СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ Советский патент 1974 года по МПК C07K14/585 

1

Изобретение относится к способу получения новых пептидов, аналогов тирео-кальцитанина человека, обладающих высокой биологической активностью.

Предлагается основанный на широко известном в химии пептидов методе окисления свободных или защищенных тр.итильной группой меркаптогрупп до дисульфидов способ получения пептидов общей формулы

Р

сн.,

h75teB789

- CH- СО- гли - йен-лей-СЕр тре-14ис-У --леи. -

10 11П 13 1if 15 1В 17 18 13

гли - тре - тцр-трк-глн-асп- д}ен асн-лиз-(рен 20 21гг 23 2 25 25 Z7 28 23

2ис - тре - срен - про-глн-тре - ала -Мв - дал -

ЪО 5J 52

2ли - ала-при- 1

где R и X имеют указанные выше значения, ло меньшей iepe одна .из аминокислот замещена в положениях 11, 12, 16, 17, 19, 20, 22 и 24 вышеуказайвымги аминокислотами и меркаптолруппы свободны или замещены тритильной грунПОЙ,

окисляют до дисульфидов.

Окисление можно проводить известным спобом с помощью ферроцианида в водном растворе или йодом, или воздухом в жидком аммиаке. Меркаптолруппы, защищенные тритильной группой, можно окислять йодом, например, в метаноле.

Целевые продукты выделяют в свободном виде или в виде кислотно-аддитивных солей, или комплексов известными приемами.

11

Пример. Н-цис-гл;И-аон-лей-сер-т,ре-цис-мет-лей-гли-тре-лей-тре-гл,н-асн-лей-асн - лиз-лей-гис-тре-фен-про-глн-тре-ала-иле-гли - вал-гли-ала-нро-МН2, З-кальцитонин М.

77 мг трифтор ацетат а Н-цис (ТРИ)-гли-асн-лей-сер-тре-цис (ТРИ) -мет-лей-гли-тре-лей-тре-гля-асн-лей-аон-лиз-лей-гис-тре-фен - нро-глн-тре-ала-иле-гли-вал-гли-ала-про-МНз растворяют в 20 мл 95%-ной уксусной кислоты и полученный раствор прикапывают в течение 1 час к интенсивно перемешиваемой смеси 100 мг йода и 120 мл 95%-ной уксусной кислоты. Затем смесь перемешивают еще 2 час при комнатной температуре, после чего прибавляют 200 мл воды и экстрагируют избыточный йод путем встряхивания с порциями но 100 .мл тетрахлорметана, пока о« «е станет бесцветным. Далее водный раствор подеергают Лиофильной сушке, остаток растворяют в 5%-ной уксусной кислоте и фильтруют через колонну с ионооб.менником Мерк № 11 (|Слабоооновной, форма ацетата). Злюат подвергают лиофильной сушке и получают а.цетат -кальцитонина М, который в случае необходимости можно освободить от незначительного количества загрязнений путем противоточного распределения в системе н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода (4: 1 :5об.ч.).

Исходный продукт можно получить следующ.им способом.

183 мг БОК-Цис (ТРИ)-гли-асн-лей-сер(тБу)-тре(тБу)-цис(ТРИ)-мет-лей-гли-ОН, 22 мг Ы-оксисукцинИМида и 377 .мг защищенного докозапептидамида Н-тре (тБу)-лей-тре (тБу)-глн-асп (ОтБу)-лей-аон-лиз (БОК)-лей-гис-тре (тБу)-фен-нро-глн-тре (тБу)-ала-иле-гли-вал-гли-ала-про-ЫНг и 10 мл деметилформамида перемешивают в течение 30 мин при 50°С, реакционную смесь охлаждают до 40°С и прибавляют к ней 45 мг дициклогексилкарбодиимида. Затем смесь перемешивают 18 час при 40°С, охлаждают до 0°С и выливают в 200 мл простого эфира, свободного от перекиси. Осадок фильтруют, высушивают и растворяют в смеси диметилформа.мид-.метанол (1:1). Раствор фильтруют через колонну (высота 100 см, диаметр 4 см) с Сефадексом LH-20, приготовленным з той же смеси. Фракпаи объемом 5 мл улавливают, упаривают досуха при остаточном давлении 11 мм рт. ст. и затем при 0,01 мм рт. ст. и температуре бани 45°С и проверяют чистоту полученных фракций с помощью тонкослойной хромато.графии на силикагелевых пласт1инах. Получают БОК-цис (ТРИ) -гли-асн-лей-сер (тБу) -тре (тБу) -цис-(ТРИ)-мет-лей-гли - тре(тБу) - лей - тре (тБу)-глн-асп(ОтБу) - лей - асн-лиз(ВОК) -лей-гис-тре(тБу)-фвн-про-глн-тре(тБу) - ала-иле-гли-вал-гли-ала-про-МН2.

135 мг полученного .про.дукта растворяют в 5 мл трифторуксусной КИСЛОТЫ, раствор выдерживают 1,5 час при ком.натной температуре, затем добавляют к нему 30 мл трифенилкарбинола и выдерживают 10 м.ин, после чего упаривают на ротационном испарителе досуха при температуре бани 30°С и остаток растирают с простым эфиро.м, не содержащим перекиси. ПолуЧенный порошок фильтруют, тщательно промывают простым эфиром и высущивают в вакууме над едким натром. Получают 87 мг три фтор а.цетата Н-цис (ТРИ)-глИ-асн-лей-сер-тре-цис (ТРИ)-мет-лей - гли-тре-лей-тре-глн-аоп-лей-аон-лиз-лей-гис - тре-фен-про-глн-тре-ала-иле-гли-вал-гли-ала-про -NH2, который для дальнейшей переработки Д01статочн10 чист.

Аналогично получают: тиp 2-кaльцитoпин М; лиз, арг -кальцитонин М; гис, лeй, глн -кальцитонин М; вал, тир2 -кальцитонин М; вал, -кальцитонин М; дезамипо-лей2 -кальцитонин М; дезамино-тир -кальцитоаин М; деза.мино-вал -лей .кальцитонин М;