Способ выделения ферментов Советский патент 1976 года по МПК C12D13/10 

Жидкость, образующаяся при концентрации пены, представляет собой очищенный ферментный препарат, содержащий следы сульфата аммония (0,1-0,2%) Количество образовавшейся жидкости составляет 0,1-0,5 % от первоначально го объема нативного раствора или экстракта. Пример. Культивирование микроорганизмов - продуцентов пектолитических ферментов осуществляют при оптимальных условиях в ферментере емкостью 65 м на питательной среде соответствующего состава. Для отделения биомассы глубинную культур|у фильтруют а ферментный раствор концентрируют. Ферменты выделяют из концентрата путем добавления сульфата аммония до ко эффициента насыщения 0,8 с таким расчетом, чтобы рН смеси был равен 4,5 (подкисление проводят 0,1 н НзРО.ДО рН 2,5-3,0). Смесь активно перемешивают . После полного растворения сульфата аммония смесь барботируют воздухом в количестве О,i объема на объем смеси в 1 мин.Образующуюся пену собир ют и гасят силиконовым пеногасителем количестве 0,001% к объему собираемой воздушной суспензии /пены/. Перемешивание и барботаж заканчивают с прек ращением пенообразования.После добавления пеногасителя, пена гасится и образующаяся жидкость представляет со бой высокоактивный очищенный концентрат пектолитических ферментов, из которого препарат выделяют методом лиофильной сушки. С 1 м культуральной жидкости после вакуум - концентрирования подучают 100 л концентрата, а после осаждения сульфатом аммония, сбора и гаше ния пены-2,2 л ферментного раствора, высушенного на лиофильной сушилке. Выход препарата по активности к вакуум-концентрату 97,8%. П р и м е р 2. Получение ферментного раствора пектолитических ферментов осуществляют аналогично методу, описанному в примере 1. Ферменты выделяют из концентрата путем добавления сульфата аммония до коэффициента насыщения 0,8 с таким расчетом, чтобы рН смеси был равен 3,8 (подкисление проводят 0,1 н. до рН 1,8-2,3). Далее выделение ферментов аналогично способу, описанному в примере 1. Выход пектолитических фарментов в препарате по активности 95,2 Пример 3. Культивирование мик роорганизмов-продуцентов амилолитичес ких ферментов осуществляют при опти1мальных условиях в ферментере емкость 50 питательной среде соответствующего состава.Ферментный раствор освобождаютОТ биомассы и концентриру ют. Амилазу выделяют из концентрата путем добавления сульфата аммония при нативном перемешивании до коэффициента насыщения 0,7 с таким расчетом,чтобы рН смеси был равен 5,9 ( подкисление ферментного раствора проводят О,1 н, рН 3,9-4,2). После растворения сульфата аммония смесь при перемешивании барботируют воздухом в количестве О,1 объема на объем смеси в 1 мин. Образующуюся пену собирают и гасят механическим способом. Перемешивание и барботаж останавливают с прекращением пенообразования . После пеногашения из воздушной суспензии получают высококонцентрированный очищенный раствор амилазы. Из концен грата ферментный препарат выделяют лиофильной сушкой. Выход амилазы по активности в препарате 95%. П р и м е р 4. Культивирование микроорганизмов - продуцентов щелочных и нейтральных протеолитических ферментов осуществляют при оптимальных условиях в ферментерах емкостью 50 питательной среде соответствующего состава. Ферментный раствор освобождают от биомассы и концентрируют. Ферменты выделяют из концентрата путем растворения сульфата аммония в концентрате до коэффициента насыщения 0,7 с таким расчетом,чтобы рН смеси был равен 6,5 (подкисление проводят 1 H.CHjCOOH до рН 4,5-5,0).Смесь интенсивно перемешивают и после растворения сульфата аммония барботируют воздухом в количестве О,1 объема на объем смеси в 1 мин. Образующуюся пену собирают и гасят силиконовым пеногасителем в кол;ичестве 0,002% к объему собираемой воздушной суспензии. Перемешивание и барботаж заканчивают с прекращением пенообразования.После добавления пеногасителя из пены получают высококонцентрированный ферментный раствор, из которого выделяют препарат методом лиофильной сушки. Выход протеолитических ферментов в препарате по активности 91%. П р и м е р 5. Культивирование микроорганизмов - продуцентов кислой протеазы осуществляют при оптимальных условиях в ферментере емкостью 65 м на среде соответствующего состава. Глубинную культуру отделяют от биомассы и ферментный раствор концентрируют . Кислую протеазу выделяют из концентрата путем добавления сульфата аммония до коэффициента насыщения 0,8 с таким расчетом, чтобы рН смеси был равен 5,5 (ферментный концентрат подщелачивают 10% до он 3,0-3,8). Смесь активно перемешивают и после полного растворения сульфата аммония барботируют воздухом в количестве 0,15 объема на объем смеси в 1 мин.