают, центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин, супернатат фильтруют через 5-6- слойный марлевый фильтр при 4-6°С для удаления жира. Фильтр диофилизируют, полученный препарат пептона фасуют в стеклянную посуду.

Пример 2. 50 жмыха мышечной ткани, подготовленного по примеру 1, суспендируют в 450 мл воды, рН 7.0 доводят раствором аммиака. Вносят нейтральную протеиназу В. subtllis в количестве 150 ед. протеолитической активности (30 ПЕ на 100 мл 10%-ной суспензии). Гидролиз проводят 10 ч на качалке при 37°С. Полученный гидролизат обрабатывают по 1.

Пример 3. 60 г измельченного жмыха суспендируют в 450 мл воды, доводят рН

раствора аммиаком, вносят нейтральную протеиназу В. subtllis в количестве 150 ед протеолитической активности (30 ПЕ на 100 мл 10% ной суспгнзии). Гидролиз пповодят на качалке в течение 8 ч при 37°С.

Гидролизат обрабатывают по примеру 1.

Пример 4. 8 кг измельченного жмыха суспендируют в 92 л воды, доводят рН раствором аммиака до 7,0. Вносят фермент в количестве 3000 ПЕ (20 ПЕ на 100 мл 18%ной суспензии). Гидролиз проводят в реакторе при 37°С и работающей мешалке в течение 8 ч. После окончания гидролиза фермент инактивируют прогреванием при 100°С в течение .получаса. Смесь охлаждают, сепарируют при 8000 об/мин и вмгуши вают на распылительной сушке. Препарат пептона фасуют в стеклянную посуду.

Пример 5. 26 кг измельченного жмыха суспендируют в 190 л воды, доводят

рЧ до 7,0 и вносят нейтральную протеиназу В. subtills в количестве 86400 ПЕ (40 ПЕ на 100 мл 12%-ной суспензии). Гидролиз проводят в торе при описанных условиях в течение 10 ч. Дальнейшую обработку гидропиэата проводят по примеру 4.

Пример 6. 8 кг сухого жмыха суспендируют в 60 л «оды доводят рН до 7,0 с помощью раствора аммиака и вносят 27200 ПЕ протеиназы В. subtills (40 ПЕ на

100 мл 12% ной суспензии). Гидролиз проводят в реакторе при описанных условиях в течение 8 ч Порошок пептона получают по схеме примера 4,

Предлагаемый способ позволяет использовать отходы производства с получением стандартного продукта.

Формула изобретения Способ получения пептона, предусматривающий ферментативный гидролиз исходного сырья - жмыха мышечной ткани после извлечения аданозинтрифосфорной кислоты, термическую инактивацию фермента, отделение непрогидролизованного остатка и распылительную сушку целевого

продукта, отличающийся тем, что, с целью ускорения, удешевления процесса и повышения выхода целевого продукта, исходное сырье предварительно измельчают, и ферментативный гидролиз проводят протосубтилином при рН 7-8 и соотношении фермент-субстрат 20-40 ПЕ/100 мл суспензии в течение 8-10 ч, причем доведение рН при гидролизе осуществляют 25%-ным раствором аммиака,

Таблица 1

Изобретение относится к микробиологической промышленности. 3 именно к способам получения пептоне с помощью лротеиназ микробного Г|рии,.хс:«ления. Цель изобретения - ускорение, удешевпе- ние процесса и повышение выхода полевого продукта. Способ получения пеп.пча пре- дусмчтривает ферменчативный гидролиз исходного сыр) - жмь... э чашечной ткани поел -- извлечения аденозинтрифосфорной кислпгы термическую инаюивэцию фер- ментэ, отделение нечрогидролизованного остатка и распы/штепьнуо пушку целевого продукта, прч 7GN к , чипе -ырье предварительно иэме/.ьчз vT Ј Ферментативный гидролиа псоьодчг пк ло уРти/.ином при рН 7-8 и OTHoiifHHH tJCi JOHTd к субстрату 20-40 ЛЬ/ЮО г . ч. причем ДОРОД НИР pr-i ..ji.rvi- -чэ ог,щес --в/1яют , ipr тм аммну чс 6л

Редактор И.Дербак

Техред М.Моргеитал

Заказ 2976ТиражПодписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Продолжение табл.1

Таблица

Корректор Э.Лончакова