Способ совместного получения протамин-сульфата и дезоксирибонуклеиновой кислоты Советский патент 1975 года по МПК C07K1/14 C07H21/04 C07K14/435 C07J21/00 

1

Изобретение относится к области медицины.

Известен способ получения протаминсульфата из молок лососевых рыб, заключающийся в том, что молоки варят, измельчают, обрабатывают ацетоном, экстрагируют серной кислотой и водой, экстракты объединяют, нагревают до 80°С и очищают путем добавления активированного угля, затем раствор обессоливают при помощи ионообменных смол и ацетоном осаждают целевой продукт из элюата.

Известен также способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты, заключающийся п том, что молоки измельчают в присутствин этанола, удаляют спирт, к остатку прибавляют холодную воду и кристаллический хлористый натрий, массу нагревают до 75-80°С, отфильтровывают осадок и выделяют целевой продукт из фильтрата осаждением этанолом.

Предлагаемый способ позволяет одновременно получить протаминсульфат и дезоксирибонуклеиновую кислоту. Это достигается тем, что измельченные молоки, например, лососевых рыб экстрагируют раствором хлор стого натрия и выделяют дезоксирибонуклеиновую кислоту из экстракта известными приемами, а отработанные молоки экстрагируют серной кислотой и выделяют протампнсульфат известными приемами.

Пример. Отделение РНК- 1 кг свежемороженных молок кеты с содержанием в них протаминсульфата 7,5% и ДНК 21% измельчают в мясорубке, загружают в экстрактор с

мешалкой, заливают 3 л 0,15 ЛГ раствора хлористого натрия и тщательно перемещивают в течение 10 мин при О-10°С.

Извлечение. Сливают декантацией и промывку проводят еще дважды. Гомогенат пропускают через проточную центрифугу и отделяют РНК.

Получение ДНК. После отделения РНК остаток переносят в экстрактор, заливают 5 л 2М раствора хлористого натрия и перемешивают в течение 30 мин при той же температуре. К раствору добавляют равный объем этанола (1:1) и центрифугируют. Осадок, содержапий ДНК, для очистки смещивают в соотношении 1 : 1 со смесью хлороформ-изоамиловы ; спирт (24: 1) и неремещивают в течение 15 мин при О-10С. Очистку ДНК проводят трижды. Смесь центрифугируют. Водную фазу обрабатывают этанолом в соотнощении 1:1 и осаждают Д1П. Для удаления хлористого натрия ДНК трижды (по 500 мл) промывают 70%-нь1м раствором этанола, затем 500 мл 95%-ного этанола. Сущку ДНК ведут с ;есью спирт-эфир (1:1). ДНК осторох но переносят иа эмалированный противень и су.

Ц:ат в сущильном щкафу при ЯО°С.

Выход целевого прод)кта от исходного сырого сырья составляет 11,3%.

Получение протаминсульфата. Остаток после отделения ДНК центрифугированием обрабатывают 5%-ным pacTBOpOiM серной кислоты в соотношении 1 : 5 (вес : объем) и цри медленном перемешивании оставляют на 30 мин. Затем раствор подают в центрифугу для отделения кислых белков. Полученный раствор переносят на друк-фильтр и протаминсульфат осаждают ацетоном в соотношении 1 : 3. Осадок сырца протаминсульфата очищают многократным растворением в горячей воде, подщелоченной 25%-ным раствором аммиака до рН 8-9, и центрифугированием при 100 об/мин.

Очищенный раствор протаминсульфата смещивают с ацетоном в соотношении 1 : 2 и препарат отделяют на друк-фильтре. Протаминсульфат сушат в сушильном шкафу при 30- 4b°C.

Выход протаминсульфата от исходного сырья составляет 4,6%.

Предмет изобретения

Способ совместного получения протаминсульфата и дезоксирибонуклеиновой кислоты, отличающийся тем, что измельченные молоки, например, лососевых рыб экстрагируют раствором хлористого натрия и выделяют дезоксирибонуклеиновую кислоту из экстракта известными приемами, а отработанные молоки экстрагируют серной кислотой и выделяют протаминсульфат известными приемами.