СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ Советский патент 1974 года по МПК C12N9/24 

1

Изобретение относится к области микробиологической промышленности и может быть использовано при производстве препаратов литических фе1р1ментс1В из культур ба1кте|р1ий группы сенной и картофельной палочек, например Bacillus subtilis 402, выращенных глубинным способом.

Известен способ получения литических ферментов -путем выращивания микроорганизмов например. Bacillus subtilis 402, на водной питательной среде, содержащей источники углерода, азота, стимуляторы роста и минеральные соли, с последующим выделением ферментов из культуральной жидкости.

С целью повышения активности литических ферментов и снижения себестоимости продукта по предлагаемому способу в качестве источников азота и углерода в среду вводят осахаренмый ячменный солод, в количестве 2,3-2,7% от общего объема среды.

Дробленый ячменный солод сусп©нди1руют в воде в концентрации около 5%, подогревают суспензию до 70+2°С, выдерживают при этой температуре и постоянном перемешивании в течение 1 час, а затам повышают темлературу суспензии до 80+2°С и продолжают процесс до перехода крахмала в неокрашиваемые йодом декстрины. При высокой активности амилазы в солоде процесс осахаривания может закончиться менее чем за 1 час при 70°С;

при этом выдерживать суспензию при 80°С не нужно. По окончании осахаривания раствор кипятят в течение 10-15 лин, затем стерилизуют 30-35 мин при 135+2°С. Отдельно приготавлнвают раствор солей, в который вносят сухие пивные дрожжи. Объем этого раствора определяют исходя из конечного объема среды, объема суспензии солода и количества конденсата, образующегося прп стерилизации.

Раствор солей (с пивными дрожжами) стерилизуют 30-35 мин при 135+2°С. Простерилизованные компоненты среды соединяют в ферментере, охлаждают до 40+1°С, устанавливают в среде рН 6,90+0,2 с помощью концентрированных растворов аммиака и ортофосфорной кислоты, а затем засевают ср-еду культурой бактерии из группы сенной и картофельной палочек, например Bacillus subtilis 402. Посевной материал выращивают при

374:1°С в течение 484;3 час на пшеничных отрубях, увлажненных 1,5 вес. ч. воды и простврилиэо1ва«ных в течение 50-60 мин ори давлении 1+0,1 ати. Для засева 1 м пптательной среды достаточно культуры, выращенной на 30+10 г пшеничных отрубей (по воздуппю-сухому весу). Ферментацию ведут в течение 12-16 час при 37+1°С, постоянном перемешивании и количестве продуваемого воздуха 0,5niO,05 объемов в 1 мин. Активноеть литических ферментов в фильтрате

культуры по окончании ферментации составляет 22000-29000 ед. ЛА1мл.

Пример. 20 г дробленого ячменного солода помещают в реактор, содержащий 400 л холодной водопроводной воды. Взвесь нагревают до 70°С П1р:И иостоянНОМ шеремешиванни. Процесс осах ар икания солода яри 70°С. длится 30 мин. Затем суспензию солода нагревают до кипения, кипятят в течение 10 мин, охлаждают и перекачивают с помощью насоса в ферментер емкостью 1500 лив нем простерилизовывают в течение 30 мин при 135°С. Во второй реактор, содержащий 260 л холодной водопроводной воды, вносят 3,2 кг/МП4/2НР04, 0,48 кг КС1, 0,08 кг MgSO4-7n2O, 0,088 кг СаСЬ и 0,4 кг сухих пивных дрожжей. Раствор перемешивают в течение 15 мин, а затем перекачивают в сателлит ферментера и простерилизовывают в течение 30 мин при 135°С, после чего стерильную жидкость передают под давлением в ферментер. Среду охлаждают до 40°С; рН среды составляет 6,9, объем - около 800 л. Среду засевают водной суспензией культуры Bacillus subtilis 402, выращенной в течение 48 час при 37°С на 20 г пшеничных отрубей.

увлажненных 30 лл водопроводной воды и простерилизованных в течение 1 час при давлении 1 ати. Ферментацию ведут в течение 13 час при 37+1°С, постоянном перемешиваНИИ в количестве продуваемого воздуха 23-26 . По окончании ферментации активность литического фермента составляет 25700 ед. ЛА/лл.

Предметизобретения

1. Способ получения литических ферментов путем выращивания микроорганизмов, например Bacillus subtilis 402, на водной питательной среде, содержащей источники углерода, азота, стимуляторы роста и минеральые соли, с последующим выделением ферментов из культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью повышения активности литичеоких ферментов и снижения себестоимости продукта, в качестве источников азота и углерода в среду вводят осахаренный ячменный солод.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что чменный солод вводят в среду в количестве 2,3-2,7% от общего объема среды.