Способ определения мочевой кислоты Советский патент 1974 года по МПК A61B10/00 

1

Изобретение отноеится к технике анализа азотистых веществ в экскретах животных.

Известен способ определения мочевой кислоты в крови и моче млекопитающих, включающий осаждение мочевой кислоты и ее слой в горячем растворе уксусно-кислой ртути, центрифугирование смеси, промывку осадка уратов ртути путем ресуспендирования в растворе уксусно-кислой ртути, повторное центрифугирование, растворение осадка уратов ртути в растворе хлористого натрия в хлорной кислоте и собственно определение мочевой кислоты путем измерения оптической плотности полученного раствора.

Предложенный способ отличается тем, что, с целью определения мочевой кислоты в помете птиц, ее извлекают из помета литиевым щелочно-солевым реагентом, отделяют нерастворимые вещества помета путем центрифугирования перед осаждением мочевой кислоты и ее солей в горячем растворе уксусно-кислой ртути. Собственно определение мочевой кислоты производят путем определения азота мочевой кислоты по методу Кьельдаля.

Высокая плотность щелочно-солевого pea.ента (1,11 г/смз) не мешает отделению нера:творимых веществ помета путем центрифугирования перед осаждением мочевой кислоты и ее солей в горячем растворе уксусно-кислой ртути, однако она одновременно уменьшает возможность осаждения конгломератов мочевой .кислоты, суспендированных в недостаточной жидкости, т. е. отделение нсраствори.мых веществ центрифугированием производится в градиенте плотности литиевого щелочно-солевого реагента. Это позволяет нолностью извлечь мочевую кислоту из помета, сократить время и снизить температуру тепловой обработки при растворении мочевой кислоты в литиевом щелочно-солевом реагенте и, тем самым, уменьшить вероятность ее разрушения или образования из различных пуринов помета.

Метод обеспечивает высокий выход мочевой кислоты, добавленной к помету цыплят, даже при трехкратном превышении обычного ее содержания в помете птиц.

Для проведения анализа необходимы следующие реактивы: литиевый щелочно-солевой реагент - раствор 1,5н. сернокислого лития Б 1,5н. натриевой щелочи (60 г натриевой щелочи и 82,5 сернокислого лития растворяют в 1000 мл дистиллированной воды); 0,1 М раствор уксусно-кислой ртути (двухвалентной) в 5%-ной уксусной кислоте; 0,б1М раствор уксусно-кислой ртути в 1%-иой уксусной кислоте; концентрированная серная кислота.

В 10-мл стеклянные центрифулспые пробирки помещают по 3 г тщательпо перемешанного помета и добавляют 6 мл литиевого щелочко-солевого реагента. Пробирки выдерживаю ; Б течение 40 мин в водяной бане при . содержимое периодически иомешиваюг erei;лянной налочко. Затем пробирки охлаждают иод Crpyeii холодной воды и неитрифугируют 20 мни при 3000 об/мин (2000 g). Полученный надосадок прозрачный, слегка желтоватого цвета.

Использование литиевого щелочно-солевого реагента больн1ей концентрации приводит к недостаточному осаждению белков и других азотсодержащих сопутствующих веществ изза высокой плотности с.меси, а нрименение лнтиевого щелочно-солевого реагента меньшей концентрации ухудшает растворимость мочевой кислоты и ее солей.

В 10-мл стеклянные центрифужные пробирки с 8 мл 0,1 М. уксусно-кислой ртути в 5%-ной уксусной кислоте, находящиеся в слабо кинящей водяной бане, добавляют медленно но канлям 1 мл полученного надосадка и продолжают нагревать на кинящей водяной баие еще 10 мин, растирая стеклянной налочKoii вынавшие в осадок хлопья уратов ртути. Это позволяет перевести в раствор сопутствующие вещества. Затем пробирки охлаждают под струей холодной воды и центрифугируют 10 мин нри 1500 об/мин (1000 g). Надосадок осторожно декаптируют, пробирки ставят вверх дном на фильтровальную бу.магу. Полученный осадок дважды промывают раствором 0,01 М уксусно-кислой ртути в 1%-пой уксусной кислоте, каждый раз ресуспендируя его и растирая стеклянной палочко неред центрифугированием нри 1500 об/мин в течение 10 мин и удаляя надосадочную жидкость онисанным способом.

При большом количестве оборотов и времени центрифугирования частично могут осаждаться и сопутствующие вещества.

К промытому осадку уратов ртути добавляют I мл коицептрированной серной кислогы н осадок количественно переноеят в колбу Кьельдаля, для чего пробирки дважды промывают, каждый раз ливая в них по 1 .мл концентрировапной серной кислоты.

Использовать большее количество серной кислоты нежелательно вследствие возникающих неудобств при последующей нейтрализации ее в аннарате Кьельдаля.

Дальнейшие онерации но определению азота мочевой кислоты производят по методу полмикрокьельдаля, используя для отгонки ьоловину или весь минерализат. Расчеты азоla мочевой кислоты в помете производят общенринятым способом с учето.м взятой навески, внееенного консерванта нри сборе помета и других показателей.

Для вычисления содержания мочевой кислоты в помете количественные показатели азота умпожают па коэффициент 3.

Предмет изобретения

Способ определения ,мочевой кислоты, включающий ее осаждение в горячем растворе уксусно-кислой ртути, центрифугирование раетвора, ресуспендирование осадка в растворе уксусно-кислой ртути, новторное центрифугирование и собственно определение мочевой кислоты, например по методу полумикрокъельдаля, отличающийся тем, что, с целью определения мочевой кислоты в помете

птиц, ее извлекают из помета литиевым щелочно-солевым реагентом, имеющим плотность 1,10-1,12 г/смз, и отделяют нерастворимые вещества центрифугированием при ускорении не менее 2000 g, после чего проводят собственно определение мочевой киелоты.