Спооб культивирования микроорганизмов Советский патент 1976 года по МПК C12D13/10 C12B3/14 

(54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ДгИКРООРГАНИЗМОВ

В другой чан загружают 528 кг (NH4)2HPO4 и 352 кг 50%-лого кукурузного экстракта, доводят объем смеси до 15 м перемешивают до полного раствореиия соли и добавляют концентрированную фосфорную кислоту до рН 6,6-6,8. Эту группу компонентов также стерилизуют в УНС -при температуре 135 С.

Затем 3 ферментер через УНС подают водопроводную воду до объема 44 лг. Температуру среды доводят до 45° С, производят посев, включают мешалку и подают стерильный воздух. Тем1пературу среды в ферментере поCTeneiiHO снижают до 37° С. рН среды снижают до 6,3-6,4. В фермеитер вводят дополнительное питание в виде 50%-ного раствора ферментированного крахмала. На б и 30 часах роста 3 ферментер добавляют простерилизованную при температуре 135° С в течеаие 30 лтп 10%-ную эмульсию п.ропинола Б-400 порциями по 2,2 кг (0,005% к объему культур альной жидкости). Обш,ий расход пропинол.а Б-400 - 26,4 кг, обш,ая продолжительность процесса 45 час. Б конце ферментации а кт:;вность амилазы достигает 41 ед/лгл (метод Климовского-Родзевич).

При отсутствии пропипола Б-400 обш,ак продолжительность процесса составляет 50 чаооз, активность амилазы 36 ед/мл. Коэффлциент зашолнения ферментера 0,5.

Пример 2. Культивирование Bacillus nieseritericus-I, с целью получения шелочной протеиназы.

Выращивают в ферментере (его объем 63 при коэффициенте заполнения 0,7. Стерилизация питательной среды раздельная.

1-я группа компонентов.

В чан загружают 3,52 м 50%-ного раствора ферментированного крахмала с рН 2,5, 4,4 кг MgSO4, 4,4 кг СаСО., 66 кг КС1. 2,2кг ШО о-ного пропинола Б-400. Смесь перемешивают, доводят водопроводной водой до объема 15 м и стерилизуют в УНС прм те.мпе- атуре 135° С.

П-я группа компонентов.

В другой чан загружают 396 кг (NH4)2HP04 и 1760 кг кукурузного экстракта с содержанием сухих веществ в количестве 50%. Объем смеси доводят 1водо,прсзодкой зодой до объема 15 м, перемешивают и стерил.-Зуют в УНС при теМПературе 135° С. Простерилизованную в УНС при температуре 135° С водОПроводную воду добавляют в ферхентео до обш,его объема 44 м. Температуру .-ь 3 ферментере доводят до 50° С, произir-or.RT посев, включают мешалку и подают стерильный воздух. Температуру среды в ферме-тере .постепенно снижают до 40° С.. На 12, 25 I 40 часах роста культуры в ферментер лнссят стерилизОВанную при температуре 135° С в течение . 30 мин 25%-кую водную -мульсию пропинола Б-400 порциями по ,2 кг (по 0,005% к объему культуральной кндлости). Общий расход пропинола Б-400 8,8 кг, общая продолжительность процесса

48 чо;с. Активность ггротеиназьт 5700 ед/л1л (метод ФОЛП). При отсутствии пропинола Б-400 общая продолжительность процесса 55 час, акти;вность протеиназы 5000 ед;мл.

Коэффициент заполнения ферментера 0.5.

Пример 3. Культивирование Bacillus subtilis-Ф, с целью нолучения нейтральной протеиназы.

Выращивание проводят в ферментере (его

объем 63 м) при коэффициенте заполпения 0,7. Раздельная стеридизаци.я питательной среды.

1-я группа комлонентОВ.

В чан заливают 70,4 л/з 50%-ного раствора ферментированного крахмала с рН 2.5, 145,2 кг лактозы, 6,86 кг MgSO4, 145,2 кг K2SO4, ПО кг ZnSO4, 4,5 кг NaCl, 132 кг сухих пивных дрожжей, 44 кг MgS04 и 2,2 кг 10:07о-ного пропинола Б-400. Смесь перемеши1зают, ее объем доводят водопроводной водой до 20 м и стерил.изуют в УНС при температуре 135° С.

П-я группа компонентов.

В другой чан загружают 1320 кг кукурузHOiro экстракта и 264 кг (NH4)2HPO4. Объем смеси доводят до 15 м и стерилизуют в УНС при тем пературе 135 С. Водопроводную воду, простерилиЗОванную -в УНС при температуре 135° С добавляют в

тер до общего объема 44 м . Температуру среды в ферментере доводят до 45° С. Производят посев, включают мешалку и подают стерильный воздух. Температуру среды постепенно снижают до 37° С. На 8, 12, 24 и

36 часах роста культуры в ферментер из отдельной емкости доба|Вляют простерилизованную при 135° С :в течение 30 мин 30%-ную водную эмульсию пропинола Б-400 порциями по li кг (0,025% к объему культуральной

жидкости). Общий расход пропннола Б-400 46,2 кг, общая продолжительность процесса 47 час. Активность нейтральной протеиназы культуральной жидкости 120 едмл (метод Бабак|; ной). При отсутствии пропинола Б-400

общая продолжительность процесса 52 час, активность протеиназы 103 ед/мл. Коэффициент заполнения ферментера 0,5.

Формула К 3 о б р е т е н и я

1.Способ культивирования микроорганизмов, например продуценто-з ферментов, па питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли и полимерные соединения в качестве стимулятора роста, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени культивирования, повышения вывода продукта и улучшения фильтрации культуральной жидкости, из полимерНМУ соединений используют полиоксцпролиленгликолевый эфИр, причем его вводят в среду порционно.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что вводят в среду полиоксипропиленглярсолевый эфир перед культивированием

микроорганиз-мов в количестве 0,005-0,5% от объема культуральиой жидкости и в процессе культйзирозания - Б виде 10-30%-ной т одной эмульсии в количестве 0,01-0,1% ст объема культуральной жидкости.

3.Опосаб по пп. 1-3, отличающийся тем. что при культивирован; }; штамма Bacillus subtilis-103 полиокснаропиленгликолевый эфИр в/водят в виде 10%-мой водной эмульоии на 6 и 30 часах роста культуры.

4.Способ :по . 1 -3, о т л и ч а ю щ и и с я

тем, что при культивировании штамма Bacillus mesentericus-l полиоксипропиленгликолевый эфир вводят в вяде 25%-ной водной эмульсии на 12, 25 и 40 часах роста культуры.

5. Способ по П1П. 1 -3, отличающийся те:«1, что при культиЕкровании штамма Bacillus subtilis-O полиоксипропиленгликолевый эфар вводят в ср(еду в виде 30%-ной водкой

24 и 35 часах роста кульэмульсии на турьи