Способ выделения 6-аминопенициллановой кислоты или ее солей Советский патент 1977 года по МПК C07D499/18 C07D499/42 

(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ 6-АМИНОПЕНИЦИЛЛАНОВОЙ КИСЛОТЫ ИЛИ ЕЕ СОЛЕЙ растворителя зависит от растворимости в нем ФУК или ФЕУК и их солей, а также о растворимости 6-АПК или ее солей в данн растворе. При сушке распылением при рН 2 ФУК или ФЕУК экстрагируют ацетоном, н-бутанолом, этилацетатом, хлороформом, бутилацетатом и бензолом, предпочтительно этил ацетатом и н-бутанолом. Когда сушку распылением проводят при рН 8 ФУК или ФЕУК экстрагируют обычно метилизопропилкетоном. При последующей сушке распылением при рН 6 ФУК или ФЕУ экстрагируют 95%-ным водным ацетоном. При выделении 6-АПК предлагаемым си собом можно сначала подкислить гидролизный раствор соляной кислотой до рН 2, затем провести экстракцию ФУК или ФЕУК, например амилацетатом или н-бутанолом, этилацетатом или хлороформом, метиленхло- ридом, бензолом или толуолом, и подвергнут оставшийся лосле экстракции раствор сушке распылением при рН 2. В первом варианте предлагаемого способа, когда гидролизный раствор сушат распылением при рН 2-8 с последующим экстраги рованием ФУК или ФЕУК, более желательной является сушка раствора распылением при рН 6-8, рН 4 или рП 2 с использованием в качестве экстрагента 95%-ного ацетона, метили- зопропилкетона или этилацетата соответственно. Во втором варианте предлагаемого способа, когда из гидролизного раствора сначала экстрагируют ФУК или ФЕУК, а затем проводят сушку распылением при рН 2-8, более желательным является использование в качестве экстрагента н-бутанола с послед по- ш.ей сушкой распылением при рН 7. В слзчае сушки распылением при рН 2 в качестве экс трагента применяют амилацетат, а при сушк распылением при рН 4 - метилизопропилкето Полученцая в той или иной форме 6-АПК может быть дополнительно очищена или непосредственно использована для синтеза других пенициллинов. П р и fv э р 1 . В суспензию 26,7 г Pf oteuS f-ettgShi п.1тамм АТСС 925О в 1500 мл воды добавляют 80 г натриевой соли бензилпенициллина, перемешивают 10 час при рН 8,0 и 37 С, поддерживая рН 8,0 периодическим добавлением 2 н, едкого натра, отфильтровывают клеточный материал, сушат раствор распылением и получают 92,4 г тверёбдои массы, состоящей в основном из натриевой соли 6-АПК и фенилацетата натрия. Твердую массу экстрагирзтот 2 х 750 мл 95%ного водного ацетона, отфильтровывают твердое вещество, промывают, сушат и получают 60 58,2 г продукта, содержащего 80% натриевой соли 6-АПК. Аналогичные результаты получены при использовании 27 rE.CoPi штамм 9637 и 83,6 г натриевой соли бензилпенициллина или 27 г Aspe/giP&US fBovUS штамм 13608 и 84 г натриевой соли феноксиметилпенициллина. Пример 2 . Рас1-;епляют рроteuS rettget i штамм АТСС 9250 в ультразвуковой ванне, центрифуг ируют, светлый всплывший слой подвергают диализу и лиофи- ;шзации и получают неочишенную пенициллин-ацилазу, в раствор 2 г которой в 15О мл iАX воды вводят 8 г калиевой соли бензилпенициллина и перемешивают 10-20 час при 37°С и рК 8,0, добавляя при необходимости 2 н. едкое кали. Раствор переносят в ультрафильтрующую установку, пропускают через полупроницаемую мембрану под давлением азота, полученный раствор, почти не содержащий протеина, сушат распылением, экстрагируют твердое вещество 95%-нь)м водным ацетоном и выделяют неочищенную калиевую соль 6-АПК с высоким выходом. Подобные результаты получены при использовании пенициллин-ацилазы, полученной расщеплением Е.Сэй- штамм АТСС 9637 или Aspвhg fifiuS fBavuS штамм АТСС 13608, и калиевой соли бензилпенициллина (8,4 г) или феноксиметилпенициллина соответственно. П р к м е р 3. Пенициллин-ацилазу, полученную из Pi oteus i ettgehi штамм АТСС 9250, иммобилизуют на пористом стекле, добавляют к 4%-ному раствору калиевой соли бензилпенициллина в количестве, достаточном для завершения гидролиза за 12-18 час при 37°С и рН 8,0. РеакционHJTO смесь фильтруют, светлый раствор с рН 8,0 сушат распылением, твердое вещество экстраг;фуют 95%-ным водным ацетоном и получают калиевую соль 6-АПК. Результаты получены при использовании пенициллин-ацилазы, полученной из E.CD0J штамм 9837 или Asper gJSPus fPovus штамм АТСС 136О8 (.в последнем берут калиевую соль феноксиметилпеницилли- на). Пример 4. К 45 г калиевой соли бензилпенициллина в 200 мл метиленхлорида добавляют 32 мл N , N -диметиланилина, размешивают 30 мин, добавляют по каплям 12 мл диметилдихлорсилана, поддерживая температуру ниже 30 С. охлаждают до-50°С. сразу же прибавляют 27 г пятихлористого фосфора, перемешивают 2 час при -40 С. охлаждают до -65с, вводят 6,4 мл N,N -диметиланилина и 20О мл н-бутанопа, поддерживая температуру ниже -40 С, интенсив но перемешивают 3 час при -40°С и дают нагреться до комнатной температуры, одновременно добавляя при непрерывном перемешивании 250 мл дистиллированной воды. ФУК экстрагируют н-бутанолом, водный слой подщелачивают до рН 8,0 добавлением 2 н. едкого кали, слой сушат распылением и получают 47,4 твердого вещества, содержащего 75% калиевой соли 6-АПК. Аналогичные результаты получены при ис пользовании калиевой соли феноксиметилпе- нициллина и пенициллин-ацилазы, полученной из Е СоО штамм АТСС 9637. Пример 5. Из 5%-ного раствора калиевой соли бензилпенициллина аналогично примеру 2 после фильтрации получают светлый раствор с рН 8,0, к которому добавляют соляную кислоту до рН 4,0, сушат распылением, образовавшееся твердое вещество светло-желтого цвета отмучивают нес- сколько раз в метилизопропилкетоне для уда ления ФУК, отфильтровывают, сущат распы- пением и выделяют 6-АПК с высоким выходом. Пример 6. Как в примере 3,75 г пористого стекла, на котором иммоби .изова- на пенициллин-ацилаза, полученная из Asper1 ПЛ..лЛ.1 m J-4 f rf .-, .-ч ,-, gi86uS fBavue штамм АТСС 13608, вводят в 1 л 3%-ного водного раствора калиевой соли феноксиметилпенициллина, осторожно перемешивают 18 час при 37°С и рН 8,0 светлый фильтрат подкисляют 6 н. соляной кислотой до рН 2,0, сушат распылением, полученное желтоватое твердое вещество экстрагируют этилацетатом для отделения ФЕУК и отделяют неочищенный гидрохлорид 6-АПК Пример 7. 1500 мл 7%-ного водного раствора калиевой соли бензилпенициллина обрабатывают ЗОО г пористого стекла, на котором иммобилизована пенициллин-аци- лаза, полученная из PfoteuS (ettgei i штам АТСС 925О, осторожно перемешивают 2О час при 37°С и рН 8,0, фильтруют, добавляют к фильтрату 6 н. соляную кислоту до рН 2,0 и экстрагируют амилацетатом, сушат водную фазу распылением и получают твердый гидрохлорид 6-АПК. Пример 8. В 10ОО мл 5%-ного водного раствора калиевой соли феноксиметилпенициллина вводят 120 г пористого стек ла, на котором иммобилизована пенициллин- -ацилаза, полученная из A5pet-gJ6BuS ffiavUS штамм АТСС 13608, осторожно перемешивают 18 час при 37°С и рН 8,0, фильтруют, доводят рН фильтрата до 2,0 добавлением 6 н. соляной кислоты, экстрагируют ФЕУК н-бутанолом, добавляют к водному слою едкий натр до рН 4,0 и получают неочищенную 6-АПК. Пример 9. В раствор 2,0 г пенидиллин-ацилазы полученной аналогично примеру 1 из AspergttEus fiavus штамм 13608, в 150 мл воды добавляют 75 г калиевой соли бензилпенициллина, перемешивают 18 час при 37°С поддерживая рН 8 добавлением 2 н. едкого кали, пропускают через полупроницаемую мембрану под давлением азота, доводят рН фильтрата до 2,0 с помощью соляной кислоты, экстрагируют ФУК метилизопропилкетоном, доводят рН водного слоя до 7,0 добавлением 4 н. едкого кали, сушат распылением и получают твердое вещество, состоящее в основном из неочищенной калиевой соли 6-АПК. Пример 10. Как в примере 3, из 2%-ного раствора калиевой соли феноксиметилгпенициллина и пенициллин-ацилазы, полученной из AspQhgHPPuS fPaVus штамм 13608, после фильтрования и сушки фильтрата (рН 8) распылением получают беловатое вещество, которое экстрагируют холодным метанолом для отделения калиевой соли ФЕУК, и отделяют неочищенную калиевую соль 6 - АПК с высоким выходом. Пример 11. Проводят опыт, как примере 3, используя 4%-иый водный раствор натриевой соли бензилпенициллина и под- - - лг -rtfi ттТТ .-ЧГТ: ТХ TTrrj-iUTJTTU ТТ rlTJtTQ ТД ГТО П кисляя фильтрат до рН 4,0 с помощью 6 н. соляной кислоты. После сушки распылением белое твердое вещество экстрагируют метилзопропилкетоном и получают 6-АПК. Пример 12. Аналогично примеру 10 при использовании 4%-ного раствора натриевой соли феноксиметилпенициллина и подкисления фильтрата соляной кислотой до рН 4,0 после сушки распылением получают белое твердое вещество, которое обрабатывают несколько раз метилизопропилкетоном и отделяют 6-АПК с высоким выходом. Пример 13. 3%-ный раствор калиевой соли феноксиметилпенициллина обрабатывают, как в примере 1О, подкисляют светлый фильтрат 6 н. соляной кислотой до рН 2,0, полученное твердое вещество светложелтого цвета отмучивают несколько раз в бутилацетате для растворения ФЕУК, отфильтровывают, сушат распылением и выделяют гидрохлорид 6-АПК с высоким выходом. Пример 14. 4%-ный раствор калиевой соли бензилпенициллина обрабатывают подобно примеру 2, к полученному светлому раствору добавляют соляную кислоту до рН 2,0, дважды экстрагируют этилацетатом, сушат водный слой (рН 2,0) распылением и получают гидрохлорид 6-АПК с высоким выходом. Пример 15. раствор натриевой соли бензилпенициллина обрабатываю как в примере 3, поддерживая рН 8,0, добавлением 2 н, едкого натра, полученный светлый фильтрат подкисляют 6 н. соляной кислотой до рН 2,1, несколько раз экстраги руют метилизопропилкетоном, к водному сло добавляют 4 н. едкий натр до рН 7,3, суша распылением и отделяют натриевую соль 6-АПК с высоким выходом. Пример 16. Из 5%-ного раствора натриевой соли феноксиметилпенициллина, ка в примере 10, получают светлый фильтрат, который подкисляют 6 н. соляной кислотой до рН 2,0, экстрагируют бутанолом, отделя ют водный слой, доводят рН до 4,0 добавле нием едкого натра, сушат распылением и по лучают неочищенную 6-АПК. Формула изобретения 1.Способ выделения 6-аминопенициллан вой кислоты или ее солей из гидролизного раствора, содержащего 6-аминопенициллано- вую кислоту в концентрации 2-10 вес.% на единицу объема и фенилуксусную или феноксиуксусную кислоту, отличаюшийс я тем, что, с целью упрощения процесса сначала гидролизный раствор сушат распыле нием при 125 - 275 С при рН 2-8, а затем фенилуксусную или феноксиуксусную кислоту экстрагируют органичес ким растворителем или наоборот. 2,Способ по п. 1, отличающийся тем, что раствор сушат при рН 6-8. 3,Способ по п. 2, отличаю - щ и и с я тем, что, фенилуксусную или фе- ноксиуксусную кислоту экстрагируют 95%-ны водным ацетоном, 4.Способ по п. 1, отличающ и и с я тем, что раствор сушат распылением при рН 4,0. 5.Способ по п. 4, отличающийс я тем, что фенилуксусную или феноксиуксусную кислоту экстрагируют метилизопропилкетоном. 6.Способ по п. 1, отличающийся тем, что раствор сушат распылением при рН 2. 7.Способ по п. 6, отличающий с я тем, что фенилуксусную или ф. ноксиуксусную кислоту экстрагируют этилацетатом. 8.Способ по п. 1, отличающийся тем, что фенилуксусную или феноксиуксусную кислоту экстрагируют н, -бутанолом. 9.Способ по п. 8, отличающийся тем, что сущку распылением проводят при рН 7. 10.Способ по п. 1, отличающийся тем, что фенилуксусную или феноксиуксусную кислоту экстрагируют амилацетатом. 11.Способ по п. 10, отличающийся тем, что раствор сущат распылением при рН 2. 12.Способ по п. 1, отличающийся тем, что фенилуксусную или феноксиуксусную кислоту экстрагируют метипизопропилкетоном. 13.Способ по п. 12, отличаюийся тем, что раствор сущат распыле ием при рН 4. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе; 1.Патент Великобритании № 896245, 2{3) А, 16 05.62. 2.Патент США № 3272715, 195-36, 13.09.66. 3.process BtocFLem.,(Eae-),{1966), 1 (7), 373-377.