Способ получения полипетидов, содержащих аспарагил-глициновую последовательность Советский патент 1976 года по МПК C07K14/695 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДОВ, СОДЕРЖАЩИХ АСПАРАГИЛГЛИЦИНОВУЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ

тем следующие сокращения: DCC-дициклогексилкарбодиимид, PFPOH - пеитафторфенол, РСРОН-пентахлорфенол, DCHA - дициклогексиламик.

Определение температур плавления inpoBoдилось с помощью прибора доктора Tottoli Buchi.

Тонкослойная хроматография проводилась на силикагеле на стали при использовании следующих систем растворителей.

1.Этнлацетат-{пиридин-уксусная кислота-вода 20 : 6 : 1) 95,5;

2.Этилацетат-(пиридин-уксусная кислота-вода 20 : 6 : М) 9,1;

3.Этилацетат-(пиридин-уксусная «ислота-вода 20:6: 11)4: 1;

4.Этилацетат-(пиридин-уксусная кислота-вода 20 : б : 11) 3 : 2;

5.Этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода 240 : 20 : 6 : 11;

6.Этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода |120 : 20 : 6 : 11;

7.Этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода :60 : 20 : 6 : 11;

3. Этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода 30:20:6: 11;

9.Этилацетат-пиридин-уксусная «ислота-вода 480:20:6: 11;

10.Хлороформ-гексан-уксусная кислота 8:1:1;

И. Хлороформ-метанол 98 : 2;

12.Хлороформ-метанол 95 : 5;

13.Хлороформ-метанол 9 : 1;

14.Хлороформ-метанол 85 : 5;

15.н-Бутанол-пиридин-уксусная кислота-вод а 30 : 20 : 6 : 24;

16.ХлорофорМ-метанол-уксусная кислота 8:1:1.

Для проявления применяется нннгидрин и (или) хлор-ртолидин.

Пример 1. Синтез человеческогоACTHi 3i.

Ступень 1. L-Arg(NO2)-Arg(NO2)Pгo- OPFP(L-17-19-OPFP).

3,26 г (5 ммоль) L-Arg(NO2)-Arg(NO2)- Pro-OK растворяют в 30 .мл днметнлформамида и ,к раствору добавляют 5,3i г (7 ммоль) DCC-РРРОН-комплекса. Реакционную смесь 5 час перемешивают при комиатной температуре, затем отфильтровывают выпав.ший в осадок DCC и фильтрат упаривают до сухого остатка. Маслянистый остаток обрабатывают эфиром, отфильтровывают и промывают зфиром. Сырой продукт растворяют в И мл тетра-гидрофурана и высаживают с помощью 60 ;мл эфира. Выход 3,42 г (83,6%) L-17-19-OPFP; R) 0,55.

CsiHseOioNiiFg (817,9).

Вычислено, %: С 45,5; Н 4,4; N ,18,8; F 11,6.

Найдено, %: С 46,0; Н 4,7; N 18,7; F 11,8.

Ступень 2. L-Arg(NO2)-Arg(N02)- ; .,.-Val-Lys (ВОС) -Val-Туг- (trBu) Pro- OH(L-17-24-OH).

2,22 .Г (2,92 Ммоль) H-Val-Lys (ВОС) - Val-Туг-(trBu)-Pro-OH суспендируют в

25 мл диметилформамида и при перемешивании добавляют 1,64 г (3,22 ммоль) L-17- 19-OPFP.

Через 2,5 час получают прозрачный раствор, который перемешивают еще 2,5 час и затем упаривают до сухого остат1ка. Остаток суспендируют в тетрагидрофуране, отфильтровывают и промывают тетрагидрофураном. Сырой продужт растворяют в 15 мл ;метанола и высаживают с помощью ;100 мл этилацетата. Осадок отфильтровывают и сушат. Выход 3,55 г (87,2%) L-17-24-ОН; Щ0,7.

CsAHggOisN (1394,61).

Вычислено, %: С 55,1; Н 7,2; N 17,1.

Найдено, %: С 55,0; Н 7,0; N 17,2.

С т V пень 3. Н-Arg-Arg-Pro-Val- Lys(BOC)-Val-Туг (trBu)-Pro - OH-3HC1 (H-17-24-OH-3HC1).

0,4 т (0,29 эдмоль) L-17-24-ОН растворяют в 8 мл уксусной (КИСЛОТЫ и гидрируют в присутствии о , 1 г Pd/C. Нрохождение реакции

контролируют € ПОМОЩЬЮ ТОН1КОСЛОЙ;НОЙ ХрОматографии. По окончании реакции отфильтровывают катализатор и фильтрат выпаривают до сухого остатка. Маслянистый остато-к растворяют в 3 .мл метанола и ори охлаждении доводят рН до 4 с помощью НС1. Затем раствор упаривают до сухого остатка, остаток суспендируют в этилацетате и отфильтровывают. Получают 0,26 г (70,,2%) Н-17- 24-ОН-ЗНС1; Щ0,1.

Ступень 4. L-Lys (ВОС)-Arg-Arg- Pro-Val - Lvs (ВОС) - Val - Туг (trBu) - Pro-OH 2HC1 (L-16-24-OH 2HC1).

0,65 г (0,49 Ммоль) Н-17-24-OH-3HCi суспендируют в 7 мл диметилформамида и .добавляют 0,07 -мл триэтиламина и 0,3 г (0,6 ммоль) L-Lys(BOC). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 час и затем упаривают до с хо1го остатка. Остаток суспендируют в этилацетате, отфильтровывают и промывают небольшим количеством воды.

Выход 0,6 а- (76,3%) L-16-24-ОН-2НС1; R) 0,45.

Ступень 5. L-Lys(BOC)-Lys-(BOC) - Arg-Arg-Pro-Val - Lys(BOC) - Val - Tyr(trBu)-Pro-OH-2HC1 (L-15-24 - OH.2HC1).

0,5 г (0,3 ММОЛЬ) L-16-24-OH-2HC1 pacтзоряют в 20 мл метанола и гидрируют в присутствии Pd/C. По окончании реакции катализатор отфильтровывают и фильтрат упаривают до сухого остатка. Остаток обрабатывают этил ацетатом, сушат в вакууме. Выход 0,42 г (97,3%) Н-16-24-OH-2HCl;-I j 0,15

0,33 г (0,23 м;моль) этого продукта суопендирлют 3 3 ;мл диметилфор.мамида и смешивают с 0,14 г (0,25 ммоль) L-Lys (ВОС) - OPFP. После 10-минутного перемешивания получают прозрачный раствор, который перемешивают еще 3 час и затем упаривают до сухого остатка. Остаток растирают с этилаце