СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЭКЗОТОКСИМНОГО КОМПЛЕКСА Советский патент 1973 года по МПК C12N3/00 A01N63/00 

1

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к сноеобам производства энтомопатогеиных пренаратов, в особенности к способам выделения токсинов.

Извеетиы способы выделения токсинов. Из них наиболее близким к предлагаемому как по количеству совпадающих признаков, так и достигаемому эффекту, является способ выделения и очистки экзотоксинного комплекса, опиеаниый Баржаком и Дедондером. Этот способ включает предварительную фильтрацию культуральной жидкости, носледующую многостуненчатую обработку уксуснокислой ртутью, затем сероводородом для разрупюния уксуснокислой ртути, соли которой удаляют центрифугированием на холоду (1°С), аэрацию надосадочпой жидкости с доведением ее рН до 6,0 и обработку активированным углем для сорбции экзотоксина. Посторонние вещества удаляют предварительной элюцией 0,01 М этилендиаминтетрауксусиой кислотой. Иосле этого элюируют термостабнльный экзотоксинный комплекс аммонийным сниртом. Иолучеиный элюат высушивают под вакуумом нри 40°С.

Однако такой способ не экономичен, поскольку предполагает обработку многих сотен и даже тысяч тонн жндкости для получения экзотоксипа, содержание которого в

2

ноГ( составляет всего 0,2 - 0,3% (но сухому весу).

Целью изобретения яв.-|яется разработка сноеоба, позволяюп,его спизнть затра гы на выделение экзотоксншюго комп.чекеа из культуральной жидкости.

Эта цель достигается тем, что после получения культуральной жидкости, содер каид, активные споры и кристаллы в результате вырагцивания Вас. insectus GUK и ферментере на жидкой ереде, пое.теднне уда.чяют нз культуральтю1 | жидкости любым известным способом, нанример сепарированнем. Из наДОСаДОЧНО жидкости, в KOTOpOii с НОМО1ЦЬЮ

соляной кислоты значение рИ устагювлено в пределах 3,3 - 3,6 иутем добавления в нее гексаметафосфата натрия .(РОз)б до конечной ко1М1,с1П|)ации 1 % выделяют осадок экзотоксина, KOToiihiii удаляют сепарированием. В зависимости от необходимости осадок либо растворяют в MeiHiHicM объеме растворителя, наиример воды, для получения концеитрата, либо выеуншвают ,iio6i)iM известным способом, поскольку ЭКЗОТОКСИПНЬП КОМп.текс термостаби.теп и выдерживает температуру до 120..

Применение описанного способа позволит сократить затраты на оборудование и на технологнческ1н нроцесс BbicyHiiniaiuui ириблнзительно в 200-300 раз: вместо обработки 1 т жидкости обрабатывают 34 кг осадка; отпадает нужда в больших количествах дорогостоящих реактивов; не требуется холодильная установка; длительность технологического процесса сокращается в пять-шесть раз.5 П р и м е р. Культуральную жидкость, содержащую экзотоксинный комплекс, получают путем выращивания Bacillus insectus GUK в заводском ферментере (полезный объем ю 700 л) на обычной среде, содержащей 0,7% технической глюкозы и 2% кукурузного экстракта (по сухому весу), при 28°С в течение 27,5 час прп аэрации 1 объем воздуха на 1 объем среды в 1 мин. Фугат, содержащий эк- is збтоксипный комплекс, отделяют от спор и кристаллов па сепараторе. С помощью 10%пой соляной кислоты рН фугата доводят до 3,3-3,6, после чего к нему добавляют гексамётафосфат натрия до конечной концентра- 20 ции 1%. Жидкость выдерживают при комнатной температуре в течение 1 час. Образовавпщйся осадок азотоксинного комплекса отделяют па сепараторе. Собранный осадок высущивают в вакуум-сушильном шкафу при 40°С 25 в течение 24 час. Выход экзотоксина по сухому весу (влажность 4%) 0,5%. Токсичность культуральной жидкости и выделеппого из нее экзотоксинпого комплекса 30 изучена в сравиительпых опытах иа комнатной мухе. Результаты представлены в таблице. Ка видно из таблицы, токсичность экзотоксипного комплекса полностью сохранилась 35 при выделении его указаиным способом. То же (контроль) LKr,i,- концентрация испытуемого раствора, вызывающая г)|бсль 50% личинок комнатной мухи. П р С д мет И 3 О б р е т е н и я 1.Способ выделеиия экзотоксинпого комплекса из ку.1ьтуральной жидкости Bacillus insectus GUK, включающий удалеиие из пес биомассы, снор и кристаллов, отлпчаюи ийся тем, что, с целью с ижения затрат иа выделение экзотоксинного комплекса, последнее осуществляют путем нодкислепия оставшейся культуральной жидкости, предпочтительно соляной кислотой, до рН 3,3-3,6 и последуюniero добавления гексаметафосфата натрия. 2.Способ но п. 1. отличающийся тем, что гексаметафосфат натрия добавляют до копечпой концснтрапии 1% (по сухому весу).