(54) еПСЮОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОФСХ:ФАТА НУКЛЕОЗИДА
(1) I звключаю1аи ся|в том, что 8нгалоид 3;5 -циклоадейозинмонофосфат переводят в 2-0 -СГ-8-галовд-Зу5. jB пвхдомонофоофат ( Шепляемая айиштная группа), который обра 5атывают раогвором, / |доДёр: щим yxcyctyto киспоту и «цвтат натрия дпя получения ) -СДГ-б- N -ацетил вгОксиаденозин 3 5 гадос Ж)мокофосфата, на последний действуют ме- танольным аммиаком с образованием 2-О-(Т-8-оксиаденозин-355 ;Цикломонофосфата и 8-2-ангидро 8-окси-9-- уЗ -Д- арабинофураноэипйденин 3 .цикломонофосфата, полученное ангидросоединение обрабать :вают жидким сероводородом для обрааова;ния В-меркапто-Э--- fl -Д-арабинофураноэил« аденин-3|5уцикломонофосфата, который Bod станавпшзают до -Д-арабинофуранозил ; аденин 3 5 цикломонофосфйта, NHg JL Отшепляемая группа может представлять собой такой остаток, как тозил, мезил, ани зил, брочзил, низил или триизопропилёензол;;, сульфонил, предпочтительно тозил. Раствор уксусной кислоты и ацетата натрия может включать уксусный ангидрид, а 2 «-О-СГ-6- N -ацетил-В-оксиаденозин;-3 54-цикломс)Нофосфат целесообразно обра батывать затем метанольным раствором аммиака для получения ангидропроизводнога, k. . 8 МеЕК-аптоп1х изводное превращают в 19- ;8-Д-арабиной аноаиладенин-З.З-пикло Шовофосфат восстановлением в присутствии никеля Ренея в качестве катализатора. Процесс гфотекает по схеме: МНл Сйачалй Хромированием 3, &-Еикпоадено- зинм ЭйЬфосфата (11, который является пр{фодным соединением, получают -в-бром- 4гЗ р-циклоаденозии;моно осфат( 111 ). Зате м ;л. соединение Ш обычно тоэилируют Д пй5У5вют. 2-CVro3H№-8-бромадёнозив-3,5-цикломонофосфат ( IV ). Если в п6ло-« жении 2 присоединяется другая группа (СУ),5 т.е. не тозил, то образуется соединение 2-U« ЗГ 8-бромаденозин-3, 5 -дикломонофосфаТц ПосШ этого соединение. IV обрабатыв ют раствором уксусного ангвдрида, ацетата натрия и уксусной кислоты. Далее на образовавшийся 2-О тозил-.6- М -ацетил-8 ОКсиаденозин-З.б-дикломонйфосфат .(-V ) действуют метанольным аммиаком ГСпиртовым раствором аммиака) (в несколько прй«« емов) и получают 3-СМгозил-8-оксиаденозин- ,-ЗJ5-циклoмoнc)фocфaт (VI ) и РО-8-ОКСИ-9- -Д-арабинофуранозиладенин 3,5-цикломонофосфат {УИ ). Соединение Vl можно получить обработкой продукта IV ацетатом натрия, уксусной кислотой, а ангид ропроизводное VII - из соединения VI , действуя на него натрием и Ц Ц «, -диметилформамидом (ДМФА), Заеем а гидропроизводное VI обрабатывают зййдким сероводородом для образования 8-ме{жапто -9- -Д-арабинофуранозиладенй 3,5 цшсломонофосфата (Till ). Последний конверсируют предпочтительно восстановлэнием в присутствии никеля Ренея в качестве катализатора и получают целевой 9- Л -Д-арабинофуранозиладенин-З 5 цикломоно; фосфат ( I), Соединение УП1 можно пере вести в вещество 1 также путем обработки п- олуолсугазфонилхлоридом в пиридине или ОЕнспением N -бромсукцийимидом или йодом,,, Приведенные в схеме соединения можно представить обшей формулой где X - водород, гидроксил, сульфоксил, га ;лоид или ангидро (анпщрид); f - водород или ацил С - С 1 R - водород или гидроксил; водород или ОС-Ваточная группа, например тозил, мезил, аниаип, брозил, низил или триизопропилбензопч сульфонил} У - водород, щелочной металл или аммоний, В случае, когда R.-OH, R и R обозначают И, а Х-Н или 8 H R обоон ,чает ацял 1ишь в случав, когда Х-ОН, остаточная группа; X представляет собой галоид если R и R обозначают водород, а остаточную : В- можно группу. Заместители X, варьировать. Пример. Получение 2--О-вчЗзил -8-бромаденозин 3 г6 -цик ломонс Ьосфвта натрия ( 1У ).f ... 40,9 г (15)0 ммоль) соедине.ния 111 растворяют в 250 мл 1 н. едкого натра и is перемешиваемый раствор вЛивают в тече |ние 15 мин раствор 76,26 г {4ОО i ммоль) толуолсульфохлоряда в 60О мл|ди л, : океана. Реакционный раствор перемешиЕЙго |4 час при комнатной температуре ecbj выливают а 5 л ледяной воды при енергич;ном перемешиззаннй. Выпавший осадок от,фйльтроаывают, промывают 2 л ледяной 1воды и сушат путем отсасывания. Высу шешп 1Й осадок суспендируют в 8ОО мл хлщроформа, энергично перемешивают, |фильтруют и промывают избытком 3 л хлси1роформа. Белый порснлок сушат в вакуум.эксикаторе над пятиокнсью фосфора до , ;утра и получают 55,ef 94%) соединенияГУ в виде хроматографически однфоднсАп I материала, : в ИК спектре обнаружена сильная полоlea поглощения при 1179 см (арилсуль, фанил). В ПМР-спектре-«номбрный протон (определение в Д„р} с центоом при. .. , ввдёЬнш-лета.Прн электрофорезе ра бумаге в фосфатном бу4)ере (рН 7,2) цикло-АМП движется как однозарааное пятна УФ-спектр: 266 нм ( 150©О|; - -„,. - -264 нм (е 17700)|.Р -%акс ( 15200) П р и м е р 2, Получение 8-2-аюпзд ро-8-окси-9- Q гД-арабинофуранозйладе- , ,5-цикломонофосфата ( VII ), 32,8 г ацетата натряя растворягот в 9ОО мл уксусной кислоты, затем приливают бОййуксусного ангидрида и 24 г (4О ммоль) соединения IV, . Раствор поддерживают при температуре кипения с обратным холодильником при отсутствии влаги в течение 3,75 час (температура бани 125°G), повле чего реакционную смесь охлаждают и упаривают досуха в ва сууме. Рстатрк 6ёра6аты ют метанолом, этано-1 лом и диоксаном, затем упаривают для удаления последних остатков уксусной кио( лоты и суспендируют а смеси 600 мл йетанола и 4ОО мл этанола. ТЬердые куск суспензии измельчают и выпавший осадок фильтруют (для промывки берут-2ОО мл ме Танола). Вьюушеиный продукт ( V ) дает Однс одное пятно при хроматографировании В нескольких системах. Выход 22,61 г. .РН 11 . УФ- :пектр: РН 1 290 нм; макс 27а,б ЗО9,5. б) 2 «Ю-тозил-8-оксйаденозин-3,5-аикн Ьомоно осфат аммония { Yi ), 2,168 г (4 ммоль) полученного на т Ьледней стадии соединения ( У ) растворяjoT в 6 О мл метанольного аммиака и piacTвор вьщержйвают 00 час при комнатной температуре, после чего упаривают досуха в вакууме. Остаток суспендируют и растирают с- 4О мл этанола и оставляют до утра в холодильнике. Затем отфильтровывают выпавший осадок, промь1вают 20О мл этанола и сушат, получая 1в7 г соединения VI , Фильтрат и пром; шную хсидкость упарийают в вакууме, а остаток перёкристаллизовывают из метанола (этанола) и получают еще О, Об 5 г соединения VI . Общий выход 1,765 г (85,3%). УФ-спектр: Я 265 и 288 нм; макс f 282 ... макс в) в-2-Ангвдр - 8 окри-9- jB -Д арабинофуранозпладенин- 3,5-циклофосфат ( УИ ) Метод i, 1,551 г (3 ммоль) соединени VI растворяют в 50 мл метанольного рас вора аммиака и раствор выдерживают 6 час при в баллоне. Продукты реакции ад- порб1фуют в колонке с кремнеземом (fAan линкродт - 1ОО меш.; размеры колонки 2,7 см X 70 см), елюиру;суг xлqpoфopMoм 4ОО мл), а затем смесью метанол - хлоро форм в объемном соотношении 1 ; 1. Продук УН проявляется по второму главному пику. Соответствующие фракции собирают и упаривают. Остаток растворяют в 4О мл метано .ш, охлаждают и получают кристаллическую аммонийную соль соединения УЛ . Огфильт ровывают Oj44 г образовавшейся соли,фильтрат подкисляют 2 н. соляной кислотой до рН 2 и получают 0,16 г продукта VII в виде свободной кислоты. Общий выход 0,60 г или 59,, Н 3,13; Найдено, %: С 36,85; ,22. Вычислено, %: С 36,7Ij Н 3,08; N 21,40. В ИК- спектре ч тсутствует ; полоса полощения, соответствуюшая арилсульфонильой группе при 1179 сыг, В ПМР-спект е (определение в ДМСО/ НаОД) - аномерый протон в виде дублета с центром при (§ 6,5, что указаывает на арабинозную онфигурацию с 2 ангидро-связью, и 2протон с триплетом, расположенным при б 5,95. УФ-спектр:J 259 и 286 (плечо) нм; . макс . 257 нм. Метод 2. 17,12 г (33,1 ммоль) соедиения У1 растворяют В: 2ОО мл метаояьного раствора аммиака в баллоне из нежавеющей стали и нагревают 9 час при 5Ъ. Содержимое охлаждают и упариват в вакууме досуха. Остатсж растворяют 8О мл воды и фильтруют. Фильтрат смеивают с 8О мл этанола, подкисляют 2 н. соляной кислотой (рН 2) и оставляют до тра в холодильнике. Затем фильтруют, промывают смесью метанол-этанол (50%; 2x25 мл) и сушат. Получают 5,О9 г {47,01%) соединения VII , идентичного соединению, полученному по Методу 1. П р и м е р 3. Получение 8-меркапто- -9- -Дг-арабинофуранозиладенин-3,5f-цИкломонофосфата (соединение V11I ). Метод 1. Приготовляют суспензию 1,ЗОг (4 ммоль) соединения VII в 15 мл диметилформамида и 25 мл пиридина и затем вносят в нее 4О мл жидкого, сероводорода (готовят в баллоне). Содержимое выдержи вают 16 час при 1ОО С (температура бани), охлаждают и упаривают в вакууме досуха. Остаток адсорбируют в колонке и кремниевой кислотой (Маллинкродт - 1ОО меш.; размеры колонки 5 х 4О см), затем элк ируют 950 мл хлороформа и смесью хлороформ метанол в объемном соотношении 1:1. В УФ-области Шч еются два главных пика абсорбции. Фракции, соответствующие первому пику собирают и упаривают. Полу-. . чают О,9 г белого порошка (вещество УИ1 ), а при трехкратной перекристаллизации из смеси метанол этанол - 0,835 г (57,7%) вещества. Чарть вещества растворяют в воде и раствор подкисляют до рН 2. Полученную кристаллическую свободную кислюту (Fin) сушат 4 час при 80 С в -вакууме.
9
Найдвно,%: С 3.1,44; И 3,48; N 18,34
о 12 5 - 2 Е-5ычислено, %: С 31,6О; Н 3,72; N 18,46.
рН 1
- 244 нм
УФ-спектр: макс
{ 1О620) и ЗО8нм { 2617О);
рН 11 294 нм (23970). макс
ПМР-спектр (в RyO} обнаруживает аномерный протон в виде дублета „ с цент ром при О 87,0,
Метод 2, В баллоне из нержавеющей стали готовят суспензию 7,7 г {23,3 ммоль) соединения VII в НО мл диметилформамида, затем приливают -. 55 мл жидкого сероводорода. Содержимое реактора выдерживают 20 час при , охлаждают, выпавший осадок отфильтровывают при . помощи 10О мл этанола, промывают 10О мл эфира, сушат при отсасывании и получают 5,39 г почти чистого продукта VII в виде белого порошка. Это вещество растворяют в 30 мл воды и фильтруют. К фильтрату добавляют 30 мл этанола, затем подкисляют ЗО мл 2 н. соляной кислоты (рН 2), выпавший осадок вещества выдерживают 1 час при комнатной температуре и отфильтровывают. Осадок промывают 5 мл водного этанола (5О%), после чего сушат 4 час при 6О°С и О,1 мм рт. ст. Получают 3,85 г хроматографически однородного вещества VIll . Фильтрат при дальнейшем подкислении дает еше 0.2О г этого вещества.
Смешивают первоначальный фильтрат реакционной смеси и промывную жидкость, упаривают и аде орбируют в колонке с сухой кремниевой кислотой {размеры колонки 4,5x18 см). Затем элюируют 150 мл 5О%-ного метанольного хлороформа и 1О%-ным метанольным аммиаком (собирают 4ч акции по 10 мл). Далее собирают (}чэакцию, соответствующую чистому соединению Vin и упаривают. Остаток раст воряют в метаноле при помощи 2 н. едкого аммония и осаждают подкислением, получая 1,3 г чистого вещества VIII . Общий выход 5,15 г или 61,2%.
Пример 4. Получение 9- А -Д-арабинофуранозиладеиин-3, 5 -циклофосфата {вешество I).
3,О4 г {S ммоль) соединения Шраст« воряют в 25О мл метанола, содержащего 1О мл 2 н. едкого аммония. В получен;ный раствор вносят 36 г никеля Ренея и смесь выдерживают 18 час при температуре кипения {с обр тным холодильнике)
1C
(температура бани ). . к 11a.iiH...y)тор отфильтровывают слой цептл, промывакл- 1ОО мл метанола, содержащим 1О мл 2 н, едкого аммония. Фильтрат вместе с гфомывной жидкостью упаривак/г досуха, а остаток растворяют в ЗО ктл ме танола и нескольких каплях 2 и. едкого аммония. Раствор отфильтровывают л подкисляют. Выпадает 2.,05 г свободной кисло ты ( вещество 1). Фильтрат упаривают и получают еще 0,24 г, Обший выход 2,24 г или 31%. Остаток перекристаллизовывают путем растворения в воде и подкисления, после чего сушат 4 час при 8О С и 1 мм рт. ст.
Найдено, %: С 36,20; Н 3,52; N 21,27.
So l2 eV/Вычислено, %: С 36,48; Н 3,67;
N 21,09. и 01 па
.,рН
256 нм УФ-абсорбция:
макс.
( 6 15200); Я Р 5в ( 15400).
макс
Предмет изобретения
1.Способ получения монофосфата нуклеозида, отличающийся тем, что
8-галоид-3,5-циклоаденозинмонофосфат переводят в 2-О-ОГ-8-галоид-3,3-цикломонофосфат {СГ-отщепляемая чзащитная группа), который обрабатывают раствором, содержащим уксусную кислоту и ацетат натрия,
для получения 2-O-Or-6-N -ацетил-8- -оксиаденозин-3,5-цикломонофосфата, на последний действуют метанольным аммиаком с образованием 2-О-ОГ-8-Ьксиаденс зин-3,5-ц5жломонофосфата и 8-2-агегндр
-в-окси-9- J9 -Д-арабинофуранозИладенин-3,5-цикломонофосфата, полученное ангидросоединение обрабатывают Лндким сероводородом для образования 8-мерчапто-9- -Д-арабинофуранозиладенин-3, 5 -ник ломонофосфата, который восстанавливают до 9- jQ -Д-арабинозиладенин-3, 5 -цнк ломонофосфата.
2.Способ по п. 1, о т л и ч а ж: шн йс я тем, что отшепляемая группа может
представлять собой такой остаток, как то зил, мезил,Занизил, брозил, низил или иоопропилбензолйульфонил, предпочтительно тозил.
3.Способ по п, 1, о т л и ч а ю ш к йся тем, что раствор уксусной кислоты и
ацетата натрия включает уксусный ангидрид, а 2 -О-ЮГ««6-Н -«цетил 8-сжсипденоз п -.,,5 чцикломонофосфат обрабатывают затем метанольным раствором aMNinoKa для
;Лолучения ангидропроизвопного.
1112
4. Способ no и, 1, о т л и ч а ю щ и й-г-3,5«-цикломонофосфат восстановлением
с я тем, что 8 «меркаптопроиэводное присутствии никеля Ренея в качестве каращают в 9« j9 -Д-арабиноф.-ранозиладени тализатора.
470114
