Способ получения пептидов или их кислотно-аддитивных солей Советский патент 1977 года по МПК C07K14/585 

левого продукта известным способом в виде оснований или их кислотно-аддитивных солей. В качестве защитных групп применяют из вестные при синтезе пептидов с длинными цепями защитные группы, которые можно легко отщеплять, например, путем гидролиза, восстановления, аминолиза или гидрогенолиза Во всех примерах, кроме специально ого воренных случаев, для тонкослойной хроматографии используют пластины из силикагеля Sli 254 (фирмы Aniec fiirsieEden ). Для тонкослойной хроматографии применяют системы трет амиловый спирр-изопропанол-вода, 51:21:28 (№ 1)} втор-€утанол-3%. -ный водный аммиак, 70:30 ( 2); н бутанол-ледяная уксусная кисло тен-вода,. 75: :7,5:21 (№ З); н-ёутанол-ледяная уксусная кислота-вода, 67:10:23 (№ 4)i этилацегаг -пиридин-вода, 4О:2О:40 (№ 5); этилаце тат -ацето№-вода, 72:24:4 {№ 6); втор-бутаноп- ледяная уксусная кислота-вода, 67: :1О:23 (№ 7); этилацетар-пиридин-ледяная уксусная кислота-вода, 62:21:6:11 (№ 8); ы-6утанопг-пиридин-4тедяная уксусная кислота-вода, 42:24:4:30 (№ 9); ледяная yKcyo ная кислота-метидэтилкеток-муравьиная кио лога-вода, 50:ЗО;10:10 (№ 10); этилацетат пиридшь вода, 49:24:27 (№ 11); н-бутаноп-пиридин-муравьиная кислота-вода, 44:24:2::2О, (МЬ 12); изопропанол-25%-ны водный аммиак-вода, 7О:10:2О, (№ 13); изопропанол-25%-ный водный аммиак-вода 85:5:10 {№ 14){ хлорофор1 -метанол, 9:1 (fc 15); хлорофорк -метанод, 8:2 (№16); хлороформ-метанол, 7:3 (№ 17). (Сокращения, принятые в примерах : БОК - тре -бутилоксикарбонил 2S - карбобензокси ОтБу - сложный трег-бушловый эфир Онп - «южный п-нитрофениловый эфир Оме - сложный метиловый эфир Осу - сложный оксисукцинимидовый эфир тБу - простой трет-бутиловый эфир Бмп - ji -меркаптопропионил ДМФА - диметилформамид. Пример 1, Н-Цис-Гл -Асн-Лей-Сер-Тре-Цио-Ме р-Л ей-Гли-Тре-Тир-Тре-Глн-Асп-Фен-Ас -Л из-Фен-Гио-Трёг-Ф еи-П ро-Глр-Тре-Асн-Тре-Гли-Бал-Гли-Ала-Про-КН, гидрохлорид. (Асн -Тре- -кальцитонин М). 5Q Бок-11ис-Гли-Асн-Лей Сер-( гБу-Тре-( тБу)-Циб-Ме1 Лей-Гли-Тре (тБу )-Тир( тБу)-Тре( тБу)-Пш-Асп( ОтБу)-Фен-Асн-Лиз(Бок)-Фен-Гио-Тре(тБу)-Фен-Про-Глн-Тре( тБу)-Асн-Тре( тБу)-Гли-Бал-Гли-Ала-Про-NHj растворяют при в 1,2 мл 12 н. соляной; кислоты высокой чистоты (в течение 1-2 мин), продувают в течение короткого времени азотом, вьщерживают 10 мин при О С, охлаждают сухим льдом, концентрируют в высоком вакууме, постепенно повышая температуру, до сиропообразного cocTOEHHHj раствфяют в 2 мл воды, лиофилизируют, добавляют к остатку 2 мл воды, еще раз лиофилизируют и получают аморфный водорастворимый порошок, ,45; Bj 0,53; В. 0,39 (тонкослойная хроматография на целлюлозе фирмы Dbh-mstadt ) Тонкослойный электрофорез (пластины из целлюлозы, рН 1,9, 16 в/см, 1,5 час)пройденное расстояние 3,7 см по направлению к катоду. Защищенный дотриаконтапептидамвд получают, например, следующим образом, а) Z -Тре (тБу)-Гли-Оме 22,3г Z -Тре(тБу)-Осу и 8,29г НСЙ H-JлиUDмe растворяют или суспендируют в 10О мл ДМФА, прибавляют 7i49 мл N -метилморфолива, перемещивают в течение дня при 22 С, упаривают досуха в вакууме, растворяют остаток в ацетоуксусном эфире, промывают последсжательно 5%-410й лимонной кислотой, 5%-ным бикарбсянатом калия и во дои, сушат над сульфатом натрия, упаривают досуха, маслянистый остатсж вьшерживают в течение ночи при О С и получают хроматографически однородный дипептид, т.пл. 48°М, который используют без дополинтель ной очистки О,77; R . О,7О. б)Н-Тре(тБу)-Гли-Оме. НС 5,0 г 21-Тре(тБу)-4ли-Оме растворяют в 2ОО мл метанола и после прибавления 13,2 мл 1 н. ссшяной кислоты и 0,5 г 10%-ного палладия на угле гидрируют при поглощении углекислого газа до насыщения. Катализатор отфильтровьтают, фильти рат упаривают досуха и получают белую пену, R 0,64; R| 0,41; Rj 0,42. в)2,-Асн-Тре(тБу)-Гли-Оме. 18,9 г Z -Асн-Онп и 12,5 г Н-Тре(тБу)-Гли-Оме HCi растворяют в 95 мл ДМФА, прибавляют 4,6 мл N -метилморфолина, выдерживают 15 час при комнатной темпера- туре. растворитель удаляют в высоком вакууме, остаток растирают .в сложном уксусном эфире, фильтруют, кристаллизуют из смеси метаноп-хпороформ:- петррлейный эфир и этанол - вода. Т. пл. 165 С, Т. 0,68; Rf, 0,38; Rfj 0,70. г)Н-Асн-Тре(тБу)-Гли-Оме 8,5 г 2,-Ас№.Тре(тБу)-Гли-Оме гидрируют в 210 мл метанола в присутствии 10%-ного палладия на угле и получают 60°С; аморфную пену, т.пл. д) Z, -Тре(тБу)-Асн-Тре(тБу)-Гли-Оме Раствор 7,51 г Z -Тре(тБу)-Осу и 5,55 г Н-Асн-Тре(тБу)-Гли-Оме в 5О мл .А выдерхи1впют в гсчолио ночи npjr -- С, угтривпюг в Bf.rcoKOM вакууме досу хп, рае.-творяют остаток в сложный уксусный эфир - н-бутанол (.1:.), промывлют Г) лимонлой кислотой, бпка 1бонатом калия и водой, упаривают до суха и кристшитизуют твердый остаток из смеси мйтанач- диэтиловый эфир, т.пл. 145-146«С; Rf 0,73. Rf 0,75. е) М-Тро( тГ)у )-Асл-Тре( тВу )-1лн-Оме 2,О г г -Тре(тБу)-Асн-Тро()-ГлнОмо гидрируют известным способом в 2О мл ,етаи(зла до насыщения и пааучают аморфный (пенистый) продукт, R, O,41j Rf 0,34. ж) Z -Гл11-Тре(тБу)-Лсл-Тре(тБу)-Гли-ОмеРаствор 5,33 г 11-Тре{тБу)-Асн-Тре(тБу)-.Гли-Оме и 4,95 г % -ГлинОшвЗОмл ДМФА выдерживают в течение ночи при , прибавляют 5 СО мл воды, фильтрую при 0°С, сушат, взмучивают остаток в см си ацетон - ацетонитрил (1:1) и отделяют кристаллический продукт, т.пл. 22О С; R, 0,65; Rj 0,35; R. О,58. 3) 2. -Глн-Тре (тБу ) (гБу)-Гли-ОН6,42 г полученного выше сложного метилового эфира пентапентида растворяют при нагревании в 58 мл трифторэтанола, при комнатной температурю прибав.пяют 25 мл 1 и, едкого натр)а, перемешивают 6 час при 22°С, добавляют 25 мл 1 н. соляной кислоты, KoiinenTрируют до 50 мл, фильтруют и промывают водой до полного удаления хлора R. 0,46 и) Z -Глн-Тре(тБу)-Асн-Трс(тБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про- N Н 2 50О мг Z, -Глн-Тре(гБу)-Асн-Тре(тБу -Гли-ОН, 335 мг Н-Вал-Гли-Ала-Про-НН И.1О5 мг N -оксисукцинимида растворяют при нагревании в.4 мл ДМФА; добавляют 2О2 мг дициклогексилкарбодиимида, перемешивают 4 час при 40-С, разбавляют 10О мл диэтилового эфира и 10О мл петролейного э4|ира, отфильтровывают студень, раст воряют его в смеси метанол - вода (85:15) осаждают диэтиловым эфиром и растворени и осаждение повторяют еще paSj т.пл. 198199°С; RJ, 0,41; R| О,5О; ,35. и) И-Глн-Тре( тБу)-Асн-Тре( тБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про- NH-j 3,1 г синтезированногоZ-производного гидрируют Б 120 мл 80 о-ного трифторэтанола в присутствии 31О мг 10%-ноге палладия на угле до 1 ас лщения. Фильтрат копцент зируют до 5 мл, прибавляют 40 мл воды, выдо)Ж11ваюг в точепие ночи при ОС и отфлпьтроЕЫЕШс.г пог.ппенпщ, т. пл. 2A(fc (разя); Ff O,20; Rj 0,32; R 0,18.. , K) Z - Т ре (тБу ) ро-Гл№-Тре {тБу )-ACH-TIK (тБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про- NHj 517мг Z-Тре(тБу)-Фен-Про-ОН, 410 мг полученного нонапептвда и 74 мг N -оксисукц1пп1мида растворяют или суспендируют при слабом нагревание в 4 мл смеси трифторэтанол-хлороформ (6:4), при 22 С прибавляют 177 мг дициклогексилкарбод имида, перемешивают 20 час, упаривают досуха, переосаждают остаток из смеси хлороформ-петролейный эфир и распределяют остаток по Крайгу в системе метаиол-буфер- хлороформ-тетрахлормеган (10:3:5: :4) (во всех примерах, кроме специально оговоренных, буфер состоит из 28,6 мл педяной уксусной кислоты, 19,25 г ацетата амд1он Ш и 960 мл воды) с объемом фаз по 5 мл через 420 ступеней. Чистый додекапептид получают в виде аморфного порошка, т.пл, 195 С (разл.), путем упаривания фракций 1 135-184 (f макс К 0,61) досуха и удаления ацетата аммония сублимацией в высоком вакууме при 45°С. Rf 0,44; Р 0,51; Rj 6,38. л) Н-Тре-(тБу)-Фен-Про-Глн- ре(тБу)-Асн-Тре( тБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про- NH 504 мг синтезированного 7. -додекапептида растворяют при нагревании в ЗО мл , прибавляют 1ОО мг палладия на угле, шдри1зуют известным образом, отделяют катализатор, упаривают фильтрат досуха и получают аморфный белый порошок, Rj 0,25; Rf О,35;Rf 0,20. м) 7, -Асп-Лиз(Бок)-Фен-Гио-Тре (тБу)- ен-Про-Глн-Тре- (тБу )-Асн-Тре( тБу )-Гли-Вал-Гли-А.а-Про- NH2 К раствору 479 мг X-Асн-Лиэ (Бок)-Фен-Гис-ММ NH в 4,5 мл ДМФА при -20 С прибавляют 378 мл 3,2 н. раствора хлористого водорода в диоксане и 9О мл трет бутил штрита, перемешивают 15 мин при -1О С, прибавляют 41О мг Н-Тре (тБу)-Фе1 -Про-Глн-Тре( тБу)-Асн-Тре( тБу)Гли-Вал-Гли-Ала-Про- NH 2 , растворенного в 6 мл ДМФА, и 26О мл этилдиизопропиламина, выдерживают в течение ночи при , реакционную массу прибавляют по каплям к 1ОО мл диэтилового эфира, распределяют осадок по Крайгу в системе метанол- буфер- хлорофорг - гетрахлорметан (10:5:1О;5) через 2ОО ступеней с обьемом фаз по 3 мл, фракции № 18-37 (гллАкс27; К 0,16) упаривают досуха, удаляют буфер сублимацией в высоком вакууме при 40 С и получают амор4 ный uopoiuoK гексадекапептида, R. О,4О; R 0,20; R, 0,58 t 1if н) Н-Асн 1из{Бок)-Фен-Гио-Тре{ гБу)-Фен-Про-Гта-Тре (тБу)-Асн-Тре (тБу)-Гли-. -Вал-Гпи-Алэ-Про- NHj. аде та г ., ;:. 270 мг вьшюукаэанного Z -гексадекапептида гидрирую в 27 мп 8О%-ной уксуснсЛ киспоий в присутствии 50 lг палладия наугле Б уеченае 2 ч&с, огфштьгровывают кагализауэр, концентрирутот фильтрат до мл н лиофадгааируют. ,,, СЧО Rj R|j,,, о) Z -Тре (тБу)-Тир (гБу.) - Тре (rfey),Асг1(ОтБу)--ФеН Асн--Лиз (Бок) -Фен1 Гио-.Тре (тБу)Фен-Про-Гл&-Тре (тБу )-Асн-Тре{гБу)--Глк Вал Гпи -Дла«}1ро- ЦП. К-раствору 165 мг (тБу)-Тир{тБу) Тре(тБу)-Гпи-Асп(ОтБу)-Ф8Н- НЫН,в 2 мл ДМФА при 2О°С прибаэляют 117 мпЗ,24н раствора хлорис1ого водорода в диоксане и 21 мл трет -бутклньггритае- перемешивазот 15 МИН прй.-10°С, прйбавлялот охлагкденкый до ОС р ггвор 108 мг .сн-Лиа(Бок):1)е14-. Гио-Тре (тБу )Феи.-.ПрО Гл1-:- Тра (гБу)-Асн;Тре(тБу)-Гпи--Вал Гли--Ала--Про--.МН2. (ацетат) в-4 MvT; и 80 мкл этилдиизопропилаь/жна выдержт ают в течение кочк при О С, пол -чеш&тй раствор приливают по каплям к смеси 40 мл диэтилового и 20 мл петролейного эфира, распределяют осадок по в снстеме метанол- буфер -хлороформ- теграхлормета (20 : 5 : itf: 1о) через ЗОО ступеней с фаз по З.мл фракшй5 № 8 8-117 (г-,,. .не 10 J Я 0,5 5) упаривают досуха, буфзр удаляют сублимациой при 4О Си высоком вакууме и получав яроматографически чистый аморфный порошок доЕозапептида, %,. 0,395 % 0,, 0,4 nlf ( тБу)-Тир( тБу)Тре™( тБу)ГпиАсп(ОгБу)-Фен-.(Бок)Фен-Гио-.Тре i (тБу)4)ен Про-Гл1-1-Тре(тБу)-Асн-Тре (тБу) Гли-Вап-Гли-Ала«Про ННа 26Oiv5r Z -докоэапоптйда гидрируют в течете 15 час в 26 мл уксусной кислоты в присутствии 5 о мг палладия на угле, катализатор отфнльтровывают, фильтрат концентрируют мл и пиофилизируют. Для удаления уксусной 1шслоты остаток два раза переосаждают кз смеси метанолраствор бикарбоната натрия, R 0,31; R| 0,29. р) БокгЦио- Гл,и -Асн Лей-Сер(тБу)-Тре (тБу)Цио-Мет-Лей™Гли-Тре( тБу)-Тир( тБу) -Тре( тБу ) (ОтБу )-Фен-Асн-Лиз (Бо -Фен-Гис-.Тре( тБу)--Фен«Про-Глн-Тре{ тБу)-Асн-Тре (тБу)-Гли Вал-ГлИ Ала-Про- Т Н г 17О мг полученного гидрированного доко- запептидаи 101 мг Бок Цио-Гли-А,сн-Лей-Сер{ тБу)-Тре (гБу)Цио-Мет-Лей-Гли ОН растворяют при нагревании в 1(2. мл ДМФА прибавляют 15t8 мг N -оксисукцинимида и 21,3 мг днциклогексилкарбодиимида, перемешивают 3,5 час Б хчзке азота при , приливают реакционную смесь по кашшм к 20 мл диэтклоБого эфира, свободного or гл-f рекисей, рас11|л;деляют продукт по Крайгу Б системе метанол- буфер-хлороформ - тет рахлорметан (11:3:5:6) через 45Q ступеней с объемом фаз по 3 мл, фракции № 190- 21О (fМАКС200J К О,а), упаривают досуха, удаляют буфер сублимацией и получают аморфный порошок, R, O,53j R 0,35} R 0,29. П р и м е р 2. Бмп-Гли Асй-Ле1ЬСер-Тре-.Цио.Мет-Лей-Гли-Тре-.Тир-Тре-Глц-Асп-Фен-Асн-Лиз-Фен-Гио-Тре-Фен-Про-Глн-Тре-Асн-Тре-Гли-Вал-Гли-Ала-ПроNH, гидрохлорид (дезамино-Асн -Тре -кальци тонин М) 50 мгБмп-Гли-Асн-Лей-Сер(тБу)Тре тБу)-Цио-Мер-Лей-Гли--Тре(тБу)Тир{тБу)- , Тре (тБу)-Глн-Асп (ОтБу )-Фен-Асн-Лиз (Бок)1 Фен-Гис-Тре( тБу)-Фен-Про-Глн-Тре( тБу)«Асн-Тре (тБу )-Гди-Бал-Гли-Ала-Про N Н 2 переводят путем ацидолиза| при в при- сутствии 12 н, соляной кислоты в пептид, как в примере 1, iR: О,SO; R Oj59;.R, 0,43 (пластины из деллюлюзы фирмы АЛеМк I)armsiacJ i ), Тонкослойный электрофорез (рН 1,9, 16 в/см. 1,5 чао) пройденное расстояние 2,4 см по направлению к катоду. Защищенный догриаконтапептидамид получают следующетл сб- разом 61 мг Бмп-Гли-Асн-Лей Сер{Тбу)-Тре( тБу)-ЦЙс-Мег Лей-Гли-ОН 113 мп Н-Тре (тБу)-Тир{ тБу )-Тре{ тБу )-Глн-Асп (ОтБу)-Фен-Асн-Лиз (Бок)-Фен Гио-Тре (тБу)-Фен-Про-Глн-Тре( тБу)-Асн--Тре( тБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про- Н 5, {пример 1, пункт п) и 10,5 мг -оксисукцинимида растворяют в 0,9 мл ДМФА, прибавляют 14 мг дидиклогексилкарбодиймида, продувают азотом, перемешивают смесь 3 акры вают сосуд и 3,5 час при 45°С. К реакционной смеси добавляют 15 мл диэтилового эфира, свободного от перекисей, распределяют продукт по Крайгу в системе метанол- буфе{. хлороформ- тетрахлорметан {11:3:6:7) через 240 ступеней с объемом фаз по 3 мл, упаривают в вакууме фршсдии №.108-129 (ллАкс 118; К 0,97), удаляют буфер сублймадией и получают аморфный порошок, R, 0,29ГР.г0.в57к«д 0.38. 3. Бмп-Гли-Асн-Л ей Сер м-Тре-Ци(В ёй Гли-Л из-Лей-Тре-Глн-А ен-Асн-Л из-Ф ен Гис-Тре-Тир-П ро-Глн-Тре-Асн-Тро-Гли-Вал-Гли-Апа-Пр- NHi , гидрохлорид Хдезамино-Бал -Лиз -Л е й -Тир -Асн -Тре -кальцитонин МД.« 50 мг Бмп-Гли-Асн Лей-Сер(тБу)-Тре (тБу)--Цио-Вал-Ле -Гли-Лиз (Бок) (тБу )-Глн-Асп (ОгБу )-Фен-Асн-Лиз (Бок )-Фен-Гио-Тре( гБу)-Тир( тБу)-Про-Глн-Тре (гБу)-Асн-Тре( гБy)-Гли-Baл-Гли-Aлa-Пpo- N Нд переводят в целевой пептид путем ацидо лиза, как в примере 2. 0,51; Я.{ 0,45 (пластины из целлюлозы фирмы DoipTns «df). Тонкослойный электрофорез (рН 1,9, 16 в/см, 1,5 час) - пройденное расстояние 3,7 см по направлению к катоду. Защищенный дотриаконталептидамид можн получиТ1(-,например, следующим образом. а) % -Лей-Тре(тБу)-Тлн-Асп(ОтБу) -Оме ;4Д5 г Н-Тре(тБу)-Глн-Асп(ОгБу)-Фе№ Юмб растворяют в 40 мл ДМФА, прйбав ляют 3,26 г Z -Лей-Онп и решсшюнную смесь оставл51ют на ночь при 22 С. Полученный пентапептид высаживают водой и кристаллизуют из смеси метаноя-хлороформ на петролейного эфира и из смеси метанол1 -вода, т. пл. 204°С, F.. 0,39; R 0,52. б)Н-Лей-Тре(тБу)(ОтБу) -Юме 4,8 г7нпентапептида гидрируют известь ным образом в 100 мл метанола до насышення, отделяют катализатор, упаривают фильтрат досуха и получают аморфную бе;,лую пену, F 0,14; Rj О,29. в)Z -Лиз(Бок)(тБу)-Глн-Асп {ОгБу)-Фен-Оме 4 г (гБу)(ОтБу)-Фен-Оме и 3,5 г 2 -Лиз(Бок)-Онп раствсфяют в 25 мл ДМФА оставляют на ночь при 22 С. Полученный гексапептид выса жнвают диэтилсюым эфиром в виде студня, который кристаллизуют из смеси метанолсложный уксуснь1й петролейный эфир, т. пл, 211-212 С; R 0,50; R, 0,55 г)( Бок)-Лей-Тре (тБу )-Глн-Асп (О1Бу)-Фен-ННГ Н;, 5 г вышеуказанного сложного метилового эфира растворяют при нагревании в 5 мл ДМФА, прибавляют 5 мл гидразингидрата и выдерживают в течение 5 час при 22 С. Продукт осаждают добавлением 250 мл воды. Мелкокристаллический осадок отфильтровывают и промывают водой до отрицательной реакции Фопина, т.пл, -«2200 (paзл.);iR, 0,24; R 0,27. Д) Z -Тре(тБу)-Тнр(тБу)-Про-Глн-Трв (тБу) -Асн-Тре {тБу) -Гли-Вал-Гли-Ала-ПроtNH. 393 мг 2-.Тре(тБу)-Тир(тБу)-Про-ОН и 66 мкл N -метилфорфолина растворяют в 5 мл тетрагчдрофурана, охлаждают до -2 О С в течение 1 Мин прибавляют 82 мл; изобутилхлоркарбоната, перемещивают 10 мин при -15 С, прибавляют охлажденный до О С раствор 300 мг Н-.Глн-Тре(тБу)-: -Асн-Тре(тБу) Гли-Вал ли-Ала-Про М Hg в 6 мл смеси трифторэтанол- хлороформ {6;4), перемешивают 1 час при О С,.выдерживают в течение ночи при 22 С, концентрируют образующуюся студенистую массу, переосаждают из смеси тетрахлорметан-петролейный эфир, распределяют по Крайгу в системе метано/j- буфер хлороформ- тетрахлорметан (10:3:5:4) через 4ОО ступеней с объемом фаз по 3 мл, фракции № 118-143 (,e |130; К 0,48) концентрируют, буфер удалит сублимацией в высоком вакууме при 40 С и получают яроматографически чистый аморфный порошок додекапептида, R 0,42; .f 0,37; Rfy О,65. е) Н-Тре{тБу)-Тир{тБу)-Про-Глн-Тре (тБу)-Асн-Тре (тБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про |1,56 г полученного додекапептида растворяют при нагревании в 80 мл метанола и гидрируют известным образом. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха и получают аморфный продукт, тцш Rf 0,30; Rf О,21; Rj 0,56, ж) 2 -Асн-Лиз(Бок)-Фен-Гис-Тре(тБу.)« -Тир(гБу)-Про-Глн-Тре(тБу) -Асн-Тре(тБуЬ -Глн-Вал-Гли-Ала-Про- NHj 445 мг Z, -Асн-Лиз (Бок )-Фен- Гис-ЫН N Нарас1Боряют при нагревании в 4 мл ДМФА, охлаждают и при -2 О С прибавляют последовательно 35О мл 3,2 н. раствора хлористого водорода в диоксане и 83 мл трет бутилнитрита, перемешивают 15 мин при -10 С, прибавляют раствор 400 мг гидрированного додекапептида (пункт е) в 5 мл этигшиизопропиламина, перемешивают 21час при О С, прибавляют 48 мл этилдиизо- пропйламина и выдерживают в течение ночв :при О С. Реакционную смесь йрикапьтают к 10О мл диэтилового эфира, распределяют по Крайгу в системе метанол-буфер-хлрроформр -тетрахлорметан (1О:3:7:4) через 650 ступеней с объемом фаз по 3 мл, фракции № 230-275 ( 255; К О,65) обрабатывают известным образом и получают чио1тый гексадекапептид в виде аморфного по;рошка R О,37; R, О,27; R О,63. а) Н-Асн-Лиз(Бок)ен-Гис-| Трб(тБу)-., -Тир( тБу )-Про-Глн-Тре (тБу)-Асн-Тре1 тБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про-НН , ацетат 250 мг гексадекапептида (пункт ж) гидрируют ; известным образом в 30 мл 80%-ной уксусной кислоты, катализатор отфильтровывают, фильтрат концентрируют до 4 мл и лиофилизируют.К 0,24; Rr 0,14; R, 0,34.-. и) Z -Лиз(Бок)-Лей-Тре(тБу)-Глн-Асп. (ОтБу)-Фен Асн-Лиз( Бок)-Фен-Гис-Тре( тБу) -Тир( тБу )-Про-Глн-Тре (тБу) -Асн-Т ю (тБу) - пи-Вал-Гли-Ала-Про- N Н j 274 мг 2 -Лиэ(Бок)-Лей-Тре(тБу)-.Глн -Acn(OTBy)-4 eH-NHNHa растворяют при нагревании в 2 т ДМФА, охлаждают и при 20С прибавляют последсявательно 154 мл 3.2 н. раствора хлористого водорода в диок Сане и 37 мл третмбутилнитрита, перемеши вают 15 мин при -10°С, прибавляют раст вор 275 мг ацетата гексадекапептида (пункт з) в 2 мл ДМФА, охлажденный до .и 85 мкл этилдиизопропиламина и перевешивают 2 час при 0°С.Загем добавляют 21мл этилдиизопропиламина, выдерживают 15 час при О°С, добавляют смесь диэтиловый эфир-петролейный эфир (7:3) отделяют осадо распределяют его по Крайгу в системе метанол- буфер- хлороформ - тетрахлорметан (10:3:5:5) через 345 ступеней с объемом фаз по 3 мл и из фракций № 98-132 (, 115; К 0,5) выделяют известным образом хроматографически чистый докоаапептид, 0,39; Т О,29; 0,48 и) (Бок)-Лей-Тре(тБу).чГлн-Асп (ОтБу)-4)ен-Асн-Лиа (Бок)-Фен-4 ис-Тре (тБу )-Тир( тБу) -Про-Глн-Тре (тБу) -Асн-Тре ( тБу) Гли-.Вал-Гли-Ал а-Про- М Н 173 мг докозапептида (пункт к) гидрируют в 30 мл ЗО о-ной уксусной кислоты в присутствии 50 мг палладия на угле в течение 15 час, катализатор отфильтровывают, ильтрат концентрируют до-3-4 мл и лиофилиаируют. Для удаления уксусной кислоты лиофилизат переосаждают из смеси трифторэтанол - 5 о-ный раствор бикарбонат натрия, % 0,21; Rf 0,63;Rfg 0,17. к Бмп-Гли-Асн ЬЪй-Сер (тБу)-Тре (Бу)Йис-Вал-Лей-Гли-Лиз(Бок)-Лей-Тре(.Бу)-Глн-Асп (ОтБу) -Фен-Асн-Лиз (Бок) -Фен-Гио -Тре (тБу) -Тир (тБу) -Про-Гли-Тре (тБу) -Асн Тре (тБу) -Гли-Вал-Гли-Апа-Про- N Н., 127 мг докозапептида (пункт и), 65 м Бмп-Гли-Асн-Лей-Сер (тБу) -Тре (тБу) -Цис-Вал-Лей-Гли-ОН, 12 мг N -оксисукциними да и 17,5 мг дициклогексилкарбодиимида растворяют или суспендируют в 0,5 мл ДМФА, перемешивают 3,5 час при 45°С, прибавляют 50 мл диэтилового эфира, распределяют осадок по Крайгу в системе ме- танол-буфер - хлороформ- теграхлорметан (1О:3:5:4) через 25О ступеней с объемом фаз по 3 мл и из фракции № 88-11о (t,a jlOO; К 0,67) известным образом выделяют хроматографически однородный про- в виде амор.ного порошка, R О,28 Rf 0,65; Rf 0,27 р и мор 4. Бмп-Гли-Асн-Лей-Сер-Тре-Цис-Мет-Лей-Гли-Лиз-Лей-Тре-Гли-А-/1е й-Асн-Л из-Лей-Глс-Тре-Тир-Пр о-Глн-Тре-Лс11-Тре -Гли-Вал-Глн-Ала-Г ро- N1 гид1:юхлорид (дезпмиио-Лиз -Лей -Тнр. - М:);1ьцигонин .Асн -Тре 50 мг Бм1 4ли Асн-Лей Сер( тБу) СтЩГУл1йс-А- е е й-Гли-Л и 3 (Бок)-/1 ей-Т ре (тБу )лн-Асл (ОтБу) -Лей-Асн-Лиз (Бок) -Лей-Гис-Тре (тБу) -Т ир (тБу) -Про-Глн-Тре (тБу)-Асн-Тре(тБу)-Гли-Вал-4ли-Ала-Про -Ш г, обрабатывают 12 н. соляной кислотой при О С и, как в примере 1, получают свободный пептид:, 0,47; Rf 0,50; Pj О,42 (пластины из целлюлозы фирмы ЛЛег-Л Dahinatadt): Тонкослойный электрофорез (рН 1,9, 16 в/ см, 1,5 час) - пройденное расстояние 3,7 см по направлению к катоду. Защищенный дотриаконтапептидамид можно получить, например, следующим образом. а)Н-Лей-Тре(тБу)-Глн-Асп(ОтБу)-Лей-Оме3,6 г Z -Лей-Тре(тБу)-Глн-Асп(ОтБу)-Лей-Оме гидрируют в 90 мл метанола в присутствии 360 мг палладия на угле при поглощении углекислого газа до насыщения; катализатор отфильтровывают, фильт рат концентрируют досуха и выделяют продукт, 0, 0,32. б)Z -Лиз(Бок)-Лей-Тре(тБу)-Глн-Асп (ОтБу)-Лей-Оме 840 мг Н-Лей-Тре(тБу)-Глн-Асп(ОтБу)-Лей-Оме растворяют в 5 мл ДМФА прибавляют 765 мг Z -Лиз(Бок)-О1ш, выдерживают в течение ночи при 22-С, концентрируют в высоком вакууме до сиропо- образного состояния, прибавляют ЗО мл диэтилового эфира и переосаждают полученный студень из смеси метанол- сложный уксусный эфир- петролейный эфир, т.пл. 218-2200C;R.5 0,41; Rf , 0,61. в)2-Лиз(Бок)-Лей-Тре(тБу)-Глн-Асп (ОтБу)-Лей-.КНМНа 720 мг метилового эфира гексапептида (пункт б) растворяют в 40 мл абсолютного метанола, прибавляют 3,6 мл гидразингидрата, выдерживают 5 час при 22 С, приливают 75 мл воды, отфильтровывают осадок, хорошо прюмываюг его водой и сушат, г.пл. 215-218°С; R 0,55;р О,29; г) t -Асн-Лиз(Бок)(тБу)-Тир( тБу)-Г1ро-Глн-Тре( гБу)-Асн-Тро( гБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про- N Н2 636 мг Z -Acн-Лиз(Бoк)-Л-й-Гиc-NИNH2 растворяют при нагревании в 10 мл ДМФА, охлаждают до -20°С и прибавляют последовательно 525мкл 3,2 н. раствора хлористого водорода в диоксоие и 119 мл трет-бутилнитрита, перемешивают 15 мин при -15°С, вводят охлажденный до 0 раствор 60О мг Н-Тре(тБу)-Тир(тБу)-ПроГлн-Тре (тБу )-Асн-Тре (тБу )Г ш-Baл-.Г; и-Aлa-Пpo- HJ в 4,5 мл и 230 мкЛ

N -метилм01 |)о;иша, пе эемешивают 2 час при О°С, прибав.пяют 46 мл N -метилморфолина и выдерживают в течение ночи при О С. Продукт-сырец осаждак г 100 мл диэтилового эфира, распределяют по Крайгу в системе ацетонитрилi-буфер- хлороформ - метанол (1:1:1:1) через 500 ступеней с объемом фаз по 3 мл, из фаз № 38-62 ( К О,11) путем концентрирования и удаления буфера сублимацией в высоком вакууме при 4О°С получают аморфный порошок гексадекапептида, f 0,38 R 0,28 О,51.

д)Н-Асн-Лиз(Бок)-Лей-Гис-Тре(тБу)-Тир(тБу)-Про-Глн-Тре{тБу)-Асн-Тре(тБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про-.ЫН,, ацетат

J380 мг гексадекапептида (пункт г) гидрируют в 45 мл 8О%-ной уксусной кислоты над 50 мг палладия на угле до исчезновения исходного продукта (контроль тонкослойной хроматографией), катализатор отфильтр(даьтают, фильтрат концентрируют до 4 мл и лиофилизир)т . R{ 0,29; fl 0,40;

е)Z -Лиз(Бок)-Лей-Тре(тБу)-Глн-Асп

(ОтБу) -Л ей-Асн-Лиз (Б ок) -Лей-Гис-Тре

(тБу)-Тир( тБу)-Про-Глн-Тре( тБу)-Асн-Тре (тБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про- NH.

230 мг Z -Лиз(Бас)-Лей-Тре(тБу)-Глн-Асп(ОтБу)-Лей-ШЦН растворяют в 2 мл ДМФА, охлаждают до -20 С и при -20 , прибавляют последовательно (134 мкл 2,3н раствора хлористого водорода в диоксане и 32 мкл трет-бутилнитрита, перемешивают 15 мин при -10 С, прибавляют раствф 306 мг ацетата гексапептида (пункт д)

в 3 мл ДМФА и 63 мкл N -метилморфолина, перемешивают 2 час при 0°С, добавляют 15 мкл N-метилморфолина и выдерживаю;р в течение ночи при 0°С. Продукт-сырец осаждают 6О мл диэтилового эфира и.ЗО мл петролейного эфира, распределяют по Крайгу в системе метанол- буфер- хлороформтетрахлорметан (10:3:5:5) через 240 ступеней и из фракций № 83-.107 ((«аке К 0,65) выделяют известным образом

аморфный порошок чистого докозапептида, Rf 0, 0,59; Б, О,41.

ж) Н-Лиз(Бок)-Лей-Тре( тБу)-Глн-Асп (ОтБу)-Лей-Асн-Лиз(Бок)-Лей-Гис-Тре (гБу) -Тир (тБу) -Про-Глн-Тре (тБу) -Асн-Тре (тБу) -Гли -В ал-Гли-Ала-Про- NH

100 мг докозапептида (пункт е) гидрируют в 16 мл 80%-ной уксусной кислоты в присутствии 15 мг палладия на угле в тече1ше ночи, катализатор отфильтровывают фильтрат концентрируют мл и .шофилизируют. Для удаления уксусной кислоты лиофилизаг растворяют в 0,6 мл грифторэтанола, добавляют раствор по каплям к 5 мл 5%-кого раствора бикарбоната нат-

рия и папучают продукт, Т. 0,18; 4 0,50; Ji 0,20.,

з) Бмп-Гли-Асн-Лей-Сер( тБу)-Трв( тБу)-Л1ис-Мет-Лей-Гли-Лиз( Бок)-Лей-Т еСтБу)-Глн-Асп(ОтБу)-Лей-Асн-Лиз(Бок)-Лей-Гйс-Тре( тБу)-Тир( тБу)-Пpo-Гли-Tpe(тБy)-Acн-T ре (т Бу) -Гли-Вал-Гли-Ала-Про- fj Нд.

43 мг Бмп-Гли-Асн-Лей-Сер( тБуУ-Тре (тБу) -цЗс-М ет 1ей-Гли-ОН, 80 мг гидрированного докозапептида (пункт ж), 7,5 мл N -оксисукцинимида и 1О мг дициклогексилкарбодиимида растворяют в 0,6 мл ДМФА, перемешивают 3,5 час в токе азота при 45°С, добавляют 15 мд диэтиловогс эфира и распределяют по Крайгу в системе метанол-буфер- хлорюформ- тетрахлорметан (И:3:6:7) через 200 ступеней с объемом фаз по 3 мл. Чистое вещество выделяют известным образом из фракций № 9О-115 ( К 1,О) в виде аморфного порошка, Rf

0,27; 0,66; Rf 0.31..

И р им е р 5. Н-Цйс-Гли-Асн-Лей-Сер-Тре-Цис-Мет-Лей-Гли-Лиэ-Лей-Тре-Гли-Асп-Лей-Асн-Лиз-Лей-Гис-Тре-Тир-Пр-Глн-Тре-Асн-Т ре-Гли-В ал-Гли-Ала-Про- . ,NHg, гидротлорид ( -Асн -Тре Нкальцитонин М). .

50 мг Бок-Цис-Гли-Асн-Лей-Сер( тБу)-.Тре( тБу)-Цио-Ме г-Лей-Гли-Лиз(Бек)ЬЛей-Тре( тБу) -Глн-Асп( ОтБу) -Лей-Асн-Лиз(Бск)-Лей-Гис-Тре(тБу)-Тир(гБу)-Прск-Глн-Тре( тБу)-Асн-Тре( тБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про- NH,j обрабатывают 12 н. соляной кислотой при О С, как в примере 1, и получают свободный пептид, К О,43; ,0.43;Kf .,0,38.

Тонкослойный электрофорез (рН 1,9, 16 в/ 1,5 час) - пройденное расстояние 4,9 см по направлению к катоду. Зашшценный дотриаконтапептидамид можрно получить, например. | следующим образом 110 мг Бок-Цис-Гли-Асн-Лей-СерСтБу) -Тре( тБу)-Цио-;Лег-Лей-Гли-ОН, 185 мг Н-Лиз(Бок)-Лей-Тре(тБу)-Глн-Асп(ОтБу)Л ей-Асн-Л из (Б ок) -Лей-Гис-Тре (тБу) -Тир

(тБу) -Про-Глн-Тре (тБу) -Асн-Тре (тБу) -Гли-Вал-Гли-Ала-Про-КНа и 17,2 MrN-оксисукцинимида растворяют при нагревании в 1,5 мл ДМФА, прибавляют 23 мг дициклогексилкарбодкимида, перемешивают 3,5 час в токе азота при 45 С, добавляют 30 мл диэтилового эфира, свободного от перекисей, распределяют по .Крайгу через 35О ступеней в cHCxeN e метанол- буфер- хлороформ- тетрахлорметан (11:3:6:7) и из фраций № 140-179 ( 0«) путем упаривания д-эсуха и удаления буфера сублимацией в высоком вакууме при 45 С 1«ддел5пот продукт, Яр 0,28; l, 11 0,29. . ..... и р и м в р 6, Н-Оис-Гли-Асн-Лей-Сер -.Трв-Инс-Мвт Твй-Гли-Тре-Тир-Тре-Глн Аоп«Фвн-Аов 1из.4 ен- 1О-Тре-4 ен-Пр1 «Гл -Тре-Ала-Тре-Гла-Вал-Гли-Ала Про-«HHjt (Тре кальцитонин М). . 2О2 мг Ббк-ЦиЬ- ли-.ЛсимЛей ер( тБуГ31)(тБу)-41(Мв1и1ей-Пю-Трв(тБу)-Тир/ (Бу)Лрв(тБу)-Ллн-Асп(ОтБу)-Фен-АснWlH3( Б(ж)--Фен-Гво Тре (тБу )« 1 ев Про-Глн- ,.Трв(тБу -Ала-.Трв( тБу)ли-Вап-Г ю-.Ала-. Про.)Н рвотворяют в 6 мл 90%-«ой три фгцрухоусной кяслоты, прсщувают рествор ( выдерживают 90 мин при 23 С, вьишвают в 5О мл ледянсяо аяэтшюваго эфщра, свободного от перекисей, отфильтро. выва1йт , промьювют его двэтиловым эфпфШ, сушат в при 40 С и получают 185 мг Тре J-валБцитонина i М в виов трвфторацвтата, который переводят в ацетат, пропуская через (колонку слабооснов вого ионообменника в форме j ацетата (Мерк N 11), н лнофнлнзируют. Выход ацетата 158 мг« 8О мг аиетата расоворяют в 5 мл воды, при перемешивании прибавляют 1,2 мл сяабоосноенси о ионообмещоша в форме ев о бооного ос8оваш1Я (Мерк № 11), наблю дая ори pHV6,5 выпадение мелкого осадка, перемешивают 2 час, наблюдая повышение рН до 7,1, осадок и ионообмешшк отфильт)р реывают, промывают водой, отделяют пептид от Жжообменшша прибавлением теплой 9О%-Ной уксусной кислоты, отфильтровываю ионообменвик, промьюают его до поонительнр 90%-ной уксусной кислотой н укоусиоккслыё I растворы лиофилиаирутот, По/|учают 74 мг Тре -кальцитошша М в ви да уксуснокислой соли, RI для полученного продукта и кальцвтошша М 0,49 и О,55 на алокснпласти- ках (45 г окиси алюминия фирмы Caniag Muttena и 3,5 гипса, толщина 0,3мм в 0,52 и 6,57 на пластинах из целлюлозы фирмы Mere Barrnstadi / соответствен но, V,.;-;: ;. ... ; .. , Тонкослойный электрофорез (пластинь из целлюлозы, рН 1,9, 2 час, 28О в) ПрЫ1денное расстояние 4,5 см от катода (д21Я кальоитошгаа М пройденное расстояние 4,5 см ).J При анализе аминокислоты после полного гидролиза (6 н. соляная кислота, , 24 час) продукт содержит вычисленное количество аминокислоты. Исходный материал может быть получен следующим образом. а) 2 -Ала-Тре(тБу)-Гли-Оме Смесь 18,9 г Z -Ала-Онп, 13,4 г Н-Тре(тБу)-.Гли-Оме НСе, 1ОО мл ДМФА И 6,2 мл Ы -метилморфолина перемешивают 17 час при комнатной температуре, удаляют растворит€: 1ь в высоком вакууме, расгвордаог остаток в ацетоуксусном эфире, промывают раствор, сушаг, как в примере 1 (пункт а), упаривают и кристаллизуют остаток из смеси диутилсязый эфир - петролейный эфир, т. пл. 104-106 С, Выход 16 г. б)Н-чАла-Тре(тБу)-Гли-Оме 13,3 г полученного продукта гидрируют в метаноле в присутствии 1,5 г 10%-ного; палладия на угле и получают 9,4 бесцветной смолы. в)Z-Тре(тБу)-Ала-Тре(тБу) 9,4 г полученной смолы и 13,2 г 12 -Тре(тБу)-Осу растворяют в 10О мл ДМФА, выдерживают 17 час при ной температуре, выливают в 500 мл ледяной воды, фильтруют, оушат осадок и кристаллизуют из смеси ацетон - пет ролейный эфир с добавкой небольшого ко личества воды, т.пл. 194-195°С; выход 13,6 г. г)Н-Тре (тБу) -Ала-Тре (тБу) -Гли-Юме 13,1 г синтезированного продукта гидрируют в 750 мл метанола в присутствии 2,6 г палладия на угле и получают 9,95г -бесцветного масла. д)г-Глн-Тре(тБу)-Ала-Тре(тБу)-Гли-ОмеАналогично примеру 1 (пункт ж) получают производное пентапептида, которое кристаллизуют из метанола, т.пл. 198- 2О2°С; выход 10,7 г. ; е)Н-Глн-Тре(тБу)-Ала-Тре(тБу).4ли-Оме10 г полученного продукта (пункт д) гидрируют в 1 л метанола в присутствии 2 г палладия на угле и получают 8,2 г соединения,, которое непосредственно используют дальше. ж)Z --Тре (тБу) -Фен-Про-Глн-Тре (тБу) Ала-Тре (тБу )-Гли-Оме К 8,2 г полученного соединения (пункт е) прибавляют 8,3 г Z -Тре(тБу)-Фен-Про. ОН, добавляют 1ОО мл ДМФА, 4,0 г N -оксисукцинимида и 4,2 г дициклогекоилкарбодиимида, перемешивают 17 час при комнатной температуре, отфильтровьтают дициклогексилмочевину, вьтивают фильтрат в 1,3 л ледяной воды, через 2 час отфильт. рсжывают осадок, сушат его и смешивают с 120 мл ацетоуксусного эфира. Нерастворив« шяйся порошок отфильтровьшают, промьшают ацегоуксусным эфиром, сушат к получают 8,5 г продукта, Ri 0,78; R, 0,85; 0,71. э) 2 -Тре(тБу)-Фен-Про-Глн-Тре(тБу).Ала-Тре( тБу)-Гли-ОН 175 5,15 г полученного п юдукта (пункт ж) растворяют при нагревании в 110 мп 9О%ного метанола, охлаждакп до 23°С и прибавляют 13,5 мл 1,0 н, едкого натра. Через 1О мин приливают 45 мл воды, а еще через 5 мин - 25 мл воды. Спустя 20 мин раствор выливают в 270 мл лешшой 0,О5 н, соляной кислоты, отфильтровывают осадок, промьшают его ледяной (Водой и смесь вода - ацетонитрил (4:1), сушат и попучают 4,1 г продукта, Щ 0,27; ; 0,33} RS 0,28. и) Н-Тре (тБу) -Фен-Про Глн-Тре (тБу) (тБу)-Гли-ОН 3,65 г полученного продукта (пункт з) суспендируют в 125 мл ДМ ФА, гидрируют в присутствии 0,5 г 1О%-ного палладия на угле растирают продукт (2,62 г) с водой, фильтруют и сушат. Р ОД2;Т | О,23. йХ 2,|-Асн-Лиз(Бок)™Фен-Гис-Тре(тБу) -Фен-Про-Гли-Тре (тБу) -. (тБу) -Гли. ОН 7,2 rZ -Асн-Лиз(Бок)-Фен-.Гис-НН Ш растворяют при нагревании до 80°С в 30 мл ДМФА, охлаждают до -30°С и прибавляют 7,74 мл 3,7 н. раствора хлористого водорода S диоксане, при -ЗО-С добавляют 1,42 МП трет-бутилнитрита, выдерживают 10 мин при 10°С, охлаждают до и прибавляют по каплям, раствор 6,45 г Н««Тре (тБу) Фен-Про-Глн-Тре (тБу ) (тБу)Гли-ОН и 7,8 мл N -этилдиизопро пиламнна в 70 мл ДМФА,Смесьвыдер живают 18 час при О С, выливают в 40Ом ледяной 1%-ной уксусной кислоты, отфильт Гровывают осадок, промывают его водой,, су- шат в над хлоридом кальция, обрабатьтшот ацетонитрилом, фильтруют и су- шат, Т, 0,33; Pj О,21. к) Н-Асн-Лиз(Бок) -Фен-Гис-Тре(тБу) -Фен-Про-Тре (тБу) Апа-Тре (тБу) -ГлЕ« Бал« -Гли Ала-Про-Г Н J, К смеси 7,5 г 2 -Асн--Лиз(Бок) -Гис-Тре(тБу)-Фен-Про-Глн-Тре(тБу)(тБу)-Гли-ОН, 0,99 г N i-оксисукцинимида, 1,84 г Н-Вал-Гли-. N 70 ып ДМФА прибавлякТ 1,11 г дкциклогек- силкарбоди1- мида и перемешивают 5 час при ,45 С, вливают в 1,2 л ледяного диэтилового эфира, отфильтровывают осадок, , шат, смешивают с 200 мл смеси ацетс - Еитрил метанол (9:1), отфильтровывают, ncsTOpsEOT операцию, собирают | осадок, сушат и получарэт 8,5 г соединения. Т, 0,29; Т, 0,46; -R 0,50; iR. 0,80. л) Н-Асн-Лио(Бок)-Фен-Гнс-Тре(тБу)-Фен-Про Глн-Тре(тБу)Лла-Тре(тБу)-Гли- Вел-Гли-А,ла--Про- N H jauexaT 918 7,05 г полученного соединения гидрируют в 40О мл 80%-ной уксусной кислоты в присутствии 1 г 1О%-ного палладия на угле и получают 6,6 г продукта, ipj 0.35f-Rf -fif (0,27. Ml 2 -.Тре(тБу)ир(тБу)-Тре(тБу) лн-Асп( ОтБу)-Фен-Асн-Лиз( Бок)-Фен-ГисТре (тБу )-Ф8н-Г1ро-Глн-Тре( тБу) -Ала-Тре тБу)- Гли-Вал-Гли-Ала-Про-.МН| 565 (тБу)-Тир(тБу)-Тре(тБу) Гдн-Асп(ОтБу;-Фен-.ЧН -ЦН растворяют при «агреваиии до 80 С в 4 мл ДМФА ох- лаждают до -20°С, к охлаждаемому раствору прибавляют О,35 мл 3,7 н. |раствора хлористого водорода в диоксане и 0,067 мл| трет -бутилнитрита, перемешивают 10 мин при 15°С, прибавляют по каплям охлагкденный до О С раствор 600 мг Н- -Асн-Лиа(Бок)-Фен-Гио Тре(тБу)-Фен-Про-Глн-Тре (тБу)-Ала-Тре (тБу )-Гли-Бал-Гли Апа-Про- Н-i (ацетат) в 5 мл ДМФА и 0,33 мл N - этилднизопропиламина, перемешивают 5 мин при -15 С. нагревают. до 23С и перемешившот еще 6 час. Реакционнузо смесь вливают в 1ОО мл лвдяной воды, отфильтровьтают осадок, промывают его водой, сушат в вакууме над хлори.аом кальция, переосаждшот из смеси метанол-вода, сушат, растирают с ацетоном и получают 650 мг продукта R 0,33t Rf. Os60. н) (тБу)-Тир(тБу)--Тре(тБу)-Глн-Асп(ОтБу)Фен- А :н-«Лиз(Бок)Фен-Гис-Трв (тБу) -Фен-Про-Глн-Тре (тБу) - Ала-Тре( тБу) -Глй-Вал-Глк-Ала-Про-Ы Нг. 610 Ktr полученкот о гфодукта (пункт м гидрируют в 2 5 МП 8О%-ной j уксусной кислоты, в присуйзтвии палладия на угле, воряют прощтст в 50 мл насыщенного водой н-«бутанола, промывают раствор два раза разбавлехшым раствором бикарбоната натрия, два раза полунасьпденным раствором хлорида натрия и водой, бутанопьную фазу отделяют, ynapimatoT и паяучают 6О5 мг , сбободного |от уксусной кислоты, в виде бесшаетной neabij :, 0,20; 0,40. .„ ,, ,.,:,,. .. /о) (тБу)-Тре (тБу) -Циа-Мет-Лей-Гли-Тре (тБу )-Тир( тБу) Тре ( тБу) (ОтБу) -Фен-Асн-Лиз(Б ок)- Фен-Гис Тре( тБу) Фен-Про-Глн-Тре( тБy)Aлa-.Tpe( тБу)-Гли Бал-Гли-.,, , К смеси 605 мг Н-Тре(тБу)-Тир(тБу) (тБу) Глн-Асп( бтБу)-Фен-Асн-Лиз(Бок)-фон-Гне-Тре (тБу )-Фен-П-ро Глн-Тре( тБу)-Ала-Тре (тБу )Гля-Вал-Гл11-Ала-Про- Н t 290 tvir декапептп,ца Бок-Цис-Гли Асн- Vleft-Cep (тБу) Тре (тБу)-Цис-Л ет-Лей-Гли-i. Н, 46 мг Х-оксибензотриазола и 10 мл ДМФА прибавлшот 75 мг дидиклогексилкар. бодпимияп, перемешивают 9О мин при lO С и 18 час при 23 С, Оп|)пльт|)овывают осадо вливают фильтрат в 100 мл ледшюго диэШ лового эфира, свободного от перекисей, отфильтровывают осадок, промывают его диэ- тилсюым эфиром и сушат. Продукт-сырец два раза переосаждают из смеси диэтиловый эфир-ДМФА и дважды из воды и ДМФА проводят прот1шоточное распределение через ЗОО ступеней в системе из 3,66 л метанола, 1 л буфера, 2 л хлороформа и 2,32 л Гвтрахлорметана (буфер содержит 29 мл ледяной уксусной кислоты и 19 г адетать аммония в 1 л воды). Чистое вещество находится в фракциях N9 123-137 (К О,76), Р| 0,32; R f4 0,41. .. е . Н-ЦиЬ-Гли-Асп-Лей-Сер Прим -Тре-Пио-Ме т-Л ей-Гли-Тре-Л е JbTpe-Гли-Асп-Феп-Асл-Лиз-Фои-Гис-Тре-Фен-Про-Глн-Тре-Ала-Трс-Гли-Вал-Гли-Ала-Про-N Н2, ацетат (Лей -Тро -кальцитонинМ) 490 мг Бок-Цис-Гли-Асн-Л ей-Сер(гБу) -Тре-( тБу)-Цис-Ме1 Лей-Гли-Тре( тБy)-Лeй -Tpe(тБy)-Глн-Acп(OтБy)-Фeн-AcнЛиз(Бo -Фeн-Гиc-Tpe( тБу)-Фен-Про-Глн-Тре( тБу).-Ала-Тре (тБу) -Гли-Вап-4 ли-Ала-Про-КН , вводят в 12 мл ледяной трифторук сусной кислоты, продувают азотом и нагревают до комнатной температуры. Смесь выдерживают 90 мин при комнатной текшературе, охлаждают до О С, вл1шают в 150мл ледяного диэтилового эфира, свободнся о от перекисей, выдерживают 2 час при О С, отфильтрсявывают осадок, промьтают его диэталовым эфиром, сушат, растворяют в 15 мл 5%-ной уксусной кислоты и фильт1,,ют через колонку со слабоосновным ионообменником в форме ацетата (Мерк № 11) для удаления трифторуксусной кислоты. Ко. лонку промывают 3 х 10 мл 5%-ной уксусной кислоты, элюаты объединяют, лиофилизирутот и получают 432 мг Лей -Тре -кальцитонин М (ацетат) в виде бесцверного легкого порошка, Rf 0,50 (пластины из целлюлозы), 0,45 (алокс-пл стины). Тонкослойный электрофорез (пластины из целлюлозы, рН 1,9, 2 час, 280 в) - пройденное расстояние 4,5 см от катода, Исходный материал может быть получен следующим образом. а) Z. Т.ре(тБу)-Лой-Тре(тБу)-Гпн-Асп (ОтБу)-Фен- NH NH 12,7г Н ей-Тре(тБ (OтFjy) э растворяют в 10О мл ДМ1А, п;1ибавляют 9,0 г Z -Тре (тБу)-Осу, выдерживают 17 час при 25°С добавляют волу, отделяют осадок, сушат, к)исталли;чу от из ац(- тоуксуслого эфира и получают 14,2 г продукта,который пореосаждают из смеси мсугаиол- волл, т, пл. 197-199 С. Дан перевода в пшразпд 13,9 г полученного Z -Тре(тБу)-.Пей-.Гре (тБу)-Глн-Асп(ОтБу)-Фен-С)ь1е раствор5Еют в 700 мл метанола, прибавляют 70 мл гидразингидрата и выдерживают 45 м1ш при комнатной тектературе. Раствор концентрируют в вакууме до 300 NWI, добавляют к нему 500 мл ьоды, отфильтровывают осадок, промьтаю7 водой до нейтрального состояния, сушат, 13,5 г полученного гидразида пере осаждаю т из смеси вода и кристаллизуют из метанола. Выход 11 г; т. пл, 225-227 С. б)2-Тре(тБу)-Лей-Тре(тБу)лн-Асп. | (ОтБу )-Фен-Асн-Лиз (Б ок) -Фен-Гис-Тре (тВу }Фен-Про- лн-Тре (тБу) -Ала-Тре (тБу) -ГлиВал-4 ли Ала-Про-МН а 4,ОО г Z-Тре(тБу)-Лей-Тре(тБу)-ГлнAcn(OTBy) eH-NH-NHg в 25 мл ДМФА нагревают при перемешивании до 70 С мО образования раствора, охлаждг-ют до -20 С, прибавляют 2,50 мл 3,70 н. раствора хлористого водорода в диоксане, при перемешивании и охлаждении до -2О°С прибавляют по каплям 0,48 мл тре-т бутилнитрита, нагревают до -10°С и при этой температуре перемешивают 15 мин. Затем по каплям прибавляют охлажденный до -10 С раствор 4,2 г Н-Асн-Лиз(Бсж)-Фен-ГисТре ( тБу) -Фен-Про-Гли-Тре (тБу) - Ал а-Тре (тБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про- Н2 (ацетат) в 50 мл ДМФА и 1,6 мл N -этилдиизопропил- амина, нагревают до , перемешивают 60 мин, постепенно прибавляя по каплям 0,8 мл Ы-этилдиизопропиламина, выдерживают 17 час при 23С , к полученному студенистому осадку прибавляют 50О мл ледяного диэтилового эфира, свободного от перекисей, отфильтровывают осадок, промывают его диэтилсаым эфиром, сушат, растирают с 200 мл ледяной воды, фильтруют , сушат и переосаждают трижды из смеси ДМФА вода и дважды ( из смеси ДМФА - ацетоуксусный эфир. Выход 4,98 rjT 0,61; 0,38. в) Н-Тре(тБу)-Лей-Тре(тБу)-Глн-Асп (ОгБу )-Фен-Асн-Лиз (Бок )-Фен-Гио-Тре (тБу)-Фен-Про-Глн-Тре(тБу)-Ала-Тре(тБу)Вал-Гли-Ала-Про- NH 3,0 г полученного продукта растворяют в 200 мл 90%-ной уксусной кислоты, гидрируют известным образом в присутствии 0,5 г 10%-ного палладия на угле, полученную уксусно-кислую соль растворяют в 20О мл насыше1шого водой и-бутанола, промьшают несколько раз разбавлеш1ым раствором бикарбоната натрия, разбгшленным раствором хлорида натрия и водой. Образующиеся эмульсин отделяют центрифугированием. , Бутанольный раствор упари вают досуха, получают 2,15 г Н-Тре(тБу) Лей-Тре(тБу)-Глн-Асп(()-Фен-Асп(ОтБ -Фен-Асн-Лиз(Бок)-Фен-Гис-Тре(тБу)-Фен-Про-Глн-Тре (тБу)-Ал а-Тре (т Бу)-Гли-Вал-Гли-Апа-Про- NH в виде бесцветной смолы, Rf 0,37; 0,19Г г) Бок-Цис Гли-Асн-Лей1сер(тБу)-Тре (тБу) -Цис-Мет-Лей-Гли-Тре( тБу) -Лей-Тре (тБу)-Глн-Асп(ОтБу)-Фен-Асн-|Лиз(Бок)-Фен-Гис-Тре (тБу )-Фен-Про-Глн-Тре (тБу) -Ала-Тре(тБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про- N Н .К смеси,01 г полученного продукта, 1 .Or Брк-Цис Гли-Асн-Лёй Сер (тБу) -Тре{тБу) -Цис-Мет-Лей-Гли-ОН, 250 мг N -оксисукцинимида и 30 мл ДМФА прибавляют при перемешивании 4ОО г дициклогексилкарбодиимида, перемешивают 6 час ;при 43°С, в течение 3 час охлажда-. ют до 0°С, отфильтровывают дицикло; гексилмочевину, вливают фильтрат в 250мл ледяного диэтилового эфира, свободнсяго от перекисей, отфильтровывают осадок, промь вают его диэтиловым эфиром и сушат. Про,дукт трижды переосаждают из смеси ДМФА водаГ и трижды из смеси ДМФА- ацетон. Вы 0,33; -Rf0,30; ход 1,72 г; Т( 0,58. При м е р 8. Н-Цис-Гли-Асн-Лей-Сер-ТреД1иС-Мет-Ле4 -Гли-Тре-Лей-Тре-Глн-Асп-Фен-Асн-Лиз-Фен-Гис-Тре-Фен-Про-Глн-Тре -Асн-Тре-Гли -Вал-Гли-Ала-Про-гШ j (Лей -Асн -Тре кал цитонин М). 170 мг Бок-Цис-Гли-Асн-Лей-ХЗер(тБу)- ТреС тБу)-llrfc-MeT-Лей-Гли-Тре (тБу) -Лей- ЧГре (тБу) -Глн-Асп (ОтБу) -Фен-Асн-Лиз (Б ок Фен-Гис-Тре (тБу) -Фен-Про-Глн-Тре (тБу) -Асн-Тре(тБу)-Гли-Вал-Гли-Ала-Про(Н2 раст воряют в 5 мл 9О%-ной трифтсруксусной кислоты, выдерживают 9О мин при , трифторацетат пептида осаждают диэтиловым эфиром, свободным от перекисей, отфильтровывают его,промывают диэтиловым эфиром, сушат и растворяют в 1%-ной уксусной кислоте. Раствор фильтруют через колонку, заполненную слабоосновным ио- нообменником в форме ацетата, элюируют 1%-ной уксусной кислотой и лиофилизируют элюат, получая 116 мг ацетата, который растворяют в 5 мл воды (рН 4,2), при пе- ремешивании прибавляют небольшими пор|циями 2,8 мл слабоосновпого ионообмен- ника в форме основания (Мерк № 11), наблюдая медленное повышение рН раствора и начало осаждения свободного пептида при рЬЬ-в,7. После перемешивания в течение 2 час рН достигает 7Д, Осадок и ионообменник отфильтровывают, промывают водой, растворяют пептид в 90%-ной уксусной кислоте, нагретой до 60°С, фильтруют, промывают на фильтре 90%-ной уксусной кислотой и лиофилизируют. Получают,98 мг Лей - 6 ат кальцитонинаМ в виде Асн -Тре 0,33 (пластины И3целлю« ацетата, fij лозы); Uf 0,47 (алокс-шгастины). Применяемый в качестве исходного |матер ала защищенный пептид | можно полу.чить спе дующим образом.. . а) Z -Тре(тБу)-ЛеЙ-Тре(тБу)-Глн-Аст. (ОтБу) -Фен-Асн-Лиа( Бок) -Фен-Гис-Тре (тБу ) Фен-Про-Глн-Тре {тБу) -Асн-Тре (тБу) -ГлиВал-Гли-Ала-Про-ЙН38О мг2-Тре(тБу)-Лей-Тре(тБу)-Глн-Асп(ОтБу)-Фен-КНЫН растворяют в S мл ДМФА при перемешивании и нагревании СО 7О С, охлаждают до -20 С, прибавп5пот 0,265 мл 3,71 н. раствора xnofaicToro водорода в диоксане и затем 0,051 wn трет-бутилнитрита, выдерживают 1О мин при -10°С, прибавляют охлажденный до 10 С раствор Н-Асн-Лиа(Бш)-4 ен-Гис Тре (тБу) -Фен-Про-Глн-Тре {тБу) -Асн-Тре . |(тБу)-Гли-Вая-Гли-.Апа-Про-МН, (ацетат) в 5 мл ДМФА и О,2О мл N -этилдииаотропиламина, перемешивают 1 час при О°С, прибавляя при этом еще 0,07 мл - Эпа1-. диизопррпиламина. Смесь нагревают до комнатной температуры, выдерживают Д. час и 20 час при 5 С, X образовав шейся студенистой массе добавлшо1| 100 мл I ледяной воды, через 1 час фильтруют при , промьшают осадок водой сушат, растирают с диэтиловым эфиром, фильтруют, сушат, пере осаждают из смеси ДМФАг йОДа и дважды из смесиДМФА - ацетон. Выход 440мг; 0,52; /Rf 0,31;-Ru.. 0,40. б) Н-Тре(тБу)-Лей-Тре(тБу)-Глн-Ас11. (ОтБу )-Фен-«Асн-Лиз(Бок)-Фен-Гис-Трв ч (тБу)-Фён-Про-Глн-Тре( тБу)-Асн-Тре{тБу)Гли-Вал-Гли-Ала-Про-МН g 260 мг полученного продукта рас-пзоряют в 25 мл 80%-ной уксусной кислоты, гидрируют известным образом в ..присутствии 5О мг 1О%-ного палладия на угле 266 мг полученной смолы растворяют в 20 мл на сыщенного водой н-бутанола, промывают раствор несколько раз раствором бикарбоната натрия, разбавленным раствором |хлорида натрия и водой, бутанольный слой упаривают и получают- 199 мг соединения, R t 0,13; Rf О,36. в)Бок-Ц с-Гли-Асн |Лей-Сер(тБу)-Тре (тБу)-Цис-Мет-Лей-Гли-Тре(тБу)-ЛейТре (тБу) -Глн-Асп ;ОтБу.-Фен-АснЛиэ-( Бок)« Фен-Гис-Тре(тБу)-Фен Про-Глн-Тре(тБу)Асн-Тре (тБу) -Гли-Вал-Гли-Ала-Про-НН а , 1 К смеси 102 мг Бок-Цис-Гли-Асн-Лей- i Cep( )Тре{ тБу) -Цис-Меа -Л ей Гли-ОН, 499 мг H-Tpв-(тБy)-Лeй-Tpe(гБy)-Гпн-Acп (ОтБу )-Фен-Асн-Лиэ {Бок )-Фен-Гис-Тре (тБу)-Фен-Про-Гп н-Трв(тБу)-Асн-Тре(гБу) Гпи-В9П-Г)1и Апа-Прс MHj, 16 мг . -оксисушинимида и 3 мп ДМФА прибавдягот при пе, ремешивании 27 мг дицикпогексипкарбодиимида, п емешиеают бчаспри , выпивают в : педянойдвэтиповыйэфир, через 2 час осадок отфильтровывают при 0°С, промывают нафипьт ре диэтвповымэфиром, сушат, растворяют при вагреваниив5мпДМФА, охлаждают до комнат HtA температуры, осаждают; 50 мл апетоуксусного афира, отфильтровывают, промывают ацетоуксусным эфиром, сушат, растворяют при нагревании в 10 мл смеси ДМФА- метйнол (1:1), охлаждают .льдом и добавляют ледяную воду, вьодерживают 17 час, фильтруют при ОС, отделяют мелкий осадок, промывают его водЫ1 и сушат в вакууме пал,- хлорид ом{кальция. Получают 175 мг продукта, P; 0,60; R 0,23 % Х),22.. П р им е р 9. Н-Цис-Гли-Асн-Лей-Сер -Тре-ЦиС-Мет-Лей-Гли-Тре-Тир-Тре-Глн Асп-4 ен--Асн-Лиэ-4 ен-Гис-Тре-Фен-Про-Глн-Тре-Асн-Иле- Гли-Вал-Гли-Ала-ПроrNHj (Асн -калыщтонин М). i К 2,5 мл ледяной 9О%-ной трифторук- сусной кислоты при перемешивании в токе азота прибавл,я)0.т 115 мг мелкопорошково го Бок-Цйс-Асн-ЛеЙ-Сер(тБу}-Тре(тБу)НЗиЬ-Ме -Ле -Гли-Тре (гБу)-Тир (тБу)-Тре (гБу)(ОтБу)-Фен-Аен-Лиз(Бок)-Фёй-Гис-Тре(тБу)-Фен-.Про-Гпн-Тре(тБу)-Асн-Иле-Гли-Бал -Гпи-Ала-Про- NH. нагревают до 21 С, вьшерживают 90 мин при этой температуре, выливают в 50 мл ледяного диэтилового эфира, свободното от пе- рекисей, отфильтровывают осадсж, сушат и получают 84 мг трифторацетата Асн - капьцитонина М, который pacTBopsnoT в Ь%-ной уксусной кислоте, фильтруют через KOi л инку со слабоосновным-Ирнообменником. в форме ацетата (Мерк № 11), элюат лио-, фшгизируют и получают 75 мг - кал цитонина М в форме ацетата. После полног гидролиза (6 н. соляная кислота, 24 час, 110 С) продукт содержит вычисленное ко.личество аминокислот. Для полученного прц дукта и кальцитонина М Rf 0,55 и 0,60, Ц 0,58 и 0,62 соответственно. ПрименяемЬ1й в качестве исходного материала защищенный пептид можно получить следующим образом. а) Z -Асн-Иле-Гли-Оме Смесь 9,1 г Н-Иле-Гли-Оме . НСС, . 16,3 г Z -Асн-Онп, 50 мл ДМФА и 4,1 мл N «-«тилморфолина вьщерживают 18 час при комнатной температуре, к образовавшемуся студню прибавляют 300 мл диэтилового эфира, растирают, отделяют осадок, сушат, ряп-пгоают с 200 мл воды, фильтруют, сушат и кристаллизуют из смеси ацетоуксусный эфир-гексан, выход 15 г; т.пл. 218219 С. б)Н-Асн-Иле-Гли-Ок е 14. г Z -Асн-Иле-Гли-Оме суспендируют в 50О мл ДМФА и гидрируют в присутствии 1 г 109о-ногб-палладия на угле, наблюдая растворение исходного продукта. Катализатор отфильтровывают и раствор упаривают досуха. Быход 9,7 г. в)2-Тре{тБу)-Асн-Иле-Гли-Омв Смесь 9,5 г Н-Асн-Иле-Гли Оме, 80мл ДМФА и 13,6 rZ -Тре(тБу)-Осу выдерживают 18 час при 25°С, наблюдая полное затвердевание раствора, прибавляют ЗООмл диэтилового эфира, растирают, отделяют осадок фильтрованием, растирают с 200 мл воды, фильтруют, сушат и кристаллиз тот. Выход 12,4 г; т. пл. 207-208°С. г)Н-Тре(тБу)-Асн-Иле-Гли-Оме 11,0 г 2 Х-Тре(тБу)-Асн ле-Гли-Оме рас-георяют при нагревании в 5ОО мл ДМФА и гидрируют в присутствии 1 г 10%-ного палладия на угле до прекращения поглощения водорода, катализатор отфильТровьтают, фильтрат досуха и получают 8,Ог соединения, Rj 0,12; Щ 0,28 -(хлороформ- метанол, 70:30). д)2 -Глн-Тре(тБу)-Асн-Иле-Гли-Оме 7,5 Н-Тре(тБу)-Асн-Иле-Гли-Оме paciv. воряют в 1ОО мл ДМФА и прибавляют 7,7 г JZ. -Глн-Онп. Реакционная смесь .медленно затвердевает. Через 18 час к затвердевшей массе при комнатной температуре прибавляют 375 мл диэтилового эфира, хорошо растирают, фильтруют, сушат осадок, растирают его с 250 мл воды, фильтруют, сушат, пе-. реосаждают из смеси трифторэтанол- вода и получают 11 г продукта, т.пл. 275-277°С, труднорастворимого в обычных органических растворителях. е)Н-Глн-Тре (тБу) -Асн-Иле-Гли-Оме 8,5 г Z -Глн-Тре(тБу)-Асн-Иле-Гли-Оме суспендируют в 500 мл ДМФА и гидрируют в присутствии 1,5 г 1О%-ного палладия на угле, наблюдая образование раствора исходного вещества, отфильтровывают катализатор, упаривают фильтрат и получают 6,5 г смолы, 0,20; ,16. ж)Z -ТреТтБу)-Фен-Про-Глн-Тре(тБу)ч Асн-Иле-Гли-Оме 6,0 г Н-Глн-Тре(тБу)-Асн-Иле-Гли-Оме растворяют в 50О мл ДМФА, прибавляют 5,8 г 2-Тре(тБу)-Фен-Про-ОН, г N -оксисукцинимида и 3 г дициклогексилкар. одиимида, перемешивают 16 нас при комнатной температуре, отфильтровывают ди25

цнклогсксплмочевину, концентрируют фильтрат 200 мл, выливают в 1,5 л диэтилового эфира, выдерживают 3 час при . О С, отфильтровывают осадок, получая .1.0 г порошкообразного продукта, который расти- j рают с 20О мл воды, фильтруют, сушат и выделяют 9,6 г продукта-сырца, который растирают с ацетоуксуснь1м эфиром, фильтруют, сушат, суспендируют в аде тоне, филвтруют и сушат. Выход 9,3 г; R 0,66, р

з) Z -Тре{тБу)-Фен Про-Глн-Тре(тБу)Асн-Иле-Гли-ОН

3,1 г 2 -1 Р© (тБу) -Фен-Про Гл -Тре (тБу)-Асн-.Иле-Гди Оме растворяют при нагревании в смеси 155 мл метанола,15

45 мл ди(жсана и 55 мл воды, ол:аждают до .комнатной температуры, прибавляют 8 мл 1,0 н. едкого натра, выдерживают 30 мин при комнатной температуре, охлаждают до О С, прибавляют 150 мл ледяной ji воды и 24 мл 1 н. соляной киcлoтыJ отфильтровывают осадок, промывают его ледяной водой, сушат и получают 2,56 г однородного порошка, 1 О,21; Т 0,19.

и) Н-Тре (тБу) -Фен-Про-Глн-Тре (тБу)- 25 А си-Ил е-Гли-ОН

2,37 г 2 -Тре(гБу)-Фен Про-Глн-Тре (тБу)-Асн-Иле-Гли-ОН растворяют в 60 мл 80%-ной уксусной кислоты и гидрируют в присутствии 200 мг 1О%-ного палладия зо на угле, отфильтрсеьшают катализатор, упаривают фильтрат, сушат остаток и получают 2,28 г смолы, 0,21; ,55.

и) И -Асн-Лиз(Бок)-Фен-Гис-Тре(тБу) . Фен-Про-Глн-Тре{тБу)-Асн-Иле-Гли-ОН 35

1,41г2-Асн-Лиз(Бок)-Фён-Гио- .NH NHj; растворяют в 20 мл ДМФА, охлаждают до -30 С, прибавляют 1,5 мл 3,2 н, раствора хлористого водорода в дноксане и 0,29 мл трет-бутилнитрита, нагревают до -12 С, пе-40 ремешивают 15 мин при -12 С, прибавляют по каплям охлажде.нный до О С раствор 1,65 г Н-Тре(тБу)-Фен-Про-Глн-Тре(тБу)Асн-Илв-Гли-ОН, 1,2 мл 4С)%-ного {заствора гидроокиси триметилбензиламмония в метано-)5 ле, 30 мл ДМФА и 6 мл воды, охлаждают льдом, перемешивают 30 мин, прибавляют 1,1 мл N -этилдиизопропиламина, выдерживают 5 час при О С, наблюдая образова1ше студенистого осадка, выливают в ЗСО мл 50 уксусной кислоты, перемешивают 2 нас при О С и отфильтровывают осадок. Осадок промьюают на фильтре водой, сушат, прибавляют 50 мл метанола, перемешивают 2 час при комнатной температуре, фильт- 55 руютЧ- получают 399 мг продукта, iRj 0,18; 0,24; Т 0,33.

к) 2 -Асн-Лиз(Бок)-Фен-Гис-Тре(тБу)-фен-Про-Пш-Тре( гБу -Acн-Илe-Гли-Baл-Гли-Aлa-Пpo- hj Ь12

26

К смеси 420 мг Z. -Асн-Лиз(Бок)-Фен 4Гис-Тре(тБу)-Фея-П ро-Глн-Тре(тБу)-.Асн-Ипе-Гпи-ОН, 55 мг N -оксисукцинимида и 7 мл ДМФА прибавляют при перемешивании 62 мг дициклогексилкарбодиимида и 103мг Н-Вал-Гли-Ала-Про-КНз. , нагревают до 45 С, перемешивают 5 час при этой температуре, охлаждают до О°С, выливают в 8Ом ледяного диэтилового эфира, отфипьтровьшаю осадок, сушат, переосаждают|иэ смеси ДМФАацетон и затем из смеси ДМФА - aueTOHHisрил и получают 420 мг соответстеузощего гексадекапептида, ,25; R,

0,60.

л) Н-Асн-Лиз(Бок)-Фен-Гн{.Трв{тБу)-Фен-Про-Глн-Тре (тБу) -Асн-Иле-Гли-Вал-Гли-Ала-Про-KHj,

; мг полученного продукта растворяют в 25 мл 80%-ной уксусной кислоты и гидрируют в присутствии 100 мг 109 ного палладия на угле, отфильтровывают ка-. та(шзатор, упаривают фильтрат досуха Hjno- лучают 380 мг продукта, 1 0,30.

м) Z -Тре(тБу)-Тир(тБу)-Тре{тБу)-Глн-Асп( ОтБу )-Фен-Асн-Лиз( Бок)-Фен-Гисi-Tpe( тБу)-Фен-Про-Глн-Тре( тБу)-Асн-ИлеТли-Вал-Гли- Ала-Лро-тННа

358 мг 2-Тре(тБу)-Тир(тБу)-Тре(тБу)-Глн-Асп(ОтБу)-Фен-41НМН2 растворяют при нагревании в 3 мл ДА1ФА, охлаждают до -2О С, прибавляют 0,26 мл 3,2 н. раствора-хлористого водорода в диоксане и 0,045м н-бутилнитрита, перемешивают 15 мин при -15 С, прибавляют охлажденный до О С раствор 380 мг полученного выше (пункт л) продукта в смеси 10 мл ДМФА, 2 мл воды, 1 мл ацетонитрнла, 2 мл димегилсульфоксида и 0,2 мл Nf -этилдиизопропиламина и перемешивают 18 час при . Осадок отфильтровывают, дважды переосаждают из смеси ДМФА - ацеуоуксусный эфир, смешивают с 20 мл метанола, фильтруют, сушат и получают 24О мг целевого пептида, R0,40; R. 0,28; R, 0,42.

I : I

н)(тБу)-Тир(тБу)Тре(тБу)-ГлнгАсп (ОтБу) -Фен-Асн-Лиз (Бок) -Фен-Гис-Тре (тБу) -Фен-Про-Глн-Т ре (тБу) -Асн-Иле- Гли ал-Гли-Ала-Про-ЫН

22О мг полученного выше (пункт м) продукта растворяют в 15 мЛ|80%-ной уксусной кислоты, гидрируют в присутствии 20 мг lO9G-Horo палладия на угле, отфилы ршывают катализатор, упаривают .фильтрат, досуха, остаток (2Юмг) растворяют в 15мл

насыщенного водой н-бутанола, промьшают раствор разбавленным раствором бикарбоната натрия, затем несколько раз водой, отделяют бутанольный слой, упарившот цо- j суха и получают 202 мг продукта, свободного ог уксусной кислоты ,40;.,32. о) Бок-Цно-Гпи-Асн-Лей-Сер(тБу)-Тре (гБу -Цио-Ме 1 Лей-Гли-Тре (тБу )-Тир (тБ ,,-Тре( гБу)-Гл -Асп{ ОтБу )-Фе1ь-Асн Лиз (Бо гФв Гио-Тре-(тБу)-4 ен-Пр -Гл -Тре (тБу -Ас№ Илв-Гл -Вал-Гл -Ала-Про- N Н j. Kcмтеj jL7.мгl Бстc« иc-Гли-Acн-Лeй(рТтсёу)Гре(тБу)-Цио-Мвт -Лвй-Гли-ОН, 195 мг синтезированного выше пептида, 16 мг М -оксибенэотриаэопа и 3 мл ЛМФА прибавл5пот 25 мг дициклогексилкарбодвимида, в токе азота перемешившр 5 час при 45 Cj выливают в 50 мл ледяного диэтилового эфира, свободного от перекисей, отфильтровьтают осадок, дважд Переосажда1рт его из смеси ДМФА - вода и Фажды из смеси ДМФА - ацетоуксусвы эфир и получают 120 мг продукта, Т 0,31; Rfg 0,17; Rfj. 0,65. Формула изобретения Способ получения пептидов общей форм лы ипв их кнспотн| адд0тиьных солей 3 45 6 7 8 R -СН-СО-Гли-Асн-Ле -Сер-Тре-Цио.Х9 10 11 12 13 14 15 16 17 -Ле| -Гли-Тре Тнр-Тре-Глн-Асп-Фен-Асн18 19 20 21 22 23 24 25 26 -Лиз-Фен-Гио-Тре-Фен-Про-Глн-Тре-Ала27 28 29 30 З 32 -Иле-Гл -Вал-Гли-Лла-П ро- ,Ф1 Н где Р - водород или свободная или ацилированная аминогруппа; X - остаток L- -метионт{а, L -валина, L-норвалнна, L -лейцина, L -изолейцина, ii -норлейцина или L аминомасляной кислоты и где L -аланин заменен С -аспарагином и/или U -изолейцш заменен L -треонином и где в соответствующем случае одна аминокислота или несколько аминокислот заменены в положениях 11,12, -Х -лейцином, U -фенилшханий -Ь-лейцином, L -фвнила нин - L -тирозином и .-глютамин - i-аргинин ом, отличающийся тем, что От соединения формулы 1, где.К и X. имеют вышеуказанные значения и L -аланин заменен L -ас парагином и/или L -и олейдин заменен Ь -тресшином и где в соответствующем случае одна аминокислота I или несколько аминокислот за1 1енены в положениях 11,12,16, 19,22 и 24 выщеуказанными аминокислотами, в которых по меньшей мере одна аминогруппа или одна карбоксильная группа защищена отщепляемой ацидолизом защитной группой, например Jfi -трет утилоксикарбонильаой или Скгрет бутильной, отщепляют защитную группу или защитные группы с последующим выделением целевого продукта в виде оснсшания или их кислотно - адцитивных солей. .Источники информации,принятые во внима-т ние при экспертизе; 1, Патент ФРГ № 2413106, С 07 С 103/52, 1973.