1
Изобретение относится к микробиолотии н может быть использовано для извлечения ценных биологически активных веществ с преимущественной внутриклеточной локализацией, для обработки белково-витаминных кон центратов, для борьбы с некоторыми патогенными микроорганизмами и для 1юлучения чистых антигенов микроорганизмов кишечной группы.
Известна питательная среда для культивирования продуцентов литических ферментов, например Actindmyc9S rectfertsis содержащая соевую муку, глюкозу, двузамешенный фосфорнокислый калий и воду.
Для получения более активных ферментов предлагаемая питательная среда дополнительно содержит азотнокислый аммоний, хлористый кальций, хлористый магний, сернокислый цинк и сернокислое железо, при этом указанные компоненты содержатся в следу- юших количествах, %:
Соевая мука0,3-0,7
Глюкоза0,5-0,6
Азотнокислый аммоний 0,1
Двузамешенный фосфорно-
0,01
ОД1-0,О1 0,047-0,001 0,0012-0,0001 0,000016-0,ОО0001 0,000017-0,000001
Сернокислое железо 0,ОО152-О,ОООО1
Водаос гальное
Продуцент выращиваемся на предлагаемой питательной среде в течение трех при постоянной аэрации среды при 25128 С. Накопление фермента в культураль ной жидкости происходит без введеиия ин|дукторов. Культуральная жидкость после удаления мицелия путем центрифугирования при скорости вращения 6.ООО об/мин в те:Чение 15 мин служит исходным материалом для получения ферментного препарата.
Пример. Ферментационная среда, состава, %:
Соевая мука0,3
Глюкоза0,5
Л/Яу/VO;,0.1
KS НРОу0,01 С а ,11 ,0,0012 .,047 hcSOif0,00152 СиВОч0,ОО0016 Zn.SOv0,000017 засевается маточной культурой npofljTieHTa Actlnomyces recifensis trar. tijiicu.& 2435, предварительно выращенной в течение 2-3 суток на жидкой среде Чапека. В среду вводят 8-10% посевного материала. Культивирование ведут трое суток в условиях активности аэрации и постоянном перемешивании среды при 25-28 С. После окончания инкубации культуральную жидкость с рН 7.9-8,9 освобождают от мицелия и неиспользованных компонентов питательной cpe ды путем центрифугирования при ско;рости. вращения 6000 об/ мин в течение 10-15 мин, при этом культуральная жидкость содержит сырой литический фермент и используется в дальнейшем для его получения. Ферментный препарат извлекают путем насыщения культуральной жидкости сернокислым аммонием до 0,4, солевой раст,вор ос- тавляют при 4 в течение 16-3.8 час для формирования осадка белка. Затем осадок собирают фильтрованием или центрифугированием при пониженной температуре, промывают холодным ацетоном, подсушивают и растворяют в сукцинатном бу фере (рН -4,5, м-0,О2), раствор белка диализуют гкютив растворителя, обесс07генный диализат высушивают при О под вакуумом. Литическую активность определяют в прозрачной культуральной жидкости (активность сырого фермента) и в растворах ферментного белка следующим образом, К 2 мл суспензии живых клеток тесткультуры Stapfi а иге usдобавляют 2 мл культуральной жидкости или фермент«ого раствора. Исходную плотность полученной суспензии измеряют на желтом светофильтре ФЭК-М (не должна превышать 2,О), термостатируют при 37 в течение бО мин, при этом изменения мутности фиксируют через каяадые 15 мин. Степень лизиса клеток тест-культуры определяют по формуле: at - аа. . 100, где: Ctt ajL плотность исходной суспензии, а - плотность суспензии через 6О мин. Об активности фермента судят по степени лизиса и его скорости. Данные, характеризующие степень литической активности фермента-сырца, содержащегося в культуральной жидкости в результате выращивания продуцента ctinomyces recifensis tran fyttCUS 2435 на предлагаемой среде, приведены в таблице 1. Таблица 1
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ получения литических ферментов | 1973 |
|
SU519470A1 |
| Питательная среда для выращивания посевного материала асSINомYсеS RecIFeNSIS VaR еLYтIсUS 2435 | 1981 |
|
SU981359A1 |
| Питательная среда для выращивания продуцентов литических ферментов | 1972 |
|
SU439512A1 |
| Способ получения эндо-N-ацетилмурамидазы и комплекса лизирующих ферментов | 1990 |
|
SU1781296A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ | 1984 |
|
RU1549227C |
| БАКТЕРИОЛИТИЧЕСКИЙ КОМПЛЕКС, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ШТАММ ДЛЯ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ СПОСОБА | 2000 |
|
RU2193063C2 |
| Способ получения ферментного препарата липоксигеназы | 1980 |
|
SU888542A1 |
| Штамм дрожжей JaRRoWIa LIроLYтIса-продуцент липазы и питательная среда для его культивирования | 1987 |
|
SU1454852A1 |
| ШТАММ STREPTOMYCES SP. - ПРОДУЦЕНТ РИФАМИЦИОНОКСИДАЗЫ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИФАМИЦИНОКСИДАЗЫ | 1992 |
|
RU2032744C1 |
| Способ получения литических ферментов | 1972 |
|
SU439514A1 |
В таблице 2 приведены дшшые о вдияний 45 изменения концентрации веществ, входящих
Таблица 2. состав среды, на литическую активность получаемого ферментного препарата. Примечание. Активность фермента на
Предлагаемая питательная среда для культивирования продуцентов литических ферментов по сравнению с известной псюышает активность ферментного препарата более, чем в два раза, при уменьшении длительности ферментации также, примерно, в два раза.
Формула изобретения
Продолжение таблицы 2
хлористый кальций, хлористый магний, хлористый марганец, сернокислую медь, серкокислый цинк и сернокислое железо, при этОМ указанные компоненты содержатся в следующих количествах, вес.%:
Соевая мукаО,3-О,7
Глюкоза0,5-0,6
Азотнокислый аммоний0,1
Двузамещеиный фосфорно0.01
кислый калий
0,11-0,01 Хлористый кальций 0,047-0,001 Хлористый магний 0,0012-0,0001 Хлористый марганец О,ОООО16Сернокислая медь О,ООО001
Сернокислый цинк ,0,000017-0,000001 Сернокислое железе 0,00152-0,00001 Водаостальное. предлагаемой среде принята за 1ОО%.
