Способ выделения чистых культур холерных вибрионов Советский патент 1977 года по МПК C12K1/06 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, оно может быть использовано в лабораториях, запятых бактериологической диагностикой заболеваний, вызванных холерными вибрионами, выявлением холерных вибрпоисносителей среди здорового населения, исследованием на зараженность холерой воды, ппп1,евых продуктов н других объектов внешней среды. При всяком бактериологическом исследовании на наличие холерного вибриона основной задачей является выделение этого микроба в чпстой культуре. Это вызвано тем, что во всех материалах, доставляемых в лаборатории для анализа, содержится многообразная посторонняя гликробиая флора, в смеси с которой возбудитель холеры, если он там имеется, не может быть идеитифицирован. Р1звестный способ выделения чистых культур холерных вибрионов из различных материалов заключается в том, что осуществляют посев исходного материала на поверхность элективной для холерных вибрионов плотной питательной среды и инкубироваиие микрооргаиизмов на этой среде 1. Известный способ весьма длительный и трудоемкий в связи с необходимостью повторных пересевов из жидких сред в жидкие и на Плотные среды. С целью устранения заказанных недостатков предлагается посев осуществлять на полужидкую среду локализованно относительно поверхности, на которой возможен рост холерного вибриона, или относительно объема среды, в котором возможен рост холерного вибриона. Предложенный способ основан на высокой естественной подвижности холерных вибрионов. Возбудители холеры относятся к числу наиболее подвпжиых бактерий, в результате чего в соответствующих условиях они значительно опережают другие виды бактерий при размножении на поверхности и в толще полужидких агарово-желатиновых сред. Таким образом, на границе роста бактерий и еще не заселенной бактериями среды холерные вибрионы могут быть изолированы (высеяны) в чистой культуре. Пример. В U-образную трубку диаметром 12 мм заливают полужидкую агарово-желатиновую среду следзющего состава (в г): Вода дистиллированная100,0 Агар Дифко0,2-0,3 Желатин3,0 Пептон1,0 Патрий хлористый0,5 Кислота борная (1%-ный раствор)2 мл

Бромтимоловый синий

(1%-ный раствор)0,5 мл

Сахароза1,0

(рН среды8,5-8,7)

Среду заливают в стерильные трубки так, чтобы высота столбика среды в каждом колене не превышала 35-40 мл. Оба колена трубки закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют в автоклаве при 112°С в течение 20 мин. Одновременно с этим в чашки Петри разливают по 17-20 мл среды, состав которой отличается от приведенного выше только тем, что агара Дифко берут 0,3-0,4 г, 1%-ного раствора борной кислоты 5 мл на 100 мл среды.

В обеих средах борная кислота может быть заменена таурохолатом натрия или дезоксихолатом натрия в концентрации 0,3-0,5% по весу. Любой материал от обследуемых лиц: испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, желчь и т. п., собранный в 1 % -ную щелочную иептонную воду или другой консервант и доставленный в лабораторию, засевают пастеровской пипеткой в одно колено U-образной трубки и па центр чашки Петри в количестве 0,05-0,1 мл, дают внитаться лсидкости в среду и помешают в термостат про 37°С. Просмотр трубок н чашек производят, иачпная с 10 час инкубации п позже- до 22-24 час. В этот период холерные вибрноны, размножаясь, продвигаются по питательной среде и при этом значительно опережают другие подвижные бактерии. За 12- 16 час роста в термостате все штампы холерных вибрионов успевают продвннуться в трубках на 50-60 мм, а на чашках образуют макроколоиии диаметром 45-50 мм.

При этом на границе роста и в трубке и на чашке вибрионы находятся в чистой культуре. Границу подвижного роста легко определяют по нзмененню синего цвета среды на оранжево-желтый, так как холерные вибрионы в

процессе жизнедеятельности ферментируют сахарозу и образующаяся при этом кислота изменяет цвет индикатора.

Чистую культуру вибриона для рассева, испытаиля ферментной активности, испытания с ({)агами и агглютинации получают из иротнвоиоложного засеянному колена трубки или с периферического края макроколонии на чашке Петри. Дублированный посев на чашку и в

трубку значительно увеличивает надежность способа.

Предварительный положительный результат при исследовании с нспользоваиием предлагаемого способа может быть получен уже

через 14-16 час, а окончательный результат-через 20-24 час после доставки материала в лабораторию.

Предлагаемый способ позволяет сократить в 2,5-3 раза трудовые и материальные затраты при сохранеинн эффективности бактериологического исследования.

Форм у л а и 3 о б р е т е н и я

Способ выделения чистых культур холерных вибрионов из различных материалов, включающий иосев исходного материала на элективную для холерных вибрионов питательную среду и инкубирование микрооргакизмов на этой среде, отличающнйся тем, что, с целью сокращения сроков выделения холерных вибрионов и упрощения способа, посев осуществляют на полужидкую среду локализованно относительно поверхностн, на

которой возможен рост холерного вибриона, или относительно объема среды, в котором возможен рост холерного вибриона.

Источники информацни, принятые во внимание прн экспертизе:

1. Е. PL Коробкова «Микробиология и энндемиология холеры, М, Медгиз, 1959, с. 181 -186 (прототии).