(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УУ-ИЕЗАМЕЩЕННЫХ КАРБАМОИЛОКСИМЕТИЛЦЕФАЛОСПОРИНОВ
зовать хлорсульфонилизоцианат, поскольку он более доступен. Реакцию проводят при непосредственном контактировании спирта с галоидсульфонилизоцианатом, как правило, в полярном органическом растворителе, таком как ацетонитрил или демитилсульфоксил и гидролизом полученного продукта реакции.
Для получения конечного продукта с максимальным выходом реакцию ведут с избытком галоидсульфонилизоциаиата обычно при О- 100°С. Выбор условия для этой реакции в определенной мере зависит от выбора спирта, применяемого в реакции. Гидролиз продукта реакции осуществляется предпочтительно в водной кислой среде.
Если реагирующий цефалоспорин содержит заместители, которые реагируют с изоцианатом, например окси-, или аминогруппы, то эти заместители блокируются или защищаются такими группами, как трифенилметил, трет.бутилкарбонил, N-трихлорэтоксикарбонил и подобные им, и затем удаляются носле введения карбамоилоксигруппы. Например, 7-тритиламиноцефалоспорановая кислота контактирует непосредственно с цитрусовой ацетилэстеразой, давая 7-тритиламинодезацетнлцефалоспорановую кислоту, которая после реакции с галоидсульфонилизоцианатом и гидролиза полученного в результате продукта дает соединение 3-карбамоилоксиметила. Удаление защитной тритильиой группы методами, известными в практике, дает 3-карбамоилоксиметил7-амино-3-цефем-4-карбоновую кислоту, которую можно ацилировать известными методами, и получать З-карбамоилоксиметил-7-ациламидо-З-цефем-4-карбоновые кислоты.
Пример 1. 3-карбамоилоксиметил-7-(2тиенилацетамидо) -З-цефем-4-карбоновая кислота.
К 0,2 г 3-оксиметил-7-(2-тиенилацетамидо)З-цефем-4-карбоксилата кальция, суспендированного в 5 мл ацетонитрила, охлажденного до 0°С и содержащегося в атмосфере азота, добавляют 0,15 мл хлорсульфонилизоцианата. Реакционную смесь перемешивают в течение 70 мин и затем упаривают в вакууме досуха. Полученный в результате остаток экстрагируют 10 мл этиладетата и 10 мл 0,1н. фосфатного буфера, затем устанавливают рН водного слоя около 1,6 и смесь перемешивают в течение 2,5 ч при комнатной температуре. Затем рН доводят до с помощью раствора трикальциевого сульфата и водную фазу отделяют. Органическую фазу экстрагируют 10мл фосфатного буфера при рН 8. рН объединенной водной фазы доводят до 2,1 с помощью соляной кислоты и дважды экстрагируют этилацетатом. Этилацетатные вытяжки сушат над сульфатом натрия и упаривают в вакууме, при этом получают 0,055 г остатка. Этот остаток промывают эфиром и получают 3-карбамоилоксиметил-7 - (2-тиенилацетамидо)-3цефем-4-карбоновую кислоту в виде бледножелтого твердого вещества.
3-оксиметил-7-(2-тиенилацетамидо) - 3-цефем-4-карбоксилат кальция, используемый в качестве исходного материала, готовят из 7- (2-тиенилацетамидо) -цефалоспораната иатрня путем выдерживания в термостате с цитрусовой ацетилэстеразой по способам, хороию известным в практике.
Пример 2. А. З-Оксиметил-7-(грег.бутоксикарбонил) -амино-З-цефем-4-карбоноБая кислота.
7-Аминоцефалоспорановая кислота реагирует с г/эет.бутоксикарбонилазидом, давая Ы-(г/7ет.бутоксикарбонил) - производное в соответствии с известными методами. Затем
это производное контактирует непосредственно с цитрусовой ацетилэстеразой в водном фосфатном буфере при рН 6,5-7 в течение 15 ч, после чего из полученной смеси извлекают З-оксиметнл-7- (трет.бутоксикарбонил) амино-З-цефем-4-карбоновую кислоту.
Б. З-Карбамоилоксиметил-7- (грет.бутоксикарбонил) -амино-З-цефем-4-карбоновая кислота реагирует с хлорсульфонилизоцианатом; полученный в результате реакции продукт
гидролизуют и З-карбамоилоксиметил-7- (трет. бутоксикарбонил)-амино-3-цефем-4 - карбоновую кислоту извлекают снособами, описанными в примере 1. В. З-карбамоилоксиметил-7-амино-З-цефем4-карбоновая кислота.
К 0,5 г 3-карбоксиметил-7-{тре7.бутоксикарбонил) -амино-З-цефем-4-карбоновой кислоты добавляют 3,5 мл анизола, 2 мл трифторуксусной кислоты и неремещивают
при 0°С в течение 5 мин. Полученную в результате смесь упаривают в вакууме и получают карбамоилоксиметил-7амино-3-цефем-4-карбоновую кислоту, которую затем очищают кристаллизацией из этилацетата.
Пример 3. А. 7-(г/7ет.бутоксикарбонил)аминоцефалоспорановая кислота.
27,2 г (0,1 моля) 7-аминоцефалоспорановой кислоты растворяют в 250 мл воды и рН раствора доводят до 8,7 15%-ным раствором едкого натра. К этому раствору по каплям добавляют 16 г (0,11 моля) г/эег.бутоксикарбонилазида при быстром перемешивании в течение более I ч; рН раствора должно быть постоянно 0,87. О конце реакции можно судить по установлению постоянного рН 8,7. Затем рН раствора доводят фосфорной кислотой до 2 и продукт экстрагируют этилацетатом (3X500 мл). Этилацетатную вытяжку промывают дважды водой, сушат, упаривают и получают 7- (трет.бутоксикарбонил) -аминоцефалоспорановую кислоту.
Б. З-оксиметил-7- (грег.бутоксикарбониламино-З-цефем-4-карбоксилат кальция.
18,5 г 7-(грег.бутоксикарбонил)-аминоцефалоспорановой кислоты растворяют в 1000 мл препарата, содержащего цитрусовую ацетилэстеразу. Температуру поддерживают при 30°С и рН 6,5-6,8 путем добавления 1 н.
NaOH. После установления определенного рН,
реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч и трижды экстрагируют по 500 мл этилацетата. Этилацетатную вытяжку промывают дважды водой и затем экстрагируют водным раствором бикарбоната кальция, концентрация которого достаточна для поддержания рН 7,5. Водную фазу сушат при температуре ниже 0°С и остаток кристаллизуют из смеси метанол-изопропанол; получают З-оксиметил-7(.бутоксикарбонил)-амино - 3 - цефем-4карбоксилат кальция.
В. З-карбомоилоксиметил-У-грет.бутоксикарбонил-амино-З-цефем-4-карбоновая кислота.
5 г 3-оксиметил-7-(трет.бутоксикарбонил)амино-З-цефем-4-карбоксилата кальция суспендируют в 150 мл ацетонитрила, охлажденного до 0°С в атмосфере азот 3,75 мл хлорсульфонилизоцианата добавляют по каплям в течение не менее 15 мин. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 0°С и упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток переносят в 250 мл этилацетата и 250 мл 0,1 н. фосфатного буфера при рН2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Затем раствором трикалийфосфата устанавливают рН водного слоя равным 8. Смесь перемешивают и органическую фазу отделяют и промывают снова фосфатным буфером с рН 8. Объединенные водные вытяжки доводят до рН 2 и экстрагируют (3X200 мл) этилацетатом. Этилацетатную вытяжку промывают еше один раз водой, сушат над MgSO,, упаривают и получают 3-карбамоилоксиметил - 7-(т/зет.бутоксикарбонил)-аминоЗ-цефем-4-карбоновую кислоту.
Г. З-карбамоилоксиметил-7-амино-З-цефем4-карбоновая кислота.
1,5 г 3-карбамоилоксиметил-7-(.бутоксикарбонил) -амино-З-цефем-4-карбоповой кислоты в 15 мл анизола и 25 мл трифторуксусной кислоты перемешивают при 0°С в течение 10 мин. Полученную в результате реакционную смесь упаривают при 0,1 мм рт. ст. и 30°С. Добавляют 5 мл анизола и упаривают при 0,1 мм рт. ст. и 30°С. Остаток переносят в 20 мл воды и доводят рН до 7,5 добавлением 0,1 н. раствора едкого натра. Водный раствор экстрагируют трижды по 10 мл хлористого метилена и устанавливают рН 2,5 осторожным прибавлением смолы Дауэкс 50 (Н+форма). Твердую смолу отфильтровывают и фильтрат высушивают при температуре ниже 0°С. При этом получают З-карбамоилоксиметил-7-амино-З-цефем-4-карбоновую кислоту.
Д. З-карбамоилоксиметил-7- (D-a-азидофенилацетил) -амино-З-цефем-4-карбоноБая кислота.
0,271 г З-карбамоилоксиметил-7-амино-З-цефем-4-карбоновой кислоты суспендируют в 2 мл воды и 3 мл ацетона, охлажденного до 0°С при установленном добавлением триэтиламина рН смеси 8. Затем добавляют 0,200 мл пиридина и после этого в течение более 5 мин добавляют по каплям 0,200 г D-a-азидофенилэдетилхлорида. Реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 20 мин. Ацетон удаляют при пониженном давлении и остаток очищают 10 мл фосфатного буфера с рП 8 и трижды экстрагируют по 8 мл этилацетата. рН водной фазы доводят до 2 и экстрагируют 3X15 мл этилацетата. Этилацетатную вытяжку сушат, упаривают и получают З-карбамоилоксиметил-7-(D-a-азидофенилацетил) - амино-З-цефем-4-карбоновую кислоту; после кристаллизации из смеси этилацетат: эфир получают очиш,енный продукт.
Е. З-карбамоилоксиметил-7-(D-a-аминофенилацетил) -амино-З-цефем-4-карбоновая кислота.
0,300 г З-карбамоилоксиметил-7-(D-a-азидофенилацетил) -амино-З-цефем-4-карбоновой кислоты растворяют в 10 мл метилового спирта и 2 мл Н2О. Добавляют 0,300 г 10%-ного палладия на угле и смесь восстанавливают при
давлении 40 фунтов Н2 в течение 2 ч. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают и получают З-карбамоилоксиметил-7-(D-aаминофенилацетил)-амино-3-цефем - 4-карбоновую кислоту. Реакцией полученной кислоты
со стехиометрическим количеством основания в водном растворе и лиофильной сушкой полученного раствора получают соль щелочного металла, например натриевую или калиевую соль, или аминную.
Пример 4. Карбамоилоксиметил-7-метокси-7-(2-тиенилацетамидо)-3 - цефем - 4-карбоповая кислота.
К суспензии 0,3 г 3-оксиметил-7-метокси-7(2-тиенилацетамидо)-3-цефем-4 - карбоксилата кальция в 7,5 мл ацетонитрила, охлажденного до 0°С в атмосфере азота, добавляют 0,25 мл хлорсульфонилизоцианата. Полученную реакционную смесь перемешивают в течение 1,5 ч и затем упаривают при пониженном давлении досуха. Полученный остаток переносят в 15 мл этилацетата и 10 мл 0,1 н. фосфатного буфера. рП водного слоя устанавливают равным 1,6 и смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. После
установления рН 8 водным раствором трикалиевого сульфата водную фазу отделяют. Органическую фазу экстрагируют 15 мл фосфатного буфера при рН 8. Соляной кислотой рП объединенной водной фазы доводят до 2,0 и
дважды экстрагируют 10 мл этилацетата. Этилацетатные вытяжки сушат над сульфатом натрия и упаривают при пониженном давлении, получая остаток, содержащий 3-карбамоилоксиметил-7-метоксп-7-(2 - тиенилацетамидо)-3-цефем-4-карбоновую кислоту. Таким же образом, когда 3-оксиметил-7-метокси-7(2-фурилацетамидо)-3-цефем - 4-карбоксилат калия, 3-оксиметил-7-метокси-7- (2-тианафтен2-ацетамидо) -З-цефем-4-карбоксилат калия,
3-оксиметил-7-(2-тиенил-2 - карбоксиацетамидо)-3-цефе: 1-4-карбоксилат калия и 3-оксиметил-7-(2-фенил-2-карбоксиацетамидо) - 3 - цефем-4-карбоксилат калия реагируют с хлорсульфонилизоцианатом и получаемые реакциоцнь1е продукты гидролизуются по способу,
описанному выше, получают соответствующие .соединения 3-карбамоилоксиметила.
Исходные соединения, используемые .в этом примере, приготовляют из соответствующих соедипений 3-ацетоксиметила выдерживанием в термостате с цитрусовой ацетилэстеразой в соответствии со способами, хорошо известными в практике.
Соли 7-метокси-7- (2-тиенилацетамидо) -цефалоспорановой кислоты, 7-метокси-7-(2-фурилапетамидо) -цефалоспорановой кислоты и 7-метокси-7-(2-тиапафтен - 2 - ацетамидо)-цефалоспорановой кислоты готовят по известным способам, описанным ранее.
Таким образом, 3-оксиметил-7-метокси-7-(2тиенилацетамидо) -З-цефем-4-карбоксилат калия готовят следующим образом.
A.Бепзгидрил-7-аминоцефалоспорапат.
К смеси 0,8 г (0,25 моля) 7-аминоцефалосцораповой кислоты в 300 мл свободного от перекиси диоксана при комнатной температуре добавляют при перемешивании 4,3 г (0,022 моля) моногидрата л-толуолсульфокислоты. Чистый раствор концентрируют в вакууме и промывают дважды диоксаном.
Остаток растворяют в 300 мл диоксапа при комнатной температуре, и раствор 10 г (0,05 моля) дифенилдиазомстана в 25 мл диоксана добавляют по каплям в точение 15 мин. Темно-окрашенный раствор перемешивают еще 30 мин. Затем метилового спирта (25 мл) добавляют для разложения избытка дифенилдиазометана. Смесь концентрируют в вакууме и остаток распределяют между 2 см хлористого метилена и 200 мл воды, содержащей 10 г кислого фосфорнокислого калия (рН 8,5). Органическую фазу промывают водой, сушат над сернокислым натрием, концентрируют в вакууме и получают масло.
Масло перемешивают со 100 мл эфира в течение 1 ч. Полученный осадок фильтруют, промывают эфиром и сушат до постоянного веса, получая 4,6 г бензгидрил-7-аминоцефалоспораната. Т. пл. 126-128°С.
Б. Бензгидрил-7-диазоцефалоспоранат.
К перемешиваемой смеси 1,6 г нитрита натрия, 30 мл воды и 40 мл хлористого метилена при 0°С добавляют 880 мг (0,002 моля) бензгидрилового эфира, 760 мг (0,004 моля) раствора «-толуолсульфокислоты в 5 мл воды в течение нескольких минут. Смесь перемешивают при 0°С в течение 20 мин, затем органическую фазу отделяют, промывают 10 мл ледяной воды, сушат над сульфатом натрия при 0°С, фильтруют и концентрируют в вакууме при комнатной температуре, получая 900 мг бензгидрил-7-диазоцефалоспораната в виде стекла.
B.Бензгидрил-7-бром-7-азидоцефалоспоранат.
К раствору 900 мг бензгидрил 7-диазоцефалоспораната в 20 мл хлористого .метила и 10 мл нитрометана при О-10°С сразу добавляют четвертичную соль триэтиламина
ч- -
(EtsNHNs), и затем нитрида брома (BrNs), далее добавляют 50 мл воды и твердый бикарбонат натрия до рН 8.
Органический слой отделяют и экстрагируют 2X20 мл воды, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме, получая 900 мл бензигидрила 7-бром-7-азидоцефалоспораната.
Приготовление раствора бромазида (ВгЫз).
К 8 мл хлористого метилена при 0°С сначала добавляют 2,66 г (0,04 моля) азида натрия и затем 0,65 г (0,0042 моля) брома. К полученной смеси при 0°С и перемешивании добавляют по каплям 2 мл концентрированной соляной кислоты. Смесь перемешивают при 0°С в течение 3 ч. Органический слой декантируют и водный слой экстрагируют 5 мл хлористого метилена. Объединенную органическую фазу хранят при -10°С.
+ - Приготовлепие (C2H5)3NHN3 раствора.
К смеси 1,5 г азида натрия в 5 мл воды и 10 мл хлористого метилена, охлажденных до -10°С добавляют по каплям при температуре - 10°С-0°С 4 мл 50%-ной серной кислоты. Органическую фазу осторожно сливают с водной пасты, и водный экстракт промывают 5 мл хлористого метилена. Объединенную органическую фазу сушат над хлористым кальцием. Декантированный раствор азотистоводородной кислоты доводят до рН 7 добавлением (С2Н5)зН и хранят при -10°С.
Г. Бензгидрил 7-метокси-7-азидоцефалоспоранат.
К раствору 0,4 г (0,00072 моля) бромазида в 30 мл метанола добавляют 0,150 г (0,0008
моля) борфторидсеребра (AgBF4). Смесь перемешивают в темноте в течение 2,5 ч. Смесь концентрируют в вакууме и остаток переносят в 50 мл профильтрованного хлористого метилена. Фильтрат экстрагируют дважды насыщенным раствором бикарбоната натрия, дважды - водой, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме, получая 0,3 г (83%) продукта в виде кристаллов, т. пл. 145-148°С.
Д. Бензгидрил-7-метокси-7-аминоцефалоспоранат.
1,0 г бензгидрил-7-азидо-7-метоксицефалоспораната растворяют в 100 мл диоксана, добавляют 1,0 г окиси платины и смесь перемешивают при атмосферном давлении в атмосфере водорода в течение 1 ч. Затем добавляют вторую порцию окиси платины (1 г) и реакционную смесь вновь помещают в атмосферу водорода и перемешивают в течение 3 ч до
тех пор, пока азид полностью не прореагирует, что определяется с помощью инфракрасного анализа. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток переносят в 50мл хлороформа и фильтруют через силикагель 9
в хлороформ в пористой стеклянной воронке емкостью 60 мл. Вещество элюируют хлороформом до тех пор, пока не образуется 200 мл хлороформного раствора. Хлорофор:- удаляют при пониженном давлении и получают 0,532 г бензгидрил-7-метокси-7 - аминоцефалпспсраната, который ацилируется без дальнейшей очистки. Е. Бензгидрил 7-метокси-7-(2-тиенилацетамидо) -цифалоспоранат. 0,632 г бепзгидрил-7-метокси-7-аминоцефалоспораната помео ают в 25 мл хлористого метилена и охлаждают до 0°С. Затем к полученной смеси добавляют по каплям 0,6 мл 2-тиенилацетилхлорида в течение 0,5 мин и 0,6 мл пиридина в течение 1 мин. Реакционную смесь перемешивают при 0°С Б течение 15 мин и выливают на истолченный лед. Смесь перемешивают, органический СЛОЙ отделяют и промывают 20 мл воды, 20 мл 5%-ного раствора бикарбоната натрия и еще раз 20 мл воды. Органическую фазу сущат и метиленхлорид упаривают досуха. При этом получают 1,417 г неочищенного продукта. Это вещество помещают на колонку, заполненную 60 г силикагеля, предварительно смоченного бензолом и элюируют бензолом; отбирают 100 мл фракции с последующим элюированием смесью 300 мл метнленхлорид/бензол/1:1/ в виде 3 фракций и 500 мл метиленхлорида в 5 фракциях. Продукт удаляют из колонки элюированием 400 мл .хлороформа в 4 фракциях, получая 0,592 г. Это вещество переносят в 25 мл метилепхлорида и перемещивают при комнатной температуре с раствором 0,120 г бикарбоната натрия в 20 мл воды в течение получаса. Слон отделяют и органический слой промывают водой, сущат и упаривают досуха, получают 0,420 г бензгидрил 7-г,:етокси-7-(2-тиенилацетамидо)-цефалоспораната, который показывает одно цятно на тонкослойной хроматографической пластинке. Ж- 7-метокси-7- (2-тиенилацетамидо) -цефалосцораната калия. 0,420 г 7-метокси-7- (2-тиенилацетамидо) -цефалоспоранат бензгидрила растворяют в 3,5 мл анизола и обрабатывают 10 мл трифторуксусной кислоты при комнатной температуре в течение 10 мин. Трифторуксусную кислоту ц анизол удаляют при пониженном давлении и температуре не выше 40°С; остаток нереносят в 25 мл хлороформа и обрабатывают 20 мл воды, содержащей nj20 г бикарбоната калия. Смесь перемещивают при комнатной температуре в течение получаса и органическую фазу отделяют и промывают подои. Объединенную водную фазу нромывают дважды метилепхлорпдом и 11эдвергают лиофильной сущке, получая 0,382 г 7-метокси-7(2-тиенилацетамидо) -цифалоспораната калия в виде коричневатого твердого вещества. 3. 3-оксиметил-7-1 ;стокси-7- (2-тиенилацетамидо) -З-цефем-4-карбоксилат калия. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 В результате обработки 7-метокси-7-(2-тиенилацетамидо)-цефалоспораната калия в водном растворе при рН 6 ацетилэстеразой, полученной из апельсиновых корок получают 3-оксиметил-7-метокси-7 - (2 - тиенилацетамидо)-3-цефем-4-карбоновую кислоту, которую извлекают в виде ее соли калия, полученной известным способом. 3-оксиметил-7-метокси-7 - (2 - карбоксифенилацетамидо)-З-цефем-4-карбоксилат калия готовят следующим образом. А. Бензгидрил 7-(2-карбокси-2-фенилацетамидо)-7-метоксицефалосноранат. К раствору 0,5 г бензгидрил 7-амнцо-7-метоксицефалоспораната в 15 мл метиленхлорида добавляют монобензгидрилфенилмалоилхлорцд (его способ получения описан ниже) с последующим добавлением 0.5 мл пиридина. Полученную реакционную смесь перемещивают 30 1мин н добавляют 12 мл воды. Водную смесь неремешивают 5 мин и слои разделяют. Порцию метиленхлорида нромывают 2,5 н. НС1, водой, дважды водным раствором бикарбоната натрия и насыщают хлористым натрием. Затем органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают при температуре до 25°С при понилсенном давлении. Получают 0,695 г бензгидрил 7-(2-карбокси-2-фенилацетамидо) - 7 - метоксицефалоспораната. Последний хроматографируют на 50 г нейтрального силикагеля и алюируют хлороформом. Получают 400 мг продукта в виде рыжевато-коричневой стекловидной массы. Монобензгидрил фенилмалоилхлорид готовят следующим образом. К раствору 19,25 г фенилмалоновой кислоты в 165 мл этилацетата добавляют раствор 25 г дифенилдиазолетана в 100 мл этилацетата в течение не менее 15 мин прн 15-20°С. Раствор перемешивают более 10 мин и добавляют 500 мл воды и достаточное количество 50%-цого раствора гидроокиси натрия при 15°С, чтобы сделать реакционную смесь щелочной. Органический слой отделяют и дважды экстрагируют водным раствором бикарбоната натрия. Объединенные водные растворы дважды нромывают этилацетатом, охлаждают, подкисляют соляной кислотой и экстрагируют еще 3 раза этилацетатом. Этилацетатные вытяжки дважды промывают водой, один раз насыщенным раствором хлористого натрия и затем сущат над сульфатом магния. Растворитель упаривают при температуре не выше 25°С при пониженном давлении до нолучения масла, из которого нри добавлении 200 мл смеси эфир:петролейный эфир 1:3, кристаллизуется 20,9 г монобензгидрила фенилмалоната с т. пл. 119,5- 122°С. К смеси 0,7 г этого моноэфира в 2,5 мл воды добавляют 2,10 мл 0,962 н. NaOH. Раствор неремешивают в течение 3 мин, фильтру5ОТ и сущат при температуре ниже 0°С до получения натриевой соли моноэфира. К полученной соли добавляют 5 мл бензола и смесь обрабатывают при 0°С 1,5 мл хлорангидрида
щавелевой кислоты и выдерживают 10 мин при 0°С и 5 мин при 25°С. Затем смесь упаривают при температуре ниже 25°С при пониженном давлении и остаток дважды концентрируют в четыреххлористом углероде. Продукт в 5 мл четыреххлористого углерода в условиях сухой атмосферы фильтруют и концентрируют, давая монобензгидрилфенилмалоилхлорид.
Б. Дикалий-7- (2-карбокси-2-фенилацетамидо) -7-метоксицефалоспоранат.
0,4 г бензгидрил-7-(2-карбокси-2-фенилацетамидо) -7-метоксидефалоспорант обрабатывают при 0°С в течение 2 мин 1,2 мл анизола и 6 мл трифторуксусной кислоты. Полученный в ре.ззльтате реакции продукт замораживают, отгоняют при низко; температуре и глубоком вакууме, разбавляют анизолом и повторно упаривают :рп 25°С. Остаток, содержащий свободную кислоту, переносят в 20 мл 1 М раствора бикарбоната натрия, промывают 4 раза небольщими количествами метиленхлорида, подкисляют соляной кислотой, насыщают поваренной солью и экстрагируют 4X10 мл этилацетата. Экстракты промывают дважды насыщенным раствором хлористого натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают при пониженном давлении. Получают 218 мг 7-(2-карбокси-7-фенилацетамидо)-7метоксицефалоспорановой кислоты в виде желтого сиропа. Полученную кислоту растворяют в 5 мл воды, содержащей 79 мг бикарбоната калия и сушат при температуре замерзания. Высушенный таким образом остаток растворяют в 5 мл воды, фильтруют, и подвергают лиофильной сушке. Получают 182 мг двукалиевого 7- (2-карбокси-2-фенилацетамидо) -7-метоксицефалоспораната.
В. Дикалий-3-оксиметил-7-метокси-7- (2карбокси-2-фенилацетамидо)-3-цефем-4 - карбоксилат получают по вышеуказанному пункту В, обрабатывая его ацетилэстеразой при рН 6. Таким же образом получают другие соли 3-оксиметил-7-метокси-7-ациламидо-3 - цефем4-карбоновой кислоты.
Пример 5. А. Бензгидрил-3-карбамоилокси-7-а-метоксп-7-(В-5 - амино - 5-карбоксипентанамидо)-3-цефем-4-карбоксилат.
Льдом охлажденная суспензия 0,368 г калиевой соли бензгидрил-З-оксиметил-7-а-метокси-7 - (О-б-трег.бутилокси-карбониламино-бкарбоксилпентанамидо)-5-цефем - 4-карбоксилата в 5 мл сухого ацетонитрила обрабатывают 0,15 мл хлорсульфопилизоцианата. Полученную с iecij перемешивают 30 мин в атмосфере азота и затем упаривают в вакууме почти досуха. Остаток растворяют в смеси этилацетат: 0,1 и. фосфатный буфер 1:1. После установления рН 1,5-2,5 добавлением соляной кислоты, смесь перемешивают в течение 2,5 ч. Водную фазу отделяют, разбавляют этанолом, обрабатывают по каплям пиридином до тех пор, пока не появится осадок. После охлаждения в течсшс почп в холодильнике полученное твердое вещество промывагдт холодным
этанолом и эфиром, и сушат до воздушно-сухого состояния, получая бензгидрил 3-карбамоилокси-7а-метокси-7-(0-5-амино - 5 - карбоксипентанамидо) -З-цефем-4-карбоксилат в виде аморфного порошка.
Б. Мононатриевая соль 3-карбамоилокси-7аметокси-7-(В-5-амино-5 - карбоксипентанамидо) -З-цефем-4-карбоновой кислоты.
Перемешиваемую суспензию 0,256 г бепзгидрил 3-карбамоилокси-7а-метокси-7-(О-5амино-5-карбоксипентанамидо)-3 - цефем - 4карбоксилата в ацетонитриле вносят в раствор при добавлении 5 мл трифторуксусной кислоты и 3 мл анизола. После выдержки при комнатной температуре в течение 10 мип трифторуксусную кислоту и анизол удаляют в вакууме. Остаток растворяют в 50 мл воды и промывают двумя порциями хлороформа. Затем водную фазу разбавляют водой, разбавленной соляной кислотой устанавливают рН 2 и абсорбируют 50 мл смолы Дауэкс 50X2 в водородной форме. Колонку промывают водой и затем элюируют 2%-ным водным раствором пиридина до тех пор, пока рН вытекающего из колонки потока не достигнет 7. Разбавленной гидроокисью натрия рН элюата доводят до 8 и концентрируют его при пониженном давлении для удаления пиридина. Полученный таким образом проду1:т представляет собой мононатриевую соль 3-карбамоилокси-7а-метокси-7-(0-5-амино - 5 -ка-рбоксипентанамидо)З-цефем-4-карбоновой кислоты.
Исходное вещество - бензгидрил-3-оксиметил-7-а-метокси-7-(0-5-амино-5 - карбоксипентанамидо)-3-цефем-4-карбоксилата готовят следующим образом.
К 48 мл ледяного диэтилового эфира добавляют 4,8 мл концентрированной серной кислоты и 48 мл свежеперегнанного бензилового спирта. Эфир удаляют при пониженном давлении и остаток при перемещивании обрабатывают порционно 7,83 г D-a-аминоадипиновой кислоты. После выдерживания реакционной смеси при комнатной температуре в течение 24 ч ее разбавляют 100 мл абсолютного этанола и 20 мл пиридина. При охлаждении выпадает тонкий белый осадок, который промывают этанолом и эфиром и перекристаллизовывают из кипящей воды, содержащей несколько капель пиридина; получают аналитически чистый бензил-0-5-амино-5-карбоксипентаноат.
Перемешиваемую суспензию 3,13 г бензил 0-5-амино-5-карбоксипентаноата и 1,01 г окиси магния в 32 мл воды обрабатывают раствором 3,58 г грег.бутилоксикарбонилазида в 40 мл диоксана. Полученную в результате смесь перемещивают в закрытой колбе в течение 66 ч при 45-46°С. После охлаждения смесь отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме для удаления диоксана. Водный остаток разбавляют 40 мл воды, насыщают хлористым натрием, устанавливают рП 3 с помощью лимонной кислоты и экстрагируют этилацетатом, Объединенные экстракты про13
мывают водой, сушат над безводным сульфатом магния. Упаривание растворителя при пониженном давлении дает бензил-О-б-трет, бутилоксикарбониламино-5 - карбоксипентаноат в виде светлого масла.
1,6 г дициклогексилкарбодиимида добавляют к перемешиваемому раствору 2,70 г бензил-0-5-трет.бутилоксикарбониламино-5 - карбоксипентаноата, 2,32 г 2,2,2-трихлорэтанола и 1,24 г пиридина в 70 мл сухого хлористого метилена. Сразу выпадает тонкий белый осадок. Смесь перемешивают в течение 60 мин при комнатной температуре в атмосфере азота и затем фильтруют для удаления дициклогексилмочевины. Фильтрат промывают 0,1 н. НС1, водой, 2%-ным водным раствором бикарбоната натрия, насыш,ают перенасыщенным раствором поваренной соли и сушат над безводным сульфатом магния. После упаривания растворителя получается смесь дициклогексилмочевины и бледно-желтого масла.
Неочишенный продукт в небольшом объеме бензола вводят в колонку, содержаш,ую 70 г силикагеля. Элюирование бензолом и этилацетат-бензольными смесями дает чистый бензил-В-5 - грет.бутилоксикарбониламино - 5(2,2,2-трихлорэтокси) -карбонилпентаноат в виде светлого масла.
Смесь 1,18 г бензил 0-5-г/ ег.бутилоксикарбониламино - 5 - (2,2,2-трихлорэтокси)карбонилпентаноата и 0,12 г предварительно уравновешенного 10%-ного палладия на угле в 40 мл абсолютного этанола перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре. После абсорбации одного эквивалента водорода смесь фильтруют через суперцел, фильтрат упаривают и получают светлое масло. Неочиш.енный продукт очиш;ают с помошью тонкослойной хроматографии на силикагеле с использованием смеси пиридин-петролейный эфир 1:2 в качестве проявляющего растворителя. Объединенные монокислотные соли из нескольких пластин перемешивают в течение 15 мин с 5%-ным водным раствором бикарбоната натрия и затем фильтруют для удаления силикагеля. Фильтрат подкисляют до рН 2,5 концентрированной соляной кислотой и экстрагируют этилацетатом. Объединенные экстракты сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают при пониженном давлении. Получают В-б-трег.бутилоксикарбониламино-5 - (2,2,2 - трихлорэтокси) - карбонилпентановую кислоту в виде светлого масла.
Раствор 1,14 г D-5-грет.бутилоксикарбониламино - 5 - (2,2,2-трихлорэтокси) - карбонилпентановой кислоты в 100 мл сухого бензола охлаждают в ледяной ванне и перемешивают при 10°С в течение 60 мин в атмосфере азота. Упаривание растворителя и избыточное количество оксалилхлорида дают сырой хлорангидрид в виде бледно-оранжевого масла.
К раствору 0,650 г бензгидрид-7-а-метокси7-аминоцефалоспораната в 15 мл хлористого метилена при 0°С и перемешивании добавля14
ют по каплям в течение приблизительно 30с раствор 0,560 г О-5-г/7ег.бутилоксикарбониламино-5 - (2,2,2-трихлорэтокси) - карбонилпентаноилхлорида в 10 мл сухого хлористого метилена. Спустя 1 мин добавляют 0,11 мл пиридина. Реакционную смесь перемешивают при 0°С 30 мин и затем выливают на измельченный лед. Смесь перемешивают, фазу хлористого метилена отделяют и промывают фосфатным буфером с рН 2 и водой. После сушки над безводным сульфатом натрия хлористый метилен упаривают в вакууме и получают сырой продукт в виде вязкого масла. Это вешество хроматографируют на 40 г силикагеля с
использованием смеси бензол-этилацетат (объемное соотношение 9:1) в качестве элюента, и получают бензгидрил-7-а-метокси-7(О-5-т/9гт.бутилоксикарбониламино - 5) - 2,2,2трихлорэтокси (карбонилпентанамидо)цефалосноранат в виде светлого масла.
Раствор 0,930 г бензгидрил-7-а-метокси-7 D-5 - г/оет.бутилоксикарбониламино-5-(2,2,2трихлорэтокси) - карбонилпентанамидо -цефалоспораната в 5 мл 90%-ного водного раствора уксусной кислоты охлаждают до 0°С и при перемешивании добавляют 0,500 г цинка в виде порошка. Полученную смесь перемешивают в течение 2,5 ч при 0°С. После фильтрации фильтрат упаривают при пониженном давлеНИИ досуха. Остаток растворяют в хлороформе, промывают водой, насьщенным раствором хлористого натрия и сушат над безводным сульфатом натрия. После упаривания растворителя при пониженном давлении получают
бензгидрил-7-а-метокси-7-(О - 5-Туоет.бутилоксикарбониламино - 5-карбоксипентанамидо) цефалоспоранат в виде смолы.
В двухгорлую грушевидную колбу емкостью 10 мл, снабженную магнитной мешалкой и
стеклянным электродом, загружают 0,650 г бензгидрил - 7-а-метокси-7-(Е)-5-трег.бутилоксикарбониламино - 5 - карбоксипентанамидо) цефалоспораната и 1 мл П2О. Смесь перемешивают на масляной бане при 30°С и добавляют раствор 0,5 н. NaOn из автоматической бюретки для поддержания рН6,6. Через несколько часов добавление раствора гидроокиси натрия прекраш;ают и реакцию останавливают.
Раствор охлаждают и обрабатывают 1 г мелкокристаллического хлористого натрия. К полученному раствору приливают 10 мл этилацетата и при перемешивании с помощью 2 н.
НС1 доводят рП раствора до 2. Образуется эмульсия, которую измельчают пропусканием через воронку Бюхнера. Этилацетатный слО отделяют, промывают водой, доливают 5 мл воды и доводят до рП 5,6 с помощью раствора
гидроокиси калия. Водную фазу отделяют, подвергают лиофильной сушке и получают неочищенную калиевую соль бензгидрил-3-оксиметил-7-а - метокси-7-(0-5-грег.бутилоксикарбониламино - 5 - карбоксипентанамидо)-3-цефем-4-карбоксилата. Пример 6. З-Карбамоилоксиметил-7- (2-тиенилацетамидо)-2-цефем-4-карбоновая кислота. Когда повторяют процесс примера 1 при использовании Д соедипения вместо Д соединения, получают 3-карбамоилоксиметпл-7-(2тиенилацетамидо) -2-цефем-4-карбоновую кислоту. Д -соединение готовят изомеризацией эфира З-оксиметил-7- (2-тиенилацетамидо) -3-цефем-4-карбоновой кислоты основанием, таким как пиридин, отделением А -соединения с помощью хроматографии и отщеплением эфирной группы в соответствии с методами, известными в данной области. Точно таким же образом можно получать другие Д -3-оксиметилцефалоспориновые соединения и превращать их в соответствующие Д2-3-карбамоилоксиметильные соединения. Примером таких соединений могут служить: З-карбамоилоксиметил-7 - (2-карбокси - 2-феиилацетамидо) -2-цефем-4-карбоновая кислота, 3-карбамоилоксиметил - 7 - (2-фенилацетамидо)-2-цефем-4-карбоновая кислота и 3-карбамоилоксиметил - 7-(2 - фурилацетамидо)-2-цефем-4-карбоновая кислота. Д -соединения могут быть изомеризоваиы в соответствующие Д -соединения способами, хорошо известными в данной области. Предмет изобретения Способ получения N-незамещенных карбамоилоксиметилиефалоспоринов, отличающийся тем, что соединение общей формулы где RI - атом водорода, замещенная сульфонильная группа такая, как фенилсульфонил, этилсульфонил, бензилсульфонил, 2,5-диметилфенилсульфонил, 4-хлорфенилсульфонил, 4метоксифенилсульфонил, или ацильная группа общей формулы К4КзСНСО-, в которой RS - ато.м во/юрода, галоид, амино-, гуанидиНО-, фосфоно-, ОКСП-, тетразолил-, карбокси-, сульфо-, сульфаминогруппа, R4 - фенил, замещенный фенил, незамещенный или замещепнын моиоцикличсский пяти-, шестичленный гетерил, содержащий один или несколько гстероато:.юв, выбранных из группы, содержащей азот, кислород, серу, незамещенный или замещенный гетерилтио-, фенилтио- или цианогруппу, причем заместителями могут быть: галоид, карбоксиметил, гуаиидино-, гуанидинометил, карбоксамидометил, аминометил, метоксил, метил, нитрогруппа. На - атом водорода, метоксил; или соответствующее Д -соединение, или его соль или его сложный эфир, подвергают взаимодействию с галоидсульфонилизоцианатом, таким как с бромсульфонилизоциапатом или хлорсульфонилизоцианатом, с последующим гидролизом полученного при этом продукта и выделением продуктов или отщеплением защитных групп, если они имеются, известными приемами. Приоритет по признакам: 27.01.71 при Кг - атом водорода, Rs - атом водорода, R4 - замещенный феиил, незамещенный или замещенный моноциклический пяти-, шестичленный гетерил, содержащий один или несколько гетероатомов, выбранных из группы, содержащей азот, кислород, серу, незамещенный или замещенный гетерилтиоостаток, замещенный фенил, причем заместителями могут быть метил, метоксил, гуанидинометил;24.08.71 при R2 - метоксил, Rs - галоид, амиио-, гуанидино-, фосфоно-, тетразолил, карбокси-, сульфо-, сульфаминогруппа, R4-фенил, замещенный фенил, фенилтио, цианогруппа, замещенный пяти-, щестичленный гетерил, содержащий один или несколько гетероатомов, выбранных из группы, содержащей азот, кислород, серу, причем заместителями могут быть галоид, карбоксиметил, гуанидино-, карбоксамидометил, аминометил, нитрогруппа;29.11.71 но признаку Д - соединения, на основании полного описания, имеющего № 3295/71.
