Изобретение относится к медицинеt а именно к способам определения активности холинацетилтрансферазы (ХАТ).
Цель изобретения - повышение чувствительности и упрощение способа путем замены экстракции на хромато- графическое выделение С-ацетил- холина 14С-АХЗ, позволяющее более полно выделить продукт реакции.
Пример. Цельное сердце крысы гомогенизируют в среде, содержащей 200 мМ NaCl, 40 мМ натрий-фосфатного буфера (рН 7,4), 10 мМ MgClt, 0,2мМ эзерин-салицилата и 0,5% Тритона Х-100, в соотношении 1:19 (м/v). Го- могенат инкубируют в среде, содержащей 280 мМ NaCl, 24 мМ натрий-фосфатный буфер (рН 7,4), 6 мМ MgClit мМ ээерин-салицилата, 10 мМ хо- лин-хлорида, 0,2-0,25 мМ НС-АсКоА
(5 Ки/моль), 0,5 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и 0,3% Тритона Х-100. Контрольные образцы, кроме того содержат 2 (К И Br-АХ. Объем исследуемого гомогената 30 мкл, финальный объем инкубируемой смеси 50 мкл. Гомогенаты проб инкубируют в течение 30 мин при 37°С.
Остановку ферментной реакции осуществляют добавлением 50 мкл 2 М уксусной кислоты.
Далее пробы наносят на микроколонки с 500 мкл Дауэкса 1x4 100-200 меш в ацетатной форме и элюируют 700 мкл дистиллированной воды непосредственно в сцинтилляционный флакон с диоксано- вым сцинтиллятором, содержащем на 1 л раствора: 4 г НПО, 0,2 г ПОТОП и 100 г нафталина. Количество радиоактивности измеряют на сцинтилляционном счетчике.
сп
СП
Сп
0
41
Активность обусловленной ХАТ оценивают по разнице радиоактивности
f 4 между суммарным синтезом С-АХ
(5677,6 расп./мин) и Br-АХ чувстви- тельным синтезом С-АХ (3665,8 расп /мин) и она равна 2011,8 расп./мин (1,829хЮ в моль; 1,016x1 О 15моль/с и 6х10 кат/г ткани).
Формула изобретения
Способ определения активности хо- линацетилтрансферазы в ткани сердца
путем гомогенизации, добавления холи- на и 14с -ацетилкоэнэима А, инкубирования, остановки реакции, выделения продукта реакции, подсчета радиоактивности, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, радиоактивный продукт реакции выделяют на микроколонке с Дауэксом I в ацетатной форме, элюирование проводят дистиллированной водой непосредственно в сцин- тилляционную жидкость при соотношении объемов Дауэкс:вода 1:0,6 - 1:5.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ определения активности простагландин-синтетазы в тромбоцитах | 1988 |
|
SU1506358A1 |
| Способ количественного определения радиоактивных метаболитов стероидов | 1983 |
|
SU1315903A1 |
| СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ГЕНОВ КАТАБОЛИЗМА ГЕРБИЦИДА 2,4-Д В ГЕНОМАХ ЭУКАРИОТ | 1997 |
|
RU2125263C1 |
| Способ определения бензодиазепинов в сыворотке крови и среда инкубации для его осуществления | 1988 |
|
SU1737338A1 |
| Способ радиометрического определения содержания фосфорибозилпирофосфата в биологических тканях | 1991 |
|
SU1802335A1 |
| Способ извлечения белковых веществ из растворов | 1975 |
|
SU533631A1 |
| Способ получения модифицирующих метилаз SSo @ И SSo @ | 1987 |
|
SU1437394A1 |
| Способ получения @ -глобулина,ассоциированного с болезнью Крона | 1985 |
|
SU1318915A1 |
| Способ отделения полирибосомных информосом от свободных | 1986 |
|
SU1412305A1 |
| Способ получения функционально активных мембранных рецепторных белков | 1990 |
|
SU1723126A1 |
Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения активности холинацетилтрансферазы (ХАТ). Цель - повышение чувствительности и упощение способа. Сущность способа состоит в том, что при радиохимическом определении холинацетилтрансферазы образовавшийся ацетилхолин выделяют на микроколонках с Дауэксом 1 в ацетатной форме, элюируют дистиллированной водой непосредственно в сцинтилляционный флакон при соотношении объемов Дауэкс: вода = 1:1,2 - 1:5.
| J.Physiol., 1982, v | |||
| Ледорезный аппарат | 1921 |
|
SU322A1 |
