Изобретение относится к микробиологической промышлеиности и касается применения тиосеми,карбазона-3 1-метилизатина и его производного 1,6-бис - (1 - метилизатинтиосемикарбазон - 3 - ил-4)гексана общей формулы , -Mi - с -NHR 0S где R - водород или -(СН2)б-, в качестве органических реактивов для качествениого определения пролина, в частности для специфического проявления пятен пролина на хроматограммах, и может быть использовано в биохимических и клинических лабораториях. Незамещенный тиосемикарбазон-3 1-метилизатин, известный под названием Метисазоп, применяется в настоящее время только в качестве лекарственного средства 1. Для выявления аминокислот применяют очень много реагентов, из которых наиболее известны нингидрин, аллоксан, незамещенный изатин, хинизатин, индандион-1,3 2. Указанные соединения неспецифичны для отдельных аминокислот и применяются наиболее часто для полихромного проявления этих кислот на фоне тонкослойных хроматограмм. Целью изобретения является выявление среи производных изатина соединений, которые могли бы быть использованы в качестве специфических ироявителей пятен аминокислот на хроматограммах. Это достигается применением известного лекарственного препарата метисазона и его производных в качестве специфических реагентов лишь на пролии, которые позволяют идентифицировать его наличие даже в смеси с другими L-аминокислотами. При взаимодействии пролина с тиосемикарбазоном-3 Ьметилизатина образуется соединение, для которого определен максимум поглощепия Ямакс 586 им (в метаноле). Пример 1. На хроматографическую бумагу Filtrak № 14 наносят микропипеткой по 0,01 мл, 0,02 мл, ... до 0,07 мл водного раствора, содержащего в 1 мл 0,02 мг пролина. После кратковременного высушивания ири 50°С бумагу протягивают через 0,4%-ный раствор метисазона в ацетоне, подкисленном уксусной кислотой (смесь 96 мл ацетона и 4 мл ледяной уксусной кислоты). Затем бумагу помещают на 3-5 мин в термостат, нагретый до 115°С, при этом пятна, содержащие 1 мг и более пролина, окрашиваются в зеленый цвет. Аналогично проявляют пятна пролина при помойки 1,6 - бис - (1 - метилизатинтиосемикарбазон - 3 - ил - 4)-гексана, применяя более
сильно подкисленные (до получения прозрачного раствора) растворы препарата. Чувстви,,n-r-NlcH,,- ai-c-3JiT-N . А.-Ч
СНз
Пример 2. Одну каплю водного раствора аминокислот, содержащую по 1- мг DL-a-аланина, L-аргинина солянокислого, аминоуксусной кислоты, L-аспарагина, DL-p-аланина, ВЬ-р-фенил-а-ала.нина, DL-валЕна, L-гистидина солянокислого, L - глутаминовой кислоты, DL - лейцина, DL - лизина солянокислого, DL-метионина, DL-норвалина, DL-норлейцина, DL-орнитина солянокислого, L - цистеина солянокислого, DL - серина, DL - триптофана, L-оксипролина и пролина, наносят на хроматографическую бумагу Filtrak № 14. Бумагу высушивают и производят хроматографирование в системе растворИ|Телей н-бутиловый спирт - ледяная уксусная кислота - вода (4: 1 :5- верхний слой). Через 18 ч хроматограмму высушивают в термостате при 70°С и опрыскивают растворами (как в примере 1) тиосемикарбазона-3 1-метилизатина и его гексаметиленбиспроизводного. После нагревания хроматограммы в течение 3-5 мин при 115°С проявляются только пятна пролина.
Предлагаемые реагенты не дают цветных пятен на хроматограммах с L-аминокислотами (за исключением пролина), даже в количестве 20 мг. В то же время пролин дает заметное зеленое пятно уже при количестве 1,0 мг, при 20 мг пятно является темно-синезеленым, фон хроматограммы - светло-оранжевый.
тельность выявления пролина почти аналогична предыдущему способу.
Предлагаемые реагенты позволяют быстрее и качественнее по сравнению с существующими методами проводить анализ но определению наличия пролина в аминокислотной смеси.
Формула изобретения
Применение тиосемикарбазона-3 1 - метилизатина и его производного 1,6-бис-(1 - метилизатинтиОСемикарбазон - 3-ил-4)гексана общей формульг
:N-i H-с-NHR
Од 0s
СНз
где R -1 водород или - (СП2)б-, в качестве реактива для качественного определения пролина.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1.Патент США № 3253991, кл. 424-274, 1966.
2.Аналитические методы белковой химии. М., изд-во иностранной литературы, 1963, с. 491-560.
