Способ получения лимфоцитозстимулирующего вещества Советский патент 1975 года по МПК A61K17/00 

1

Изобретение относится к производству лекарственных препаратов.

Известен способ получения лимфоцитозстимулирующего вещества путем гомогенизации тимуса, ультрадбНтрифугИ(роваН|Ия, добавления ацетона, гельхраматографин, лиофилизации. Однако указанный способ имеет сложную технологию производства и не обеспечивает высокого качества целевого продукта.

Для упрощения технологии и повышения качества продукта по предлагаемому способу гомогенат диализуют с последующей хроматографией диализата на анионите, например, Дауэксе 1X1 в летучем буфере, например амм,иачно-ацетатнО:М, в интервале рН 10 - 3.

Пример. Иавеску тимуса тщательно измельчают с помощью электрической мясорубки ,и заливают тремя объемами 0,15М. NaCl. Гомогенат помещают в целлофановые трубки, применяемые в мясомолочной промыщленности, и укладывают в стеклянную или эмалированную металлическую посуду. При этом объем гомогената лимитируется только налич,ием целлофановых трубок и объемом посуды. Концы целлофановых трубок зажимают любым зажимом или завязывают. Пространство между трубками заливают 1,5 объемами

(но отнощению к. тимусу) 0,3 М NaCl. Диализ при 4°С длится 1-2 суток. При этом лимфоцитозстимулирующее вещество тимуса переходит в раствор.

Из 0,3 М раствора NaCl осаждают лимфоцитозстимулирующий фактор 10-кратным объемом охлажденного ацетона. Осадок, содержащий лимфоцитозстимулирующий фактор, собирают на бумажном фильтре. Для более полной очистки диализат (0,3 М раствор NaCl), в которо м содержится лимфоцитозстимулирующий фактор, разводят 0,05 М аммиачно-ацетатным буфером рН 9 (1:1) и сорбируют анионитом Дауэкс 1X1 в ацетатной форме (двойной объем диализата по отнощению к набухщему Дауэкс в ацетатной форме, уравйовещенному 0,1 М аммиачно-ацетатным буфером). Сорбция длится 6-12 час. После сорбции жидкость отсасывают на воронке. Промывают Дауэкс буфером рН 9 (трехкратным объемом), после чего Дауэкс заливают тем же буфером при рН 3 (объем элюирующего буфера 1 : 1 по отнощению к. набухщему Дауэкс 1X1) и элюируют 6-12 час при помещивании. Элюат отсасывают на воронке, лиофилизируют и промывают ацетоном. С помощью электрофореза в полиакриламидно.м 3 гел-е выявляется одна основ1ная и две слабовыраженные фракции. Лимфоцитозстимулирующая активность дрепарата выражается в увеличении абсолютного количества лимфоцитов в периферической5 крови и ув-еличенЕИ селезенки. В культуре клеток селезеаии под влиянием препарата происходит интенсивное бластообразование. Препарат также усиливает иммунологичеокую реактивность лимфодитов, что выражается вю усилении реакции бластообразования в смешанной культуре клеток селезений. 4 Предмет изобретения Способ получения лимфоцитозстимулярующето .вещества путем гомогенизации тимуса, осаждения, очистки, лиофилизации, о тли ч ающййся тем, что, с целью упрощения технологии и повышения качества целевого продукта, гомогенат диалйзуют с последующей хро матографией диализата на а нио-ните, например Дауэксе 1X1 в летучем буфере, например аммиачйо-ацетатном, в интервале рН .